一、人胰腺癌细胞株放射敏感性的体外研究（论文文献综述）
张翌[1]（2020）在《LncRNA TMPO-AS1通过调节miR-873-3p/TRIM11轴影响胰腺癌自噬的作用与机制研究》文中进行了进一步梳理目的:胰腺癌是一种恶性程度很高,诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤,约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。5年生存率<1%,是预后最差的恶性肿瘤之一。越来越多的研究发现长链非编码RNA（1ncRNA）在胰腺癌（PC）的进展中发挥显着的作用。TMPO antisense RNA 1（TMPO-AS1）是近年来被发现在多种肿瘤中发挥作用,然而其在PC中的作用尚不清楚。方法:采用RT-PCR检测PC组织中TMPO-AS1的表达,分析TMPO-AS1表达水平和患者临床病历资料以及预后的相关性。在体外实验中,分别实施敲低和过表达实验验证TMPO-AS1对（PC-3和PANC-1）增殖,迁移和上皮间质转化（EMT）的作用。此外,采用生物信息学分析TMPO-AS1的下游分子靶点,采用双荧光素酶实验和RNA免疫共沉淀（RIP）实验验证TMPO-AS1和miR-873-3p,miR-873-3p和TRIM11的关系。采用 Western blot检测TRIM11和Akt的蛋白表达。结果:TMPO-AS1在PC组织中显着上调,且与PC肿瘤体积,不良预后密切相关。过表达TMPO-AS1显着促进了 PC-3细胞的增殖,迁移和EMT,而敲低TMPO-AS1则抑制了 PANC-1细胞的增殖,迁移和EMT.此外,miR-873-3p是TMPO-AS1的靶点。过表达miR-873-3p抑制了 PC的进展,并削弱了TMPO-AS1的促癌效应。进一步机制研究证实,miR-873-3p靶向TRIMP11的3’非翻译区（3’UTR）.敲低TRIMP11抑制了 PC的增殖,迁移和侵袭,减弱了 Akt的活化。进一步探究TRIM11下游的机制表明,敲低TRIM11可以通过抑制自噬降低PC的增殖、侵袭与迁移。结论:TSMPO-AS1通过调节miR-873-3p/TRIM11轴调控PC的自噬,从而促进PC的增殖,迁移和EMT。
王振勇[2]（2020）在《TPD52对胰腺癌生物学行为的影响及机制研究》文中研究说明胰腺癌是恶性肿瘤中死亡率最高的一种癌症,发病率呈逐年升高的趋势。因其早期诊断困难,大部分患者确诊时已发展到癌症晚期,且现有治疗手段效果欠佳。寻找胰腺癌早期诊断的生物标志物以及针对胰腺癌开发靶向药物具有十分重要的意义。肿瘤蛋白D52（tumor protein D52,TPD52）基因家族是近年来被发现的一类原癌基因,与多种实体肿瘤的发生发展相关。然而,目前关于TPD52在肿瘤发生发展中更加深入的研究数量相对较少,在胰腺癌中可能的作用机制也不明确。本研究首先在组织水平研究胰腺癌组织中TPD52表达与患者临床生物学行为的关系;然后在细胞水平研究TPD52对胰腺癌细胞生物学行为（如细胞增殖、迁移和侵袭）的影响及其机制;最后通过建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察TPD52对裸鼠皮下移植瘤生长的影响,以期为胰腺癌病情的综合评估和分子靶向治疗提供依据。第一部分胰腺癌组织中TPD52表达与患者临床生物学行为关系的研究目的:本研究通过检测TPD52在胰腺癌组织中的表达情况,分析TPD52与患者临床生物学行为的相关性,探讨TPD52在胰腺癌诊治中的临床价值。方法:1. 收集自2014年1月至2018年10月河北省沧州市中心医院收治的、经病理确诊且有完整随访资料的115例胰腺导管腺癌患者石蜡包埋组织标本。2.应用免疫组织化学技术检测配对的胰腺癌组织和癌旁正常胰腺组织中TPD52蛋白的表达水平。3.采用卡方检验或Fisher确切概率法分析胰腺癌组织中TPD52的表达与患者临床病理特征的关系。4.采用Kaplan-Meier法、Cox风险回归模型分析胰腺癌组织中TPD52的表达与患者预后的关系。结果:1.TPD52主要在细胞胞浆及细胞膜中表达,胰腺导管腺癌组织中TPD52呈不同程度的阳性表达,阳性表达率85.22%（98/115）。2. 胰腺癌组织中TPD52的表达水平与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤原发病灶情况、区域淋巴结转移情况、肝转移及门静脉侵犯无关（P?0.05）。3. 根据病理组织分化程度分为高分化组、中分化组、低分化组,TPD52阳性表达率分别是33.30%、70.50%、72.20%,三组间TPD52阳性表达率的差异有统计学意义（X2=9.593,P<0.05）。4. 肿瘤神经浸润组与无肿瘤神经浸润组TPD52阳性表达率分别是74.00%、50.00%,两组间TPD52阳性表达率的差异有统计学意义（X2=6.754,P<0.05）。5. 根据病理TNM分期分为Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组、Ⅳ期组,TPD52阳性表达率分别是42.90%、71.00%、75.00%、80.00%,四组间TPD52阳性表达率的差异有统计学意义（X2=7.829,P<0.05）。6. TPD52阳性表达组患者m OS为21个月,TPD52阴性表达组患者m OS为31个月,两组之间m OS的差异有统计学意义（X2=9.986,P<0.05）。区域淋巴结转移、肝转移和TPD52表达情况被认定为影响OS的独立危险因素（P<0.05）,对OS的相关危险度分别是2.517、12.467和2.070。小结:1.胰腺导管腺癌组织中TPD52表达水平与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤原发病灶情况、区域淋巴结转移情况、肝转移及门静脉侵犯无关。2.TPD52的表达水平与胰腺癌组织分化程度、肿瘤神经浸润及病理TNM分期有关。3.TPD52阳性表达组患者m OS显着低于TPD52阴性表达组。区域淋巴结转移、肝转移和TPD52表达情况是影响胰腺癌患者OS的独立危险因素。4.TPD52有可能成为判断胰腺癌患者生物学行为和预后的特异性生物学标志物。第二部分抑制TPD52基因表达对胰腺癌细胞生物学行为的影响目的:观察抑制TPD52基因表达对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法:1.构建sh RNA重组质粒,转染胰腺癌细胞,筛选稳定转染细胞株。按实验计划分组:亲本组、对照组、转染组。2.RT-PCR及Western blot检测TPD52-sh RNA转染对胰腺癌细胞TPD52 m RNA水平及蛋白表达的影响。3.CCK-8实验检测TPD52-sh RNA转染对胰腺癌细胞体外增殖的影响,并利用流式细胞术检测对细胞周期的影响。4.Hoechst染色及流式细胞术检测TPD52-sh RNA转染对胰腺癌细胞凋亡的影响,并利用Western blot检测对凋亡相关蛋白表达水平的影响。5.细胞划痕试验检测TPD52-sh RNA转染对胰腺癌细胞体外迁移的影响。6.Transwell小室侵袭实验检测TPD52-sh RNA转染对胰腺癌细胞体外侵袭的影响。结果:1.RT-PCR检测结果显示转染组细胞中TPD52的m RNA表达水平较亲本组及对照组显着降低（P<0.001）;Western blot检测结果显示转染组TPD52蛋白表达量显着低于亲本组及对照组中的表达量（P<0.001）。2.CCK-8实验检测细胞增殖结果显示在第24h、第48h和第72h时转染组OD值较对照组显着降低,具有统计学差异（P<0.05）。流式细胞术检测细胞周期结果显示转染组G0/G1期细胞较对照组明显增加（P<0.05）,S期细胞明显减少（P<0.01）。3.Hoechst染色检测细胞凋亡结果显示转染组较对照组凋亡阳性细胞明显增加（P<0.001）。流式细胞术检测细胞凋亡结果显示转染组凋亡细胞较对照组明显增加（P<0.001）。Western blot检测凋亡相关蛋白结果显示转染组较对照组cleaved caspase-3和Bax蛋白表达量显着增加（P<0.001）,Bcl-2显着减少（P<0.001）。4.细胞划痕实验检测细胞迁移结果显示转染组较对照组细胞迁移能力减弱,24h迁移率显着降低（P<0.05）。5.Transwell小室检测细胞侵袭结果显示转染组较对照组细胞侵袭能力显着降低,跨膜细胞个数明显减少（P<0.05）。小结:1.抑制TPD52表达可明显抑制胰腺癌细胞增殖,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,并可促进其凋亡。2.抑制TPD52表达可抑制胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。3.抑制TPD52表达可以调控胰腺癌细胞生物学行为。第三部分TPD52调控胰腺癌细胞生物学行为的机制研究目的:以shRNA抑制TPD52基因表达及Akt激活剂处理细胞为研究手段,探讨TPD52调控胰腺癌细胞生物学行为的机制。方法:1.按实验计划分组:NC+DMSO组、sh TPD52+DMSO组、sh TPD52+SC79组。