一、糖尿病肾病间质小管损害和TGF-β（论文文献综述）
赵婷[1]（2021）在《商陆粗提取物对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smads信号通路调控作用的初探》文中提出目的:观察商陆粗提取物对糖尿病肾病模型大鼠肾组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达的影响,研究商陆粗提取物的疗效及其可能机制。方法:65只体重在180～220g的8周龄雄性SD大鼠,用数字表随机生成法选出8只作为阴性对照组,余下57只予以腹腔注射STZ行糖尿病造模;去除血糖不达标大鼠12只,将血糖达标的45只大鼠随机分为5组,每组9只,分别为:糖尿病肾病组、商陆高剂量组、商陆中剂量、商陆低剂量、氯沙坦钾组。大鼠继续饲养4周后检测尿蛋白/尿肌酐值>30μg/mg开始给药治疗,阴性对照组及糖尿病肾病组予以盐水灌胃,其余各组大鼠予以相对应药物灌胃,连续给药治疗4周后取血和肾脏。检测尿蛋白/肌酐值、肾脏/体重指数、血糖;HE、Masson染色观察分析大鼠肾脏病理改变;免疫组化检测纤连蛋白（Fibronectin,FN）、TGF-β1蛋白的表达及分布;蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）检测肾组织中Smad2、Smad3、Smad7和TGF-β1蛋白的表达情况。结果:（1）尿蛋白/肌酐值、肾脏/体重指数、血糖检测结果显示,与阴性对照组相比,糖尿病肾病组大鼠的尿蛋白/肌酐值、肾脏/体重指数、血糖显着升高（P<0.05）;而与糖尿病肾病组相比,各剂量商陆及氯沙坦钾治疗后指标呈降低趋势（P<0.05）。（2）肾脏病理染色结果显示,阴性对照组大鼠在光镜下见肾小球结构完整,肾小管结构清晰,排列整齐,肾小管间质结构正常;糖尿病肾病组大鼠存在不同程度系膜外基质增多,肾小球内细胞增生,肾小管腔内可出现少量蛋白管型,肾小管上皮细胞存在刷状缘脱落、细胞空泡化,其中各剂量商陆及氯沙坦钾药物干预治疗后肾脏病理表现可得到一定改善。（3）免疫组化检测结果:糖尿病肾病组大鼠肾组织TGF-β1、FN蛋白的光密度（intergrated optical density,IOD）显着升高（P<0.05）;与糖尿病肾病组比较,各给药组大鼠肾组织中的TGF-β1、FN蛋白IOD显着降低（P<0.05）。（4）WB检测结果:与阴性对照组比较,糖尿病肾病组TGF-β1、Smad2、Smad3表达量显着升高（P<0.05）,Smad7蛋白表达量显着降低（P<0.05）;与糖尿病肾病组比较,各给药组大鼠肾组织中的TGF-β1、Smad2、Smad3表达呈降低趋势,Smad7蛋白呈升高趋势;其中商陆高剂量组较商陆低剂量组变化更加显着（P<0.05）。结论:商陆粗提取物可能通过抑制TGF-β1分泌,下调Smad2、Smad3蛋白的表达,上调肾组织中Smad7蛋白表达,从而参与调节TGF-β1/Smads通路活性来改善糖尿病肾病大鼠病情。
苏珊珊[2]（2021）在《基于miR-218/GPRC5A通路探讨补阳还五汤干预糖尿病肾损伤的机制研究》文中研究表明背景:糖尿病肾病（DN）是继发于糖尿病的重要微血管并发症,是终末期肾病的主要病因。现已证实高血糖环境可对所有类型的肾脏固有细胞产生深远影响,导致肾小球硬化及小管间质纤维化,最终导致不可逆转的肾功能衰竭。新近研究显示DN的肾小管病变可独立于肾小球病变发生,与肾功能恶化有更密切的相关性,在DN的进展中亦起到了关键作用。因此寻找以肾小管细胞为靶点的生物标志物可能有助于DN的研究及临床治疗。大量研究已证实miRNAs参与调节DN发病过程中的多个环节,同时高糖环境下的体内及体外实验也证实肾脏固有细胞可以诱导miRNA表达,因此识别潜在的特异性miRNAs生物标志物有助于早期预测或检测糖尿病的发展和进展及其并发症。补阳还五汤出自清代王清任《医林改错》,为益气活血的代表方剂,多用于气虚血瘀病证的治疗。大量研究显示:补阳还五汤可通过多种途径减轻糖尿病肾病的临床症状、改善肾脏固有细胞病理损伤,从而延缓肾功能下降。目的:1、通过体外实验探讨miR-218/GPRC5A通路在高糖诱导肾小管上皮细胞损伤中意义及可能的作用机制。