2.CCK-8实验和Hoechst染色检测Akt激活剂对TPD52-sh RNA转染抑制胰腺癌细胞增殖及促进凋亡的影响。3.细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测Akt激活剂对TPD52-sh RNA转染抑制胰腺癌细胞迁移及侵袭的影响。4.Western blot检测添加Akt激活剂同时抑制TPD52表达对胰腺癌细胞Akt和p-Akt蛋白水平的影响。结果:1.CCK-8实验检测细胞增殖结果显示sh TPD52+DMSO组较NC+DMSO组、sh TPD52+SC79组在第24h、第48h和第72h时吸光度值（OD值）显着降低,具有统计学差异（P<0.05）。2.Hoechst染色检测细胞凋亡结果显示sh TPD52+DMSO组较NC+DMSO组凋亡细胞明显增加,sh TPD52+SC79组较sh TPD52+DMSO组凋亡细胞明显减少（P<0.001）。3.细胞划痕实验检测细胞迁移结果显示sh TPD52+DMSO组较NC+DMSO组细胞迁移能力减弱;sh TPD52+SC79组较sh TPD52+DMSO组细胞迁移能力增强,24h迁移率上升（P<0.05）。4.Transwell小室检测细胞侵袭结果显示sh TPD52+SC79组较sh TPD52+DMSO组细胞侵袭能力显着回升,跨膜细胞数量增加（P<0.05）。5.Western blot检测结果显示与sh TPD52+DMSO组相比,sh TPD52+SC79组p-Akt蛋白水平显着升高（P<0.01）。小结:1.抑制TPD52表达可抑制胰腺癌细胞增殖并促进凋亡,加入Akt激活剂可逆转其作用。2.抑制TPD52表达可抑制胰腺癌细胞迁移及侵袭能力,加入Akt激活剂可逆转其抑制作用。3.抑制TPD52表达可降低胰腺癌细胞p-Akt蛋白水平,Akt激活剂可逆转其作用。4.TPD52可能通过Akt信号通路参与胰腺癌细胞生物学行为的调控。第四部分抑制TPD52基因表达对胰腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤的影响目的:研究抑制TPD52基因表达对裸鼠皮下移植瘤增殖的影响。方法:1.将12只裸鼠随机分为2组,每组6只,接种As PC-1-NC细胞者为对照组;接种As PC-1-sh TPD52细胞者为转染组。2.建立胰腺癌As PC-1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况。3.病理切片HE染色观察裸鼠皮下移植瘤组织形态学。4.Western blot检测裸鼠皮下移植瘤细胞中TPD52、Akt及p-Akt蛋白水平。结果:1.转染组裸鼠皮下移植瘤成瘤较对照组明显较小,成瘤体积自7d起,差异具有显着性（P<0.001）;转染组移植瘤平均重量低于对照组（P<0.0001）。2.转染组皮下移植瘤组织内出现坏死,细胞密度降低,有大量的纤维结缔组织增生;对照组皮下移植瘤组织细胞丰富,核分裂象多见,瘤组织中有丰富的血管。3.Western blot检测结果显示与对照组相比,转染组TPD52及p-Akt蛋白水平显着下调（P<0.001）。小结:1.抑制胰腺癌细胞TPD52表达可使裸鼠皮下移植瘤生长受到明显抑制。2.抑制胰腺癌细胞TPD52表达可使裸鼠皮下移植瘤细胞密度降低,纤维结缔组织增生。3.抑制胰腺癌细胞TPD52表达可使移植瘤中TPD52蛋白表达水平降低,可能在体内通过Akt信号通路降低胰腺癌细胞增殖,抑制肿瘤生长。结论:1.胰腺癌组织中TPD52表达水平与胰腺癌组织分化程度、肿瘤神经浸润及病理TNM分期有关;TPD52表达水平是影响胰腺癌患者OS的独立危险因素。2.抑制TPD52表达可明显抑制胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,并促进细胞凋亡;Akt激活剂可逆转抑制TPD52表达对胰腺癌细胞生物学行为的影响。3.抑制胰腺癌细胞TPD52表达能够显着抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。4.TPD52可能通过Akt信号通路调控胰腺癌生物学行为,可能成为判断胰腺癌临床生物学行为的特异性生物学标志物及胰腺癌基因治疗的新靶点。
卞蕾[3]（2020）在《ATM和ISG15在放疗耐受肿瘤细胞中的作用及机制研究》文中研究说明第一部分获得性放疗耐受——ATM在乳腺癌放疗耐受中的作用和机制研究临床治疗中,放射耐受可分为治疗过程中产生的耐受和肿瘤内在既有的对放射不敏感。肿瘤细胞放疗耐受性的产生,限制了放射治疗在肿瘤治疗中的疗效。在放疗耐受性产生过程中,许多通路的改变起到了重要的作用,如DNA损伤修复机制、细胞自噬等。研究这些通路在放疗耐受发生过程中的作用,揭示放疗耐受性产生的机制,将有助于发现增强放射治疗敏感性的途径,为患者提供更好的治疗。为了模拟临床放疗耐受的条件,我们参照临床乳腺癌放射治疗方案,使用分次、3Gy/次的方式构建了乳腺癌耐放射细胞株MD-PR,并探索了介导耐受性产生的机制。实验通过蛋白印迹、蛋白免疫荧光等方式检测磷酸化组蛋白H2A的表达情况和动态改变,以检测细胞受到放射后细胞修复断裂DNA的效率。通过荧光报告质粒,直观检测DNA修复通路的效率。研究发现,在乳腺癌放疗耐受细胞株中,ATM蛋白水平明显上调。通过使用ATM特异性抑制剂和si RNA干扰ATM表达,研究发现MD-PR细胞通过上调ATM的表达,从而增加双链DNA修复效率,从而促进细胞在受到放射后更好的存活,增强肿瘤细胞的放射耐受性。综上,通过模拟临床治疗方案,我们建立了乳腺癌放射耐受细胞株,并通过与原始细胞株比较,发现了ATM在乳腺癌细胞放疗耐受现象中的作用,提示放射治疗联合靶向ATM抑制,可以为提高肿瘤治疗疗效提供新的可能。第二部分固有放疗耐受——ISG15在胰腺癌放/化疗耐受中的作用和机制通过蛋白质谱分析比较第一部分中乳腺癌耐放射细胞株MD-PR和对照细胞株MD-PB中的蛋白表达差异,我们发现ISG15的表达和肿瘤细胞放射耐受性显着相关。作为类泛素分子,ISG15在机体抗细菌、病毒感染过程中起到重要的作用。同时,尽管机制有待发现,有文章报道ISG15的表达影响细胞自噬。近年来,不断有研究表明ISG15在机体肿瘤的发生、发展、肿瘤免疫和肿瘤治疗中起到重要的作用。结合第一部分的实验结果,在本部分实验中,我们研究了ISG15在本身放射耐受性就较高的胰腺癌中的作用以及相关机制。通过采用组织芯片探讨了胰腺癌组织和癌旁组织中ISG15的表达差异。分析胰腺癌细胞PANC-1和Mia Paca-2中转染ISG15干扰质粒和过表达质粒后对细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响和对放射、化疗药物的敏感性的影响和影响的机制。实验结果表明,在组织芯片中ISG15的表达在胰腺癌组织明显高于癌旁组织,且ISG15的表达和预后相关。敲低ISG15表达后,胰腺癌细胞对放射、化学药物吉西他滨的敏感性增强。进一步实验发现,敲低ISG15表达引起细胞中自噬水平下降,且主要由LC3I/II转化障碍引起。后续实验证明,ISG15主要通过影响ATG7蛋白的稳定性影响细胞的自噬水平。在敲低ISG15的胰腺癌细胞中过表达ISG15可恢复对ATG7的影响并恢复细胞的自噬水平,进一步证实了ISG15通过影响ATG7而调控细胞自噬水平从而影响胰腺癌细胞对放射和化学药物的敏感性。裸鼠皮下成瘤模型进一步证实了ISG15在促进胰腺癌细胞增殖、耐受吉西他滨药物治疗的作用。我们首次证实,ATG7的表达水平受到ISG15的调控。本研究阐明了ISG15在胰腺癌放疗、化疗耐受中的作用和机制。
汤寅[4]（2019）在《高喜树碱类候选药物TOP0618对胰腺癌放疗增敏作用研究》文中研究表明第一部分高喜树碱类候选药物TOP0618对胰腺癌细胞体外放疗增敏作用研究研究目的:研究高喜树碱类候选药物TOP0618对胰腺癌PANC-1、MIA PaCa-2细胞株放疗增敏作用,并分析TOP0618联合放疗对细胞周期分布及凋亡的影响,初步探讨TOP0618放疗增敏可能的作用机制。研究方法:采用CellTiter-Blue法、克隆形成实验等测定TOP0618对PANC-1、MIA PaCa-2细胞的生长抑制作用,获得半数抑制浓度IC50,确定放疗增敏作用浓度;通过克隆形成实验研究TOP0618的放射增敏作用;采用流式细胞仪测试TOP0618对细胞周期、细胞凋亡的影响。结果:TOP0618能显着抑制人胰腺癌PANC-1、MIA PaCa-2细胞增殖,IC50分别为1.442μM和1.198μM;TOP0618能明显增加胰腺癌细胞对放射的敏感性,0.2μM浓度的TOP0618作用PANC-1、MIA PaCa-2细胞24h后联合照射的放疗增敏比（SER）分别为1.14和1.65;TOP0618作用12小时影响MIA PaCa-2细胞周期分布,导致G2/M期细胞比例升高;TOP0618联合14Gy射线照射引起MIA PaCa-2细胞凋亡增加。结论:TOP0618体外对人胰腺癌PANC-1、MIA PaCa-2细胞具有较强的放疗增敏作用,其机制可能与细胞周期重分布、诱导细胞凋亡有关。第二部分高喜树碱类候选药物TOP0618对胰腺癌细胞体内放疗增敏作用研究研究目的:通过建立人胰腺癌MIA Pa Ca-2细胞株裸鼠异位移植瘤模型,观察TOP0618联合放射治疗后的肿瘤变化,考察TOP0618体内放疗增敏效果,为将来应用于临床胰腺癌治疗提供实验依据。研究方法:将20只裸鼠建立人胰腺癌MIA Pa Ca-2细胞株裸鼠双侧腋部异位移植瘤模型,随机分组,每组5只,各给予生理盐水、TOP0618 12.5mg/Kg、TOP061825mg/Kg、阳性对照药伊立替康50mg/Kg腹腔注射,每3天1次。裸鼠右侧移植瘤给予照射处理,左侧移植瘤给予未照射处理,共分8个处理组:A:空白对照组（Control）、B:单纯放疗组、C:TOP0618低剂量组、D:TOP0618低剂量+放疗组、E:TOP0618高剂量组、F:TOP0618高剂量+放疗组、G:伊立替康组、H:伊立替康+放疗组。首次给药24小时后右侧瘤体局部单次照射剂量6Gy。每周2次称量裸鼠体重并测量计算各组移植瘤的体积,绘制移植瘤生长曲线,计算抑瘤率。照射后第21天取出移植瘤体,HE染色、Tunel染色观察移植瘤细胞形态变化、组织病理学改变及坏死凋亡情况。结果:TOP0618联合放疗后提高了MIA Pa Ca-2裸鼠移植瘤的抑瘤率,C、D、E、F组的抑瘤率分别为39.8%、58.8%、61.4%、80.7%,C组与D组及E组与F组抑瘤率差异有统计学意义（P<0.05）;离体肿瘤HE染色显示各处理组较对照组肿瘤细胞密度降低,联合放疗后坏死区域增多。Tunel染色显示TOP0618联合放疗后移植瘤瘤体内细胞凋亡增加。结论:TOP0618对胰腺癌MIA Pa Ca-2裸鼠移植瘤具有一定的放疗增敏作用,可能与促进肿瘤坏死,肿瘤细胞凋亡有关。TOP0618可能是有潜力的放疗增敏药,为将来联合放疗应用于临床提供依据。
尤倩[5]（2019）在《长链非编码RNA RP11-452H21.4在胰腺癌细胞中的功能研究》文中指出目的:探讨沉默、过表达长链非编码RNA RP11-452H21.4对胰腺癌细胞恶性表型的影响,为阐明胰腺癌作用机制奠定基础。方法:通过构建针对长链非编码RNA RP11-452H21.4的Smart Silencer和真核表达载体pcDNA3.1,转染胰腺癌细胞株Panc-1,采用逆转录PCR鉴定敲低及过表达效果,并对胰腺癌细胞株Panc-1进行以下细胞功能实验:（1）CCK-8法检测胰腺癌细胞株Panc-1增殖能力的变化;（2）Transwell迁移实验检测胰腺癌细胞株Panc-1迁移能力的变化;（3）Transwell侵袭实验检测胰腺癌细胞株Panc-1侵袭能力的变化。结果:（1）逆转录PCR实验示:胰腺癌细胞株Panc-1长链非编码RNA RP11-452H21.4的敲低和过表达效果明显。（2）CCK-8增殖实验示:长链非编码RNA RP11-452H21.4敲低组与对照组胰腺癌细胞株Panc-1的OD450在24h、48h无明显差异,而在72h、96h长链非编码RNA RP11-452H21.4敲低组胰腺癌细胞株Panc-1的OD450明显高于对照组,且差异具有统计学意义（2.16±0.20 Vs 1.59±0.15,P=0.017;2.62±0.20 Vs 1.99±0.12,P=0.021）;长链非编码RNA RP11-452H21.4高表达组与空载质粒组胰腺癌细胞株Panc-1的OD450在24h、48h无明显差异,而在72h、96h长链非编码RNA RP11-452H21.4高表达组胰腺癌细胞株Panc-1的增殖率明显低于空载质粒组,且差异具有统计学意义（1.23±0.07 Vs 1.57±0.11,P=0.009;1.46±0.17 Vs 1.89±0.17,P=0.035）。（3）Transwell迁移实验示:长链非编码RNA RP11-452H21.4敲低组敲胰腺癌细胞株Panc-1穿膜细胞个数明显高于对照组,差异具有统计学意义（180.33±17.17 Vs 79.67±8.80,P=0.002）;长链非编码RNA RP11-452H21.4高表达组胰腺癌细胞株Panc-1穿膜细胞个数明显低于空载质粒组,差异具有统计学意义（61.33±10.96 Vs 91.33±10.50,P=0.049）。（4）Transwell侵袭实验示:长链非编码RNA RP11-452H21.4敲低组敲胰腺癌细胞株Panc-1穿膜细胞个数明显高于对照组,差异具有统计学意义（130.33±13.07 Vs 85.67±10.96,P=0.021）;长链非编码RNA RP11-452H21.4高表达组胰腺癌细胞株Panc-1穿膜细胞个数明显低于空载质粒组,差异具有统计学意义（35.67±8.96 Vs 83.00±10.20,P=0.008）。结论:（1）下调长链非编码RNA RP11-452H21.4在胰腺癌细胞株Panc-1的表达,细胞增殖、迁移及侵袭能力均上升;上调长链非编码RNA RP11-452H21.4在胰腺癌细胞株Panc-1的表达,细胞增殖、迁移及侵袭能力均下降;（2）长链非编码RNA RP11-452H21.4能抑制胰腺癌细胞株Panc-1的增殖、迁移及侵袭能力。
王思亮[6]（2019）在《MicroRNA-216a靶向JAK2/STAT3信号通路增加胰腺癌放疗敏感性的机制研究》文中认为目的:胰腺癌是一种高度侵袭的恶性肿瘤,起病隐匿,确诊时多为晚期,是预后最差的恶性肿瘤之一。胰腺癌治疗以手术治疗为主,然而多数患者确诊时已无手术治疗的机会,以放化疗为其主要治疗手段。放射治疗在胰腺癌治疗中占有重要地位,可以降低局部复发率,增加局部进展期胰腺癌重获手术的机会。然而,胰腺癌细胞对放疗相对不敏感,同时胰腺肿瘤周围组织放疗耐受性差,限制了放疗的剂量。因此,增加放疗敏感性在胰腺癌的放射治疗中具有十分重要的地位和发展前景。放疗抵抗性的产生是一个多基因、多因子和多机制共同作用的复杂过程。细胞周期阻滞、相关基因改变、肿瘤微环境变化、自噬性调节及干细胞的存在等多种因素导致肿瘤细胞产生放疗抵抗,放射治疗增敏研究也已深入到分子和基因水平。完善放疗抵抗的分子机制,靶向增加放疗敏感性对胰腺癌治疗的转化研究具有重要的意义。研究方法:第一部分:本研究利用X射线阶梯剂量放射方法照射胰腺癌亲本细胞系SW1990和PANC-1,总剂量80Gy,筛选出相对应的放疗抵抗细胞系SW1990-R和PANC-1-R;胰腺癌亲本细胞系做对照,通过克隆实验、生存曲线及细胞周期检测的方法鉴定放疗抵抗细胞系的放疗敏感性;应用高通量测序的方法,筛选亲本细胞系和抵抗细胞系之间差异表达的miRNA和mRNA;通过基因本体（gene ontology,GO）功能注释和KEGG（kyoto encyclopedia of genes and genomes）通路富集,分析参与放疗抵抗的基因和生物学过程及信号通路;我们应用Real-time PCR检测显着差异Top10的miRNA表达,鉴定测序结果。第二部分:根据测序结果发现抵抗细胞中表达下调的miRNA-216a和其靶基因JAk2可能与放疗抵抗相关,我们观察不同剂量的X射线照射对JAK2表达的影响;应用Real-time PCR检测放疗抵抗细胞系和放疗敏感细胞系JAK2/STAT3信号通路相关分子mRNA水平表达差异,Western blot检测亲本细胞系和放疗抵抗细胞系JAK2/STAT3信号通路相关分子蛋白水平表达差异;我们应用X射线照射亲本细胞系和放疗抵抗细胞系,观察胰腺癌细胞系照射前后JAK2/STAT3信号通路相关分子蛋白水平表达差异;我们转染siJAK2,观察胰腺癌放疗抵抗细胞沉默JAK2表达与对照组相比,X射线照射后克隆形成差异,Western blot检查JAK2、STAT3、pSTAT3和SOCS3蛋白水平表达差异;我们应用抑制剂AG490下调胰腺癌放疗抵抗细胞JAK2/STAT3信号通路表达,观察X射线照射后克隆形成差异,并检查JAK2、STAT3、pSTAT3和SOCS3蛋白水平表达差异;转染mimic miRNA-216a,观察胰腺癌放疗抵抗细胞过表达miRNA-216a与对照组相比,X射线照射后克隆形成情况,Western blot检查JAK2、STAT3、pSTAT3和SOCS3蛋白水平表达情况;进而应用免疫组化检测我院病理诊断明确的胰腺癌标本癌和癌旁组织中JAK2表达以及可评价放疗疗效的放疗抵抗胰腺癌和放疗敏感胰腺癌组织的JAK2表达;并应用TCAG数据库分析JAK2在肿瘤组织和正常组织间的表达差异。结果:第一部分:1.成功筛选出胰腺癌放疗抵抗细胞系SW1990-R和PANC-1-R。2.对比胰腺癌亲本细胞系,胰腺癌放疗抵抗细胞系对于X射线照射更具有抵抗性,细胞的存活能力更强,克隆数更多,且具有细胞周期阻滞。3.高通量测序共检测出242种表达水平显着差异的miRNAs,其中,与胰腺癌亲本细胞系相比,97种miRNAs在放疗抵抗细胞中表达上调,145种miRNAs在放疗抵抗细胞中表达下调。4.GO富集和KEGG分析显示多种分子和信号通路包括免疫相关分子和信号通路参与胰腺癌放疗抵抗。5.Real-time PCR的方法去证实显着差异表达中miR-497-5p,miR-146b-3p,miR-181a-3p,miR-33a-3p和miR-32-5p表达上调;miR-7-5p,miR-30b-5p,miR-181a-5p、miR-296-5p和miR-216a-5p表达下调。第二部分:1.不同剂量X射线照射胰腺癌细胞,Western-Blot检测显示JAK2蛋白表达随照射剂量的增加而增加。