2、采用db/db小鼠模型,验证经典名方补阳还五汤对db/db小鼠肾损伤的干预作用,探讨其对miR-218/GPRC5A通路的调控作用,进一步解释其分子生物学机制,为揭示糖尿病肾病的发病机制和未来的治疗策略提供新的思路。方法:1.miR-218/GPRC5A通路在高糖诱导HK-2细胞损伤中的作用机制1.1生信分析从GEO数据库下载数据,利用GEO在线分析工具GEO2R进行差异基因分析,确认miR-218进行研究。运用靶基因网站Target Scan和miRDB进行miR-218靶目标预测。1.2 miR-218/GPRC5A通路在高糖诱导肾小管上皮细胞损伤中的机制（1）细胞培养:人肾近端小管细胞（HK-2）购自ATCC。细胞在37°C添加10%胎牛血清的DEME培养基中培养,生长至60%,血清饥饿12h后分为高糖组、正常糖组及对照组。（2）细胞转染:miR-218 mimic/inhibitor及各自阴性对照、pc DNA3.1-GPRC5A和相应的对照载体由Lipofectamine 3000转染至细胞内。48h后用q RT-PCR检测转染效率。（3）q RT-PCR:Trizol提取全RNA,利用Prime Script RT Reagent Kit反转录成c DNA。利用SYBR Premix Ex Taq II在7500 real-time PCR system检测miRNA表达,GAPDH作为内参,2-ΔΔCt用于分析m RNA相对表达。（4）Western blot:用RIPA裂解液提取蛋白质,BCA法测定蛋白浓度,95°C加热5min。在垂直电泳槽中加入等量蛋白质,用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质样品。转膜至PVDF膜,加入5%脱脂奶粉封闭1h,一抗4℃孵育过夜,TBST洗3×5min,二抗室温孵育1 h,洗膜后加ECL显影。QUANTITY ONE软件扫描灰度值,以GAPDH为内参对照,目的蛋白/内参计算各蛋白的相对表达量。（5）CCK-8检测:将细胞悬液以每孔1000个细胞的标准种到96孔板中,常规培养,每隔24h检测一次细胞活力,测定450nm吸光度,用OD值绘制增殖曲线。（6）凋亡检测:收集细胞到离心管中,1000 rpm离心5min,加入4℃预冷的PBS重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸出上清。加入1X结合缓冲液重悬细胞,调节细胞密度为1-5×106/ml。取100 ul细胞悬液至于5ml流式管中,加入5 ul Annexin V/FITC混匀后于室温避光孵育5 min。加入10ul PI染液,并加400 ul PBS,后进行上机检测。Flowjo软件对流式结果进行分析处理。（7）荧光素酶报告检测:细胞接种至24孔板,生长至80%汇合度,将GPRC5A-WT和GPRC5A-Mut的3’-UTR克隆到pmiR-RB-REPORTTM双荧光素报告载体中,与miR-218mimic及Control共转染HK-2细胞,利用Dual-Luciferase Reporter Assay Kit检测荧光强度。2.补阳还五汤对调控miR-218/GPRC5A通路干预db/db小鼠肾损伤研究（1）实验小鼠:雄性4W龄自发性II型糖尿病db/db小鼠,随机分为模型组（DKD组）、补阳还五汤低剂量组（DKD+BYHWT-l组）、补阳还五汤高剂量组（DKD+BYHWT-h组）。雄性同遗传背景不发病db/m小鼠,随机分为对照组（Control）、对照组+补阳还五汤低剂量组（Control+BYHWT-l）、对照组+补阳还五汤高剂量组（Control+BYHWT-h）。（2）药物干预:DKD+BYHWT-l组、DKD+BYHWT-h组、Control+BYHWT-l、Control+BYHWT-h分别给予补阳还五汤2.7g/kg/d及5.4g/kg/d灌胃给药,对照组及模型组每日给予等容量生理盐水。（3）肾功能、血糖、尿蛋白排泄率检测:药物干预期间每隔4W测体重、血糖、尿蛋白排泄率（UAE）及血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）指标,喂养至16W后处死。（4）肾组织病理形态观察:取一侧肾组织于4%多聚甲醛中固定,分别进行PAS及Masson染色观察各组小鼠肾组织病理形态及结构改变。（5）另一侧的肾脏组织研磨后进行q RT-PCR检测miRNA表达,Western blot检测GRPC5A以及a-SMA、Vimentin、Col-1蛋白的表达。同时检测凋亡相关蛋白及炎症因子蛋白的表达。3.统计分析采用SPSS22.0和GRAPHPAD Prism 6.0。组间比较采用t检验,组间比较采用单因素方差分析和Tukey’s检验,结果用均数±标准差（SD）表示。P<0.05被认为有显着性差异。结果:1.miR-218/GPRC5A通路在高糖诱导肾小管上皮细胞损伤中的机制1.1从GEO数据库（访问号:GSE114477）下载数据,利用GEO2R进行差异基因分析,结合文献研究确认miR-218进行研究。同时运用靶基因网站进行miR218靶目标预测,结合数据库（访问号:GSE30528）中的差异性基因分析,最终确认GPRC5A作为miR-218的靶基因进行下一步分析。1.2 miR-218/GPRC5A通路在高糖诱导肾小管上皮细胞损伤中的机制（1）采用q RT-PCR方法检测miR-218和炎症因子在NC对照组、NG组和HG组的表达水平。结果显示:miR-218、炎性因子TNF-α和IL-1β在高糖条件下的表达水平明显升高（P<0.01）。（2）高糖条件下HK-2细胞miR-218、炎性因子TNF-α和IL-1β的蛋白表达水平明显高于NC对照组及NG组（P<0.01）。（3）转染miR-218模拟物、miR-218抑制剂或NC miRNA对高糖条件下细胞miR-218表达水平的影响实验显示:miR-218模拟物可上调miR-218的表达水平,而miR-218抑制剂可降低miR-218的表达水平（P<0.01）。采用CCK-8检测HK-2细胞活力,OD结果显示,HG组细胞活力在48h和72h明显低于对照组（P<0.01）。而经miR-218抑制剂转染,miR-218表达下调48h和72h细胞存活率明显高于HG组（P<0.01）。这些结果表明,miR-218的下调促进了高糖条件下肾近端小管细胞的活力。（4）Annexin v/FITC流式细胞术结果显示,与对照组相比,HG组细胞凋亡明显增加,而miR-218缺失后,HG组细胞凋亡率明显降低（P<0.01）。（5）Western blot检测显示:高糖作用下HK-2细胞中裂解蛋白caspase-3、裂解蛋白caspase-9的表达明显增强,经miR-218抑制剂处理后,其表达水平明显下调。与对照组相比,经miR-218抑制剂处理后,HK-2细胞中促凋亡蛋白（裂解caspase-3和裂解caspase-9）的表达明显降低。（6）GPRC5A-WT/Mut和miR-218 mimic/Control用Lipofectamine 3000共转染HK-2细胞,采用双荧光素酶报告实验验证,结果显示:miR-218表达增强后,WT GPRC5A 3?-UTR报告基因荧光素酶活性显着降低（P<0.0 1）。同时证实模拟miR-218可显着降低GPRC5A蛋白和miRNA的表达水平（P<0.01）。（7）miR-218抑制剂和pc DNA3.1-GPRC5A的共转染实验显示,GPRC5A过表达可增强miR-218抑制剂对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的减轻作用。miR-218抑制剂和pc DNA3.1-GPRC5A共转染HK-2细胞后,细胞存活率明显提高,同时凋亡和炎症因子水平明显降低（P<0.01）。2.补阳还五汤调控miR-218/GPRC5A通路改善db/db小鼠肾损伤研究（1）经补阳还五汤干预后,db/db小鼠的体重,空腹血糖、UAE、肾功能指标水平与模型组相比显着改善（p<0.01,p<0.05）。（2）补阳还五汤干预后db/db小鼠肾脏病理形态损伤程度均低于模型组。（3）补阳还五汤干预后db/db小鼠肾组织miR-218表达显着下降,GPRC5A蛋白水平显着提高（P<0.01）。（4）补阳还五汤干预可显着降低db/db小鼠肾纤维化标志性蛋白a-SMA、Vimentin及Col-1表达水平（P<0.01）,抑制肾组织凋亡蛋白裂解caspase-3、裂解caspase-9蛋白及炎症因子TNF-α、1L-1β蛋白的表达（P<0.01,p<0.05）。结论:1.高糖诱导的HK-2细胞miR-218、炎症因子TNF-α和IL-1β表达水平显着升高。2.