2.Real-time PCR结果表明对比胰腺癌亲本细胞系,放疗抵抗细胞系中JAK2和STAT3表达上调,而SOCS3表达下调,Western-Blot检测表明对比胰腺癌亲本细胞,放疗抵抗细胞中JAK2和STAT3表达上调,SOCS3表达下调;3.X射线照射后,胰腺癌亲本细胞和抵抗细胞JAK2和pSTAT3表达上调,SOCS3表达下调。4.转染siJAK2沉默JAK2表达,胰腺癌放疗抵抗细胞照射后克隆数明显减少,放疗敏感性增加,JAK2/STAT3信号通路分子蛋白水平表达被抑制。5.CCK8增值试验法检测50ug/ml AG490可以抑制胰腺癌放疗抵抗细胞的照射后克隆形成,放疗联合AG490可以抑制JAK2/STAT3信号通路增加放疗敏感性。6.转染miR-216a mimic靶向抑制JAK2表达,胰腺癌放疗抵抗细胞照射后克隆数明显减少,放疗敏感性增加,JAK2/STAT3信号通路分子蛋白水平表达被抑制。7.观察我院36例明确病理的胰腺癌患者,肿瘤组织JAK2表达高于正常组织;TCAG数据库分析结果肿瘤组织JAK2表达高于正常组织;放疗抵抗胰腺癌组织JAK2表达高于放疗敏感胰腺癌组织。结论:成功建立胰腺癌放疗抵抗细胞系,高通量测序方法筛选出了胰腺癌放疗抵抗细胞系和放疗敏感细胞系之间差异表达的miRNAs和mRNA,生物信息学分析发现差异表达的miRNAs通过调控信号通路参与胰腺癌细胞放疗抵抗过程。microRNA-216a在放疗抵抗细胞中表达下调,JAK2是其靶基因之一,在胰腺癌组织中表达升高。在放疗抵抗胰腺癌组织中JAK2表达也升高,X射线照射激活JAK2/STAT3信号通路,该信号通路持续激活是胰腺癌放疗抵抗的可能原因之一,microRNA-216a靶向抑制JAK2/STAT3信号通路增加胰腺癌放疗敏感性。
韦春密[7]（2019）在《PTEN通过抑制EMT表型及VM形成进而逆转胰腺癌细胞吉西他滨耐药性、放射抵抗的实验研究》文中提出目的:本实验旨在研究胰腺癌细胞发生吉西他滨耐药、放射抵抗是否与PTEN基因缺失、细胞EMT（Epithelial mesenchymal transition,上皮间充质转化）表型以及VM（Vasculogenic mimicry,血管生成拟态）形成相关,以及验证PTEN表达能否通过抑制EMT/VM逆转其耐药、放射抗拒现象,评估其对细胞迁移侵袭、细胞增殖、细胞周期的影响,并探讨其中作用机制是否与ZEB1、PDCD6相关。材料方法:我们采用间断梯度浓度的吉西他滨（Gemcitabine,GEM）诱导Miapaca2、Panc1建立吉西他滨耐药细胞株mGR（Miapaca2-GEM-resistant）、pGR（Panc1-GEM-resistant）,另外通过给予单次4Gy,总剂量为40Gy的X线照射量诱导建立胰腺癌放射抵抗细胞株mRR（Miapaca2-Radio-resistant）、pRR（Panc1-Radio-resistant）;MTT实验及集落克隆形成实验分别被用于检测细胞的吉西他滨敏感性或放射敏感性。通过计算48h划痕愈合比率及transwell小室24h穿膜数来检测细胞的迁移侵袭能力以分析其EMT表型转化程度,基质胶小管形成实验则用于观察基质胶中小管样结构形成数量以检测细胞VM发生情况。蛋白免疫印法（Western Blot,WB）检测各组细胞中的PTEN,ZEB1,PDCD6,EMT上皮表型标志蛋白E-cadherin、间质型标志蛋白Vimentin,VM标记蛋白VE-cadherin、MMP9的表达水平改变。通过CCK8实验检测细胞增殖速度改变;收集经4Gy照射或经吉西他滨预处理24h后的细胞用于检测各组细胞周期分布变化。结果:数据显示Miapaca2、Panc1细胞的IC50值分别为0.49±0.17μM、0.85±0.36μM,平均致死剂量D0值分别为1.74±0.33Gy、1.57±0.24Gy,耐药细胞mGR、pGR的IC50值分别为106.90±30.37μM、164.71±41.95μM,其耐药系数分别为218、194;放射抵抗细胞mRR、pRR的D0值分别为4.77±0.71Gy、4.23±0.58Gy,放射抵抗倍数分别为2.74、2.69。划痕及transwell实验结果提示,抗性细胞mGR、mRR、pGR、pRR的侵袭迁移能力明显增强,且基质胶中小管样结构形成增多,这表示放射抵抗细胞和耐药细胞发生了EMT转化及VM形成增强。WB结果提示抗性组细胞PTEN、PDCD6、E-cadherin蛋白表达下降,而ZEB1、Vimentin、VE-cadherin及MMP9蛋白水平有所上升。增强抗性细胞的PTEN基因表达后,mGR+、mRR+、pGR+、pRR+细胞的PDCD6、E-cadherin表达增强,而ZEB1、Vimentin、VE-cadherin及MMP9则表达下调;同时mGR+、pGR+的IC50值也减小至41.26±9.61uM、59.64±26.31uM,mRR+、pRR+的D0值分别降为2.20±0.41Gy、2.32±0.36Gy。另外,mGR、pGR及mRR、pRR的增殖速度较亲本细胞有所增加,上调其PTEN表达后,mGR+、pGR+及mRR+、pRR+细胞生长、增殖速度出现一定下降;另外,周期检测结果显示,与亲本细胞相比,mGR、pGR经吉西他滨处理后S期细胞分布更少;而mRR、pRR经4Gy照射后G2/M期细胞分布较少;增强PTEN基因表达后,mGR+、pGR+细胞s期分布增多;mRR+、pRR+细胞G2/M期细胞分布增加。结论:PTEN基因表达下调、细胞EMT转化及VM形成是胰腺癌细胞产生吉西他滨耐受、放疗抵抗的重要原因;增强PTEN基因表达可以抑制细胞EMT及VM形成从而逆转胰腺癌细胞的耐药性和放射抵抗,并且ZEB1及PDCD6基因也同时参与了这一过程的调控。另外,细胞增殖、周期分布的改变也是胰腺癌细胞产生抗性的重要影响因素。
傅旭宏[8]（2018）在《CUDC-907通过HDAC6抑制c-Myc表达在胰腺癌治疗中的研究》文中研究表明胰腺癌（Pancreatic Cancer,PC）是一种恶性程度极高的消化系统肿瘤。因其诊断困难且治疗预后不良,胰腺癌患者5年生存率不足5%,存活期中位数仅为6个月。因此,寻找有效的靶向治疗药物对提高胰腺癌的疗效、改善胰腺癌患者的生存率具有重大意义。目前,大量研究表明在胰腺癌中会高频发生c-Myc的扩增和过表达,且c-Myc蛋白异常表达与KRAS突变相关,是可能的效应分子。因此,抑制c-Myc蛋白表达成为胰腺癌治疗的潜在策略。c-Myc是参与胰腺癌早期发展的重要癌基因,与不良预后密切相关。一方面它直接参与细胞周期调控、凋亡、蛋白合成等多种生理进程,另一方面c-Myc也能对约15%的人类基因的表达发生间接调控作用。c-Myc蛋白作为转录因子,目前仍然缺乏直接靶向的特异性抑制剂。本课题通过体内外模型系统筛选发现PI3K（phosphoinositide 3-kinase）和HDAC（histone deacetylase）双靶点抑制剂CUDC-907对胰腺癌细胞具有显着的增殖抑制活性,并对其抗肿瘤机制进行了初步探索。已有文献报道,CUDC-907在分子水平上能直接靶向PI3K通路和HDAC通路,同时能引起c-Myc蛋白的显着性变化。然而,CUDC-907如何通过调控c-Myc进而影响肿瘤生长的机制尚有待研究。首先,我们通过Western Blot检测化合物CUDC-907对靶点PI3K和HDAC的抑制效应,明确了CUDC-907作用剂量依赖性的降低胰腺癌Aspc-1,PANC-1和Capan-1细胞株中磷酸化AKT的水平,并上调组蛋白H3K27ac的水平。同时,通过Western Blot技术以及RT-PCR技术检测胰腺癌细胞中c-Myc蛋白和mRNA水平的变化都发生了显着的下调,该结果提示c-Myc是受CUDC-907间接调控的关键蛋白之一。继而,利用si RNA敲降c-Myc蛋白或构建稳定过表达c-Myc细胞株两种手段,从正反两面共同验证了c-Myc蛋白的表达量与细胞增殖活性直接相关。为进一步探索CUDC-907如何通过HDACs和PI3K抑制c-Myc蛋白的表达,我们分别选取PI3K和HDACs的单靶点抑制剂GDC-0941和Vorinostat（SAHA）做阳性对照进行研究。结果显示,CUDC-907和GDC-0941在作用后使p-AKT表达量下调,进而促进c-Myc在58位点丝氨酸磷酸化而被泛素化酶识别并通过蛋白酶体降解,最终导致c-Myc蛋白本底水平的下调;而另一方面,CUDC-907通过抑制HDAC通路来抑制c-Myc蛋白的合成。CUDC-907能抑制HDAC家族成员之一HDAC6蛋白酶活,通过HDAC6-FOXO1-c-Myc信号轴抑制c-Myc蛋白的转录来抑制c-Myc蛋白合成。基于以上机制研究,我们对CUDC-907抗胰腺癌的药效学做进一步评价。流式细胞术检测结果显示,CUDC-907可剂量依赖性地将胰腺癌细胞阻滞于G2/M期,并显着性地诱导胰腺癌细胞的凋亡,最终导致胰腺癌细胞死亡。这一结果与Western Blot检测相应浓度化合物作用下周期、凋亡通路关键蛋白的变化一致。在体内实验中,CUDC-907对人源胰腺癌细胞株Aspc-1建立的裸小鼠皮下移植瘤模型同样具有显着的生长抑制作用,且给药组瘤组织中c-Myc蛋白表达显着低于溶剂对照组。这一系列实验进一步验证了化合物CUDC-907主要通过抑制c-Myc蛋白表达发挥抗胰腺癌的活性。综上,CUDC-907具有显着的体内外抗胰腺癌增殖活性,具有潜在的临床应用价值。我们发现在CUDC-907发挥抗胰腺癌增殖过程中,c-Myc蛋白发挥了关键性的作用,且PI3K通路和HDAC通路以不同的方式共同调控c-Myc蛋白的表达,这一机制的研究有望为抗胰腺癌药物的研究和胰腺癌治疗提供新的思路。