抑制miR-218的表达可促进高糖条件下肾近端小管细胞的活力,减少高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡。3.miR-218可直接靶向GPRC5A,并负向调控GPRC5A的表达。4.miR-218/GPRC5A通路可调节高糖诱导的肾小管细胞增殖和凋亡,作为治疗糖尿病肾病的潜在有效靶点。5.补阳还五汤可改善db/db小鼠血糖及体重增加过快,减少尿蛋白排泄率,降低血肌酐及血尿素氮,改善肾功能。6.补阳还五汤可减轻DN肾组织病理损伤,抑制肾纤维化相关蛋白的表达,减轻肾组织凋亡蛋白及炎症因子蛋白的表达,延缓肾小球硬化和肾小管间质纤维化。7.补阳还五汤可通过调控miR-218/GPRC5A通路而发挥对DN肾损伤的保护作用,为DN的防治提供了新的可能途径。
刘琳娜[3]（2021）在《灸药结合调节糖尿病肾病大鼠FN/TGF-β1蛋白表达的机制研究》文中研究指明目的:本实验采用高脂高糖饲料喂养结合注射链脲佐菌素（STZ）的方法,建立2型糖尿病肾损害（diabetic nephropathy,DN）的动物模型,应用灸药结合,即中药贴敷神阙穴配合内服组方（金匮肾气丸合五子衍宗丸加减）,对DN模型大鼠进行干预性治疗,并以单一内服中药组方（金匮肾气丸合五子衍宗丸加减）及单一外敷神阙穴为对照,旨在通过检测模型大鼠血糖、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、血脂以及用蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）法检测肾组织中转化生长因子（TGF-β1）及纤维连接蛋白（FN）的含量,探讨灸药结合对DN大鼠肾损害的治疗作用及其可能机制,为临床中医药治疗DN提供证据支持。材料与方法:健康SPF级雄性大鼠50只,体重在250g±20g,适应性喂养1周。随机分为空白对照组10只,常规饲料喂养,造模组40只,高脂高糖饲料喂养。均在适宜室温下饲养28天。造模组中大鼠体重不达340±10g者剔除。造模前禁食12h后对造模组大鼠腹腔以50mg/kg剂量的STZ进行注射,72h后测空腹血糖≥16.7mmol/L即为造模成功,列入观察,其中血糖不达标者补注STZ一次。空白对照组注入同剂量的无菌枸橼酸缓冲液,继续普通饲料喂养,造模组继续给予高脂高糖饲料,自由进食水喂养。从空白对照组和造模组中各随机抽取8只,进行眶静脉取血;定量检测Scr、BUN,（P<0.05）有统计学意义,说明大鼠出现了肾损害。造模期间因体重或血糖太低或不耐受死亡共剔除12只。造模组大鼠用SPSS22.0随机法分为四组,即模型对照组、内治组、外治组、灸药结合组,各7只。内治组按照4ml/kg/d灌胃金匮肾气丸和五子衍宗丸合方加减组方治疗;外治组选用附子、肉桂等药物研磨黄酒调匀贴敷神阙穴同时灌注同等体积的生理盐水,1次/d;灸药结合组是两种治疗方法相配合;空白对照组和模型对照组每天同一时间灌胃相同剂量的生理盐水。各组7d一疗程,共治疗2个疗程。治疗结束后,测量大鼠血糖、血脂、Scr、BUN的含量;用Western Blot法检测肾组织中转换因子β1及FN蛋白的表达。结果:1.对大鼠一般症状的影响:造模组大鼠少神乏力、活动迟缓、毛色不光泽、饮食量及饮水量逐渐增加。给药治疗后,以上症状明显改善,但相比较而言,灸药结合组大鼠精神状态、毛色及身体灵活度等状态优于内治组及外治组。2.对大鼠FBG的影响:治疗后,各治疗组的血糖值与模型对照组血糖值相比呈下降趋势（P<0.05）并高于空白对照组血糖值;内治组和外治组无显着性差异（P>0.05）,但灸药结合组的血糖值明显优于内治组和外治组（P<0.01）。3.对大鼠血脂的影响:与空白对照组相比,模型对照组TC、TG、LDL-C明显升高（P<0.05）;与模型对照组相比,各治疗组TC、TG、LDL-C含量下降,尤其以灸药结合组差异性更大（P<0.01）;其余四组与空白对照组相比,HDL-C含量明显降低（P<0.05）。4.对大鼠Scr、BUN的影响:模型对照组与空白对照组相比Scr、BUN明显升高（P<0.05）;治疗给药组无论Scr、BUN均较模型对照组低,且差异化有统计学意义,尤其以灸药结合组更明显（P<0.01）;内治组和外治组无显着性差异（P>0.05）。