任帅[9]（2018）在《超顺磁性氧化铁双模态纳米探针在胰腺癌诊疗中的应用研究》文中研究指明第一部分超顺磁性氧化铁双模态纳米探针的构建及性能检测目的合成磷脂聚乙二醇（DSPE-PEG-2000）修饰的磁性纳米颗粒,构建基于被动靶向原理的MRI及荧光双模态靶向分子探针Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO,对纳米颗粒及探针的性能进行表征。材料与方法1、Fe3O4纳米颗粒的合成:取20ml二辛醚、2mmol的乙酰丙酮铁以及体积比为3.4:0.6（总量为12mmol）的油酸及油胺置于50ml三颈瓶中,向体系内持续通氮气,加热至110℃后打开瓶塞并保持1h。继续升温至220℃,反应2h,此时溶液由棕红色转变为光亮的黑色。继续加热至290℃,并维持1h。移除热源,待体系降至室温后,将产物转移入烧杯并置于强磁场上,加入一定量无水乙醇后洗涤3-4次,以便去除残余的油酸及油胺。最后加入氯仿,制得Fe3O4-OA在室温保存。2、Fe3O4-PEG的合成:取Fe3O4-OA氯仿溶液,与DSPE-PEG-2000氯仿溶液混合均匀,然后加入5ml去离子水,置于70℃水浴锅内旋转蒸发15min,使样品分散于去离子水中。将分散液以3000rpm/min转速离心5min,后用去离子水洗涤三次。最后使用滤膜过滤Fe3O4-PEG水溶液,置于4℃条件下保存。3、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO探针的构建:将GFLG（Gly-Phe-Leu-Gly,甘氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-甘氨酸）与EDC/NHS混合,活化20分钟,加入大黄素（EMO）反应2h,得到GFLG-EMO。将GFLG-EMO与Cy7、Fe3O4-PEG活化液混合（EDC/NHS活化）震荡反应12h。得到的产物过柱纯化,即可得到探针Fe3O4-PEG-Cy7-EMO。4、Fe3O4-PEG-Cy7/Fe3O4-PEG-Cy7-EMO纳米探针的性能表征:采用透射电子显微镜（Transmission electron microscopy,TEM）观察磁性纳米颗粒的粒径及晶体结构;采用振动样品磁强计（Vibrating sample magnetometer,VSM）、磁共振成像仪（MRI）检测纳米探针的磁学性质;采用动态光散射（Dynamic light scattering,DLS）测量纳米探针自身及随pH值变化的水动力尺寸;观察纳米探针的胶体稳定性能并测其粒径的改变情况;采用荧光成像设备检验纳米探针的荧光成像。结果TEM结果显示Fe3O4的核心粒径大约9.1±1.7nm,有较好的分散性;VSM结果显示在外加磁场为0时,Fe3O4几乎没有剩磁,为一条闭合的磁滞回力曲线,证明Fe3O4为超顺磁性材料,其饱和的磁化强度为55.18emu/g,适合作为MR成像的T2对比剂;DLS测得Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO水动力尺寸分别为27.59±8.26nm、29.81±9.79nm、28.58±8.47nm,其水动力尺寸在在不同pH值溶液中变化不大,稳定性较好;Zeta电位仪测得Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO表面电荷分别为-40.2±6.83mV、-39.8±7.12mV、-38.7±6.32mV;体外弛豫曲线测得Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的r2值分别为95.0m/Ms、86.9m/Ms、103.5m/Ms,证明探针可进行MR T2成像;将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO静置于不同浓度的生理盐水或不同pH值缓冲盐溶液中,7天均未出现明显沉淀,证明Fe3O4-PEG-Cy7-EMO纳米探针具有良好的稳定性;MRI成像显示Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的T2WI成像信号随其浓度的增加而减弱;样品荧光实验结果证明探针具有较强荧光,在避光条件下可保存46个月。结论超顺磁性氧化铁双模态纳米探针Fe3O4-PEG-Cy7,Fe3O4-PEG-Cy7-EMO具有粒径较小、磁学性能好,荧光特性佳及胶体稳定性良好的特点;体外MRI成像结果显示Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的T2WI成像信号随其浓度的增加而下降,证明其可用作MR T2WI成像。第二部分被动靶向胰腺癌细胞分子探针的体外实验目的将Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、PANC-1、XPA-1、人胚肺细胞株MRC-5及人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE共孵育,从体外细胞水平验证探针的靶向性及探针对细胞的毒性作用。材料及方法（1）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、PANC-1、XPA-1共孵育,通过普鲁士蓝染色观察细胞对探针吞噬情况,并设人胚肺细胞株MRC-5及人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE为对照;（2）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3共孵育,采用TEM观察探针在细胞内的分布,并设人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE为对照;（3）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3共孵育,用0.5ml 1%琼脂糖重悬细胞团,收集至1.5ml EP管中,置于1.5T磁共振下扫描,验证探针对胰腺癌细胞靶向性,并设人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE为对照;（4）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3共孵育,用0.5ml 1%琼脂糖重悬细胞团,收集至1.5ml EP管中,置于荧光成像设备下观察,验证验证探针对胰腺癌细胞靶向性,并设人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE为对照;（5）将Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、PANC-1、XPA-1共孵育,采用MTT法观察其对细胞的毒性作用;（6）将Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、PANC-1、XPA-1共孵育,采用流式细胞仪测定细胞的凋亡率,验证其对细胞的毒性作用,并设人胰腺导管上皮细胞株HTERT-HPNE为对照;（7）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、XPA-1共孵育,采用Hoechst染色通过对细胞形态的观察检测探针对细胞的毒性作用;（8）将Fe3O4-PEG-Cy7-EMO与胰腺癌细胞株Bx PC-3、PANC-1、XPA-1共孵育,通过对细胞内ROS活性氧的观察探讨探针对细胞产生毒性作用的可能机制。结果（1）普鲁士蓝染色结果显示较正常细胞比,胰腺癌细胞内有更多蓝染颗粒,其代谢更为活跃,对探针Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的吞噬作用更强;（2）TEM显示Bx PC-3细胞株内有较明显Fe3O4-PEG-Cy7-EMO探针分布,而对照组细胞内未见明显探针分布;（3）细胞MRI成像说明胰腺癌细胞对探针Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的吞噬作用更强,Fe3O4-PEG-Cy7-EMO可明显降低T2WI信号值,并与探针浓度呈正相关;（4）细胞荧光成像说明胰腺癌细胞对探针Fe3O4-PEG-Cy7-EMO的吞噬作用更强,且荧光信号强度与探针浓度正相关;（5）细胞MTT实验说明较Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7比,Fe3O4-PEG-Cy7-EMO对胰腺癌细胞增殖的抑制作用更明显,且与探针浓度正相关;（6）细胞流式凋亡结果显示较对照组细胞比,Fe3O4-PEG-Cy7-EMO对胰腺癌细胞的抑制作用更明显,可显着抑制胰腺癌细胞的增殖,其抑制作用要高于Fe3O4-PEG、Fe3O4-PEG-Cy7;（7）细胞Hoechst染色结果说明Fe3O4-PEG-Cy7-EMO可明显抑制胰腺癌细胞增殖,细胞形态发生变化,最终走向凋亡;（8）细胞ROS实验说明Fe3O4-PEG-Cy7-EMO促进胰腺癌细胞的凋亡可能与其在细胞内产生活性氧相关。