5.Western-Blot法检测肾组织中的TGF-β1及FN:与空白对照组相比,模型对照组的TGF-β1、FN的蛋白表达水平升高,灰度值有统计学意义（P<0.01）;与模型对照组相比,内治组、外治组、内外结合组的TGF-β1及FN蛋白表达含量均显着降低（P<0.01）,具有统计学差异;内治组和外治组的TGF-β1及FN蛋白表达无统计学意义（P>0.05）,与其他治疗组相比的灸药结合组的TGF-β1及FN蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1灸药结合的干预治疗可以改变DN大鼠的一般状态,改善糖尿病肾病早期肾损害的部分病理症状。2灸药结合可以降低血糖、血脂、Scr、BUN的含量,调节糖脂代谢紊乱,能够祛痰活血,化瘀通络。3灸药结合可以下调TGF-β1及FN的蛋白表达,抑制肾小球及肾脏纤维化病变进程,降低肾小球高滤过率,改善肾功能,有效减缓DN的发展。
张亮[4]（2021）在《基于中医象思维探讨肾衰饮干预慢性肾功能衰竭大鼠的机制研究》文中指出目的:基于中医象思维研究肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路、Fas/Fas L介导的凋亡途径、PI3K/Akt信号通路的影响,探讨该方防治慢性肾功能衰竭的作用机制。材料与方法:选取6周龄SPF级健康雄性SD大鼠84只,随机抽取12只大鼠为正常组,其余72只为造模组。造模组大鼠应用腺嘌呤（200mg/（kg·d））灌胃3周建立慢性肾功能衰竭大鼠模型,将造模成功大鼠再随机分为模型组、肾衰饮组、尿毒清组、P13K抑制剂组（LY组）及肾衰饮+LY组。正常组和模型组予0.9%Nacl溶液8ml/（kg·d）灌胃。肾衰饮组给予中药复方汤剂肾衰饮煎剂按生药量33.3g/（kg·d）灌胃。尿毒清组给予尿毒清颗粒以2.25g/（kg·d）浓度灌胃。LY组给予腹腔注射P13K抑制剂（LY294002）稀释液50mg/kg,周一次。肾衰饮+LY组在给予肾衰饮煎剂按生药量33.3g/（kg·d）灌胃基础上腹腔注射LY294002稀释液50mg/kg,周一次。以上各组大鼠均连续用药4周。各组分别留取大鼠血清及肾组织,检测各项指标。实验一:观察大鼠一般状态,肉眼观察肾脏外观形态,光镜下观察大鼠肾组织病理改变及TUNEL染色法检测凋亡细胞情况。全自动生化分析仪检验大鼠血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平。实验二:免疫印迹法（Western Blot法）和免疫组织化学法检测大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达情况。实验三:Western Blot法检测肾脏组织Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达情况。实验四:Western Blot法检测肾脏组织Akt、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达情况。结果:1肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏形态学及肾功能的影响1.1肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠一般状态的影响正常组:精神状态良好,毛色光泽,较少有脱毛现象,活动正常,反应灵活,每日进食量及饮水量均正常,垫料气味较淡,大鼠便质如常排便未见异常。模型组:体重明显下降,精神状态萎靡,毛色干枯晦暗,并出现脱毛现象,反应迟钝,活动减少,进食量减少,饮水量增加,垫料气味臭秽,稀便。尿毒清组:体重不同程度下降,精神状态萎靡,毛色干枯、脱落,精神中度萎靡,反应略有迟钝,活动减少,进食量减少,饮水量增多,垫料气味臭秽,稀便。肾衰饮组:体重不同程度下降,精神轻度萎靡,毛色干枯脱毛现象较轻,反应尚可,活动度尚可,进食量尚可,饮水量略增加,垫料气味臭秽,可见便质如常排便未见异常。1.2肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏形态学的影响1.2.1肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏组织外观形态的影响与正常组比较,其余各组大鼠肾脏体积均不同程度的增大,其中模型组改变最为明显,尿毒清组其次,最后为肾衰饮组。与正常组比较,模型组大鼠肾脏组织表面均呈弥漫性细颗粒状改变,凹凸不平,被膜粘连,不易剥离,且外观颜色均明显发白,肉眼观察外观颜色发白程度:模型组>尿毒清组>肾衰饮组>正常组。沿肾门纵行剖开,除空白组外各组肾组织切面处均可见肾皮质不同程度变薄,且皮髓质界限欠清晰,其中模型组最明显,其他各组肉眼观察无明显区别。1.2.2肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠体质量及肾指数的影响各组大鼠实验前及造模第1周体质量比较无明显差异;与正常组比较,第2周、第3周造模组大鼠体质量明显降低（P<0.05）;治疗期间:第1周:与正常组比较,模型组、尿毒清组和肾衰饮组大鼠体质量明显降低（P<0.01）;第2周和第3周:与正常组比较,模型组与尿毒清组大鼠体质量明显降低（P<0.05）,肾衰饮组无明显差异;与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组大鼠体质量无明显差异;第4周:与正常组比较,模型组、尿毒清组和肾衰饮组大鼠体质量明显降低（P<0.01）,肾指数明显升高（P<0.01）,与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组大鼠体质量明显升高（P<0.05）,肾指数降低（尿毒清组P<0.01,肾衰饮组P<0.05）,尿毒清组与肾衰饮组大鼠体质量、肾指数比较无明显差异。1.2.3肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏病理学的影响苏木精-伊红（HE）染色结果:正常组可见肾小球、肾小管、系膜结构正常,间质未见增宽,无炎性细胞浸润。模型组可见肾小球囊腔变大,部分肾小管萎缩,小管的管壁薄厚不匀,肾小管上皮细胞弥漫空泡变性,成纤维细胞增多,系膜细胞增生明显,肾小球周围可见大量炎性细胞浸润。尿毒清组可见肾小管上皮细胞空泡变性减轻,系膜细胞轻度增生,部分区域伴有炎性细胞浸润。肾衰饮组可见成纤维细胞减少,系膜细胞轻度增生,部分区域伴有炎性细胞浸润。肾衰饮组在肾小管上皮细胞空泡变性及系膜细胞增生程度均低于尿毒清组。1.3肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠血清Scr、BUN水平的影响与正常组比较,模型组血清Scr、BUN水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组血清Scr、BUN水平均明显降低（P<0.01）,尿毒清组和肾衰饮组比较无统计学差异。2肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏细胞凋亡情况的影响TUNEL染色后显微镜下观察:正常组大鼠肾脏组织中细胞正常,未见阳性细胞;模型组大鼠肾脏细胞凋亡数量明显增多,且主要分布在髓质区;尿毒清组和肾衰饮组大鼠肾脏细胞凋亡指数较模型组降低（P<0.01）;尿毒清组和肾衰饮组相比差异无统计学意义。3肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平的影响ELISA法检测大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平:与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平均明显降低（P<0.01）;与尿毒清组比较,肾衰饮组大鼠血清IL-6、TNF-α表达水平降低（P<0.05）。4肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平的影响Western blot法检测肾脏组织内TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平:与正常组相比,模型组大鼠肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）;与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组大鼠肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）,尿毒清组和肾衰饮组比较无统计学差异。