结论本实验合成的分子探针Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO对胰腺癌细胞有较好的转染率,能够有效抑制胰腺癌细胞的增殖,而对正常细胞的抑制作用不明显;且探针具备MRI和荧光成像的双重效果,为潜在的MRI/荧光双模态靶向分子探针。第三部分被动靶向胰腺癌组织分子探针的体内实验目的检测探针的血液相容性;建立人胰腺癌裸鼠原位模型,通过荷瘤小鼠尾静脉注射探针,采用MRI/荧光双模态成像,并与病理组织普鲁士蓝染色对照来验证探针的MRI/荧光成像效果及小鼠体内的分布情况,寻找最佳成像时间点。材料及方法（1）培养转染绿色荧光蛋白的人胰腺癌细胞株Bx PC-3（Bx PC-3-GFP）,细胞生长状况良好时,胰酶消化细胞并离心,将细胞团混悬液注射于15只裸鼠腹部皮下。通过动物荧光成像系统实时观察皮下肿瘤的生长情况,待肿瘤长至8-10mm时,解剖皮下瘤,将小块癌组织缝合到裸鼠胰腺,荧光设备下动态监测胰腺肿瘤的生长情况,待肿瘤生长到1cm左右时进行MRI/荧光成像实验。（2）随机取12只原位移植瘤小鼠,分为三组,先行MR T2WI平扫,分别于注射探针前与注射后2h、4h、6h、24h、48h各时间点行增强扫描,观察肿瘤信号变化,并绘制信号-时间变化曲线。于6h、24h、48h时间点处死小鼠,解剖脏器,包埋,制作病理切片,行HE、普鲁士蓝染色。（3）取剩余3只原位移植瘤小鼠,分别于注射前与注射Fe3O4-PEG-Cy7-EMO后2h、4h、6h、24h、48h各时间点置于荧光设备下成像。于6h、24h、48h时间点各处死1只小鼠,取主要脏器及肿瘤组织在荧光设备下成像。结果MRI与荧光成像均可以显示肿瘤部位有较多探针的分布,且MRI结果进一步提示在6h时间点,肿瘤组织T2信号下降最为明显;而荧光成像提示在尾静脉注射2h后,肝脾内也有探针的累积,说明肝脾对探针也有吞噬作用。病理HE染色提示主要脏器细胞无明显异常,说明探针对各脏器无明显毒性作用;而普鲁士蓝染色结果显示与肝脾相比,肿瘤内有较明显的蓝染颗粒,证明探针可以通过肝脾的吞噬到达肿瘤内部。结论MRI与荧光实验显示肝脾、肿瘤组织内均有Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO探针分布,但在780nm激发光下肿瘤组织具有更强的荧光信号,说明Fe3O4-PEG-Cy7、Fe3O4-PEG-Cy7-EMO探针通过被动靶向也能有较好的MRI/荧光成像效果。普鲁士蓝染色进一步显示肿瘤组织内有明显的蓝染颗粒,说明探针可通过肝脾吞噬并到达肿瘤组织。
鹿伦杰[10]（2017）在《脂肪型FABP4对胰腺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响与机制研究》文中认为目的:初步研究脂肪型脂肪酸结合蛋白FABP4在人胰腺癌细胞增殖、转移及放射敏感性中的生物学作用以及可能的调控机制。方法:无菌条件下获取乳腺癌患者脂肪组织,制备脂肪组织浸出液,分别与人胰腺癌细胞系PANC1和Patu8988进行共培养,采用实时荧光定量PCR法检测人胰腺癌细胞经脂肪共培养前后脂肪酸结合蛋白家族FABPs mRNA表达量的变化;自行构建的FABP4腺病毒载体获得高表达该蛋白的人胰腺癌细胞模型,采用特异性FABP4抑制剂BMS309403构建FABP4功能抑制的人胰腺癌细胞模型,并经CCK8检测其对人胰腺癌细胞毒性的影响。采用脂肪特异荧光染色法研究FABP4对人胰腺癌细胞内脂肪聚集的影响;通过EdU法检测FABP4对人胰腺癌细胞增殖的影响;经体外侵袭和划痕实验确定FABP4对人胰腺癌细胞体外侵袭与迁移的影响。采用尾静脉注射法构建人胰腺癌小鼠转移模型,并通过小动物成像系统观察FABP4对人胰腺癌细胞在裸鼠体内的转移的影响。此外,采用克隆形成实验研究FABP4对人胰腺癌细胞放射敏感性的影响,通过流式细胞术分析FABP4对受照后人胰腺癌细胞周期和细胞凋亡的作用;经JC-1法检测细胞线粒体膜电位的变化;采用免疫荧光染色检测核内磷酸化γ-H2AX焦点形成情况;经Western blot法检测FABP4对受照后人胰腺癌细胞中DNA损伤修复相关蛋白ATM、p-ATM、p-NBSI、Rad50、Mre11表达的影响。结果:与对照组相比,脂肪共培养24h后的人胰腺癌细胞的FABP4mRNA表达水平显着增高,过表达FABP4、脂肪共培养以及BMS309403都不能影响人胰腺癌细胞的增殖,但FABP4过表达和脂肪组织共培养均可促进细胞内脂肪聚集,且可在体外促进人胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力;经FABP4抑制剂BMS309403处理后,人胰腺癌细胞的上述脂肪聚集和转移能力均受到明显抑制。在动物体内实验中,与对照组相比,过表达FABP4的人胰腺癌细胞经尾静脉注射后主要转移至肺、肝、肾等部位;与脂肪共培养的人胰腺癌细胞主要转移至肺部,FABP4抑制剂BMS309403则可以抑制人胰腺癌细胞向肺部的转移。暴露于0、2、4、6 Gy X射线后,与对照组相比,FABP4过表达的人胰腺癌细胞存活分数显着增加,平均致死剂量D0值由3.669Gy上升至4.913Gy,准阈剂量Dq值由1.788Gy上升至2.484Gy,其增敏比SER为0.746。与对照组相比,经4Gy X射线照射后24h,FABP4过表达和脂肪共培养的人胰腺细胞中处于G2/M期的细胞比率显着降低,发生凋亡的细胞比率以及线粒体膜电位均显着下降。FABP4过表达和脂肪共培养的人胰腺癌细胞中γ-H2AX焦点的形成被明显抑制,并且细胞中DNA损伤修复蛋白ATM、磷酸化ATM和MRN蛋白的表达显着降低。采用FABP4特异性抑制剂BMS309403重复上述实验,检测到与上述结果完全相反的趋势。结论:脂肪型FABP4对胰腺癌细胞的增殖没有影响,但可显着影响人胰腺癌细胞在体内、外的转移。FABP4能影响PANC1细胞的放射敏感性,所涉及的机制可能与其对细胞周期、细胞凋亡、细胞能量代谢以及DNA损伤修复的调控有关。FABP4发挥上述生物学作用的具体分子机制及相关信号通路仍有待进一步的深入研究。
二、人胰腺癌细胞株放射敏感性的体外研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人胰腺癌细胞株放射敏感性的体外研究（论文提纲范文）
（1）LncRNA TMPO-AS1通过调节miR-873-3p/TRIM11轴影响胰腺癌自噬的作用与机制研究（论文提纲范文）
| 缩略表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 TMPO-AS1/MIR-873-3P/TRIM11在胰腺癌患者中的表达与预后的关系 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 第二章 TMPO-AS1/MIR-873-3P/TRIM11促进胰腺癌的进展 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 第三章 TRIM11通过调控自噬促进胰腺癌进展的作用与机制研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 自噬作用在胰腺癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（2）TPD52对胰腺癌生物学行为的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 胰腺癌组织中TPD52表达与患者临床生物学行为关系的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 抑制TPD52基因表达对胰腺癌细胞生物学行为的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 TPD52调控胰腺癌细胞生物学行为的机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 抑制TPD52基因表达对胰腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 肿瘤蛋白D52在恶性肿瘤中研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）ATM和ISG15在放疗耐受肿瘤细胞中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一部分 获得性放疗耐受——ATM在乳腺癌放疗耐受中的作用和机制研究 |
| 绪论 |
| 第一章 建立放疗耐受乳腺癌细胞株 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第二章 放疗耐受细胞株MD-PR的生物学行为改变 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第三章 MD-PR细胞中DNA损伤修复效率增加 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第四章 ATM表达升高介导MD-PR细胞放射耐受性产生 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第二部分 固有放疗耐受——ISG15 在胰腺癌放/化疗耐受中的作用和机制 |
| 绪论 |
| 第一章 ISG15 表达和肿瘤细胞放射敏感性相关 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第二章 ISG15 表达与胰腺癌患者临床预后的关系 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第三章 ISG15 对胰腺癌细胞生物学行为的调控 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第四章 ISG15 通过自噬途径调控胰腺癌细胞放疗、化疗敏感性 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第五章 ISG15 通过ATG7 影响胰腺癌细胞内自噬水平 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第六章 ISG15 在动物模型中促进胰腺癌细胞增殖和对吉西他滨耐药性 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 总结与展望 |
| 第一部分 总结 |
| 第二部分 总结 |
| 展望 |
| 读博期间学术成果 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录1 抗体与药物 |
| 附录2 图表清单 |
| 参考文献 |
（4）高喜树碱类候选药物TOP0618对胰腺癌放疗增敏作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 高喜树碱类候选药物TOP0618 对胰腺癌细胞体外放疗增敏作用研究 |
| 一、资料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 高喜树碱类候选药物TOP0618 对胰腺癌移植瘤放疗增敏作用研究 |
| 一、资料与方法 |
| 二、结果及分析 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（5）长链非编码RNA RP11-452H21.4在胰腺癌细胞中的功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 lncRNA |
| 1.2.1 lncRNA简介 |
| 1.2.2 lncRNA起源 |
| 1.2.3 lncRNA分类 |
| 1.2.4 lncRNA作用机制 |
| 1.3 lncRNA与胰腺癌 |
| 1.4 前期研究基础 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂/试剂盒 |
| 2.1.3 主要仪器和耗材 |
| 2.1.4 溶液配方 |
| 2.1.5 引物合成 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.1.1 细胞复苏 |
| 2.2.1.2 细胞传代 |
| 2.2.1.3 细胞冻存 |
| 2.2.2 lncRNA Smart Sliencer的合成及细胞转染 |
| 2.2.2.1 lncRNA Smart Sliencer的合成 |
| 2.2.2.2 细胞转染 |
| 2.2.3 pcDNA3.1的合成及细胞转染 |
| 2.2.3.1 pcDNA3.1的合成 |
| 2.2.3.2 细胞转染 |
| 2.2.4 细胞中总RNA提取 |
| 2.2.5 RNA浓度测定 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR检测lncRNA表达 |
| 2.2.8 CCK-8 增殖实验 |
| 2.2.9 Transwell迁移实验 |
| 2.2.10 Transwell侵袭实验 |
| 2.2.11 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Smart Silencer RNA和pc DNA3.1 的干扰效率 |
| 3.2 RP11-452H21.4 的异常表达与胰腺癌细胞增殖能力的关系 |
| 3.3 RP11-452H21.4 的异常表达与胰腺癌细胞迁移能力的关系 |
| 3.4 RP11-452H21.4 的异常表达与胰腺癌细胞侵袭能力的关系 |
| 4 讨论 |
| 4.1 RP11-452H21.4 对胰腺癌细胞增殖能力的影响 |
| 4.2 RP11-452H21.4 对胰腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响 |
| 4.3 RP11-452H21.4 胰腺癌诊断与治疗中的应用前景 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（6）MicroRNA-216a靶向JAK2/STAT3信号通路增加胰腺癌放疗敏感性的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:胰腺癌放疗抵抗细胞株的建立和差异表达miRNA的鉴定 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 细胞培养、复苏、冻存 |
| 2.2.2 细胞照射的方法 |
| 2.2.3 克隆形成实验 |
| 2.2.4 流式细胞仪检测细胞周期 |
| 2.2.5 小RNA高通量测序 |
| 2.2.6 差异表达miRNAs分析 |
| 2.2.7 生物信息分析 |
| 2.2.8 实时荧光定量RT-PCR(Real-time PCR)检测miRNA |
| 2.2.9 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 梯度剂量建立胰腺癌放疗抵抗细胞系 |
| 3.2 克隆形成试验检测胰腺癌放疗抵抗细胞的放射敏感性差异 |
| 3.3 细胞周期检测胰腺癌放疗抵抗细胞的放射敏感性差异 |
| 3.4 SW1990和SW1990-R之间miRNAs差异表达 |
| 3.5 生物信息分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :MicroRNA-216a靶向JAK2/STAT3 信号通路调控胰腺癌放疗敏感性的机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 患者和组织样本 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养和放射治疗 |
| 2.2.2 克隆形成实验 |
| 2.2.3 CCK-8 试验 |
| 2.2.4 实时荧光定量RT-PCR(Real-time PCR) |
| 2.2.5 Western blot |
| 2.2.6 转染 |
| 2.2.7 免疫组化 |
| 2.2.8 结果判读 |
| 2.2.9 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 X射线照射增加胰腺癌细胞JAK2 的表达 |
| 3.2 激活JAK2/STAT3 信号通路导致放疗抵抗 |
| 3.3 siJAK2 增加胰腺癌放疗抵抗细胞的放疗敏感性 |
| 3.4 JAK2/STAT3 信号通路抑制剂AG490 增加胰腺癌放疗抵抗细胞的放疗增敏性 |
| 3.5 miR-216a靶向JAK2 增加胰腺癌放疗抵抗细胞的放疗敏感性 |
| 3.6 胰腺癌患者临床资料 |
| 3.7 JAK2 在胰腺癌和癌旁组织中的表达情况 |
| 3.8 JAK2 在放疗敏感胰腺癌和放疗抵抗胰腺癌中的表达情况 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）PTEN通过抑制EMT表型及VM形成进而逆转胰腺癌细胞吉西他滨耐药性、放射抵抗的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstracts |
| 英文缩略词 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 培养建立胰腺癌细胞放射抵抗株 |
| 2.2.3 培养建立胰腺癌细胞吉西他滨耐药株 |
| 2.2.4 克隆形成实验 |
| 2.2.5 MTT实验 |
| 2.2.6 细胞划痕实验 |
| 2.2.7 细胞Transwell迁移实验 |
| 2.2.8 细胞Transwell侵袭实验 |
| 2.2.9 基质胶小管形成实验 |
| 2.2.10 Western Blot分析 |
| 2.2.11 细胞转染 |
| 2.2.12 细胞增殖检测 |
| 2.2.13 细胞周期检测 |
| 2.2.14 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 抗性细胞的形态、药物敏感性、放射敏感性、迁移侵袭力及VM改变 |
| 3.1.1 抗性细胞的形态改变 |
| 3.1.2 抗性细胞株的抗性检测 |
| 3.1.3 抗性细胞株的迁移侵袭能力检测 |
| 3.1.4 抗性组细胞的血管生成拟态形成改变 |
| 3.1.5 抗性细胞蛋白表达检测 |
| 3.2 增强PTEN表达对抗性细胞株的影响 |
| 3.2.1 PTEN质粒转染对胰腺癌抗性细胞 |
| 3.2.2 增强PTEN表达对抗性细胞药物敏感性性及放射敏感性的影响 |
| 3.2.3 增强PTEN表达对抗性细胞迁移侵袭能力的影响 |
| 3.2.4 增强PTEN表达对抗性细胞血管生成拟态的影响 |
| 3.3 其他同样影响放射敏感性和耐药性的因素 |
| 3.3.1 细胞增殖速度 |
| 3.3.2 细胞周期改变 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本论文创新性的自我介绍 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）CUDC-907通过HDAC6抑制c-Myc表达在胰腺癌治疗中的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 胰腺癌现状、相关发病机制及治疗策略 |
| 1.2 c-Myc在肿瘤发生发展中的关键作用 |
| 1.3 课题研究内容及拟解决问题 |
| 第二章 CUDC-907抗胰腺癌的机制研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要化合物 |
| 2.1.2 主要试剂和耗材 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 |
| 2.1.4 细胞 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 抗胰腺癌细胞增殖抑制剂初步筛选 |
| 2.2.2 SRB法检测细胞增殖实验 |
| 2.2.3 平板克隆实验 |
| 2.2.4 WesternBlot |
| 2.2.5 Real-timePCR |
| 2.2.6 细胞干扰实验 |
| 2.2.7 稳定高表达细胞株建立 |
| 2.2.8 数据统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 CUDC-907显着抑制胰腺癌细胞体外增殖 |
| 2.3.2 CUDC-907抑制胰腺癌细胞克隆形成 |
| 2.3.3 CUDC-907的靶点确证 |
| 2.3.4 CUDC-907调节c-Myc蛋白及mRNA水平变化 |
| 2.3.5 CUDC-907主要通过下调c-Myc抑制细胞增殖 |
| 2.3.6 CUDC-907通过HDACs和PI3K双靶点抑制c-Myc的表达 |
| 2.3.7 CUDC-907通过活化c-Myc磷酸化而被泛素化酶识别导致c-Myc降解 |
| 2.3.8 CUDC-907通过抑制HDAC6酶活促进FOXO1蛋白的表达,进而抑制c-Myc表达 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 第三章 CUDC-907抗胰腺癌药效学研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要化合物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器和设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞凋亡检测 |
| 3.2.2 细胞周期分布检测 |
| 3.2.3 裸小鼠移植瘤实验 |
| 3.2.4 WesternBlot |
| 3.2.5 免疫组化实验(IHC) |
| 3.2.6 数据统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 CUDC-907阻滞胰腺癌细胞于G2/M期并显着诱导胰腺癌细胞凋亡 |
| 3.3.2 CUDC-907显着抑制胰腺癌Aspc-1裸小鼠皮下移植瘤的生长 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 第四章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（9）超顺磁性氧化铁双模态纳米探针在胰腺癌诊疗中的应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 超顺磁性氧化铁双模态纳米探针的构建及性能检测 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 第二部分 被动靶向胰腺癌细胞分子探针的体外实验 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 第三部分 被动靶向胰腺癌组织分子探针的体内实验 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 获奖情况 |
| 致谢 |
（10）脂肪型FABP4对胰腺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响与机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 脂肪型FABP4对人胰腺癌细胞增殖、转移的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 结果 |
| 一、人脂肪组织共培养人胰腺癌细胞后对FABPs家族mRNA表达的变化 |
| 二、成功获得过表达FABP4的人胰腺癌细胞 |
| 三、获取FABP4抑制剂BMS309403最适作用浓度 |
| 四、脂肪型FABP4对人胰腺癌细胞内脂肪聚集的影响 |
| 五、脂肪型FABP4对人胰腺癌细胞增殖的影响 |
| 六、脂肪型FABP4对人胰腺癌细胞体外迁移的影响 |
| 七、脂肪型FABP4对人胰腺癌细胞体外侵袭的影响 |
| 八、脂肪型 FABP4 对胰腺癌细胞 PANC1 在裸鼠体内转移的影响 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 脂肪型FABP4对人胰腺癌细胞放射敏感性影响及初步机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 结果 |
| 一、脂肪型FABP4对人胰腺癌细胞PANC1放射敏感性的影响 |
| 二、脂肪型FABP4对受照后PANC1细胞周期的影响 |
| 三、脂肪型FABP4对受照后PANC1细胞凋亡的影响 |
| 四、脂肪型FABP4对受照后PANC1细胞线粒体膜电位的影响 |
| 五、脂肪型FABP4对受照后PANC1细胞DNA损伤的影响 |
| 六、脂肪型FABP4对受照后PANC1细胞DNA双链损伤修复相关蛋白的影响 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 硕士期间参与的科研及学术活动 |
| 中英文分类词表 |
| 致谢 |
四、人胰腺癌细胞株放射敏感性的体外研究（论文参考文献）
- [1]LncRNA TMPO-AS1通过调节miR-873-3p/TRIM11轴影响胰腺癌自噬的作用与机制研究[D]. 张翌. 南方医科大学, 2020
- [2]TPD52对胰腺癌生物学行为的影响及机制研究[D]. 王振勇. 河北医科大学, 2020(01)
- [3]ATM和ISG15在放疗耐受肿瘤细胞中的作用及机制研究[D]. 卞蕾. 上海交通大学, 2020(01)
- [4]高喜树碱类候选药物TOP0618对胰腺癌放疗增敏作用研究[D]. 汤寅. 中国人民解放军海军军医大学, 2019(03)
- [5]长链非编码RNA RP11-452H21.4在胰腺癌细胞中的功能研究[D]. 尤倩. 湖南师范大学, 2019(01)
- [6]MicroRNA-216a靶向JAK2/STAT3信号通路增加胰腺癌放疗敏感性的机制研究[D]. 王思亮. 中国医科大学, 2019(01)
- [7]PTEN通过抑制EMT表型及VM形成进而逆转胰腺癌细胞吉西他滨耐药性、放射抵抗的实验研究[D]. 韦春密. 中国医科大学, 2019(02)
- [8]CUDC-907通过HDAC6抑制c-Myc表达在胰腺癌治疗中的研究[D]. 傅旭宏. 南昌大学, 2018(07)
- [9]超顺磁性氧化铁双模态纳米探针在胰腺癌诊疗中的应用研究[D]. 任帅. 泰山医学院, 2018(06)
- [10]脂肪型FABP4对胰腺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响与机制研究[D]. 鹿伦杰. 苏州大学, 2017(05)