免疫组织化学法检测各组大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达情况:光镜下观察,正常组肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达为阴性,模型组TLR4、MyD88、NF-κB蛋白呈强阳性表达,尿毒清颗粒和肾衰饮干预后均能不同程度的减少TLR4、MyD88、NF-κB蛋白的表达（P<0.01）,且两组之间无明显差异。5肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏组织Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达的影响Western blot法检测肾脏组织Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达:与正常组比较,模型组大鼠肾脏组织Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达水平显着增高（P<0.01）;与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组大鼠肾脏组织Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）;尿毒清组和肾衰饮组相比差异均无显着性意义。6肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏组织PI3K/Akt信号通路蛋白表达的影响各组大鼠肾脏组织Akt蛋白表达无明显差异。与正常组比较,模型组大鼠肾脏组织p-Akt蛋白表达水平降低（P<0.01）,p-Akt/Akt比值降低（P<0.01）;与模型组比较,P13K抑制剂组（LY组）大鼠肾脏组织p-Akt蛋白表达水平显着降低（P<0.01）,p-Akt/Akt比值显着降低（P<0.01）;与LY组比较,肾衰饮+LY组大鼠肾脏组织p-Akt蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,p-Akt/Akt比值显着升高（P<0.01）。结论:1基于中医象思维,根据肾藏象的病理之象,提出脾肾虚损是慢性肾功能衰竭发生和发展的病理基础,是产生毒邪的根源;毒邪（湿毒、痰毒、瘀毒）是加重病情进展恶化及迁延不愈的重要外因,证属本虚标实。2拟“抗毒、解毒、排毒”三法于一方,肾衰饮健脾益肾扶正以抗毒;祛湿涤痰化瘀以解毒;通腑泄浊以排毒,攻补兼施。3根据以上病因病机、治则治法,实验研究表明:（1）肾衰饮能够明显改善腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭模型大鼠的一般状态及肾功能,减轻肾脏组织病理损伤,抑制肾脏炎症反应和细胞凋亡,进一步抑制肾脏纤维化,达到治疗慢性肾功能衰竭的目的;（2）肾衰饮能够降低腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭模型大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达,从而抑制炎症反应,减轻肾脏炎性损伤;（3）肾衰饮能够降低腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭模型大鼠Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达水平,对肾脏细胞凋亡起到抑制作用;（4）肾衰饮可能通过激活PI3K/Akt信号通路,进一步抑制其下游的效应靶点Fas L来抑制慢性肾功能衰竭大鼠肾脏细胞凋亡。
杨洁珂[5]（2021）在《原儿茶醛抑制lncRNA9884介导的炎症以改善肾脏纤维化的研究》文中研究表明目的:慢性肾脏病（CKD）及其引起的终末期肾病（ESRD）是危害人类健康的主要疾病之一,其发病率高、并发症多,已经成为引起全球性关注的公共健康问题,给家庭和社会造成了巨大的经济负担。根据美国肾脏数据系统（USRDS）2019年的年报,目前CKD在全球一般人群患病率约为14.5%,其中每100名患者中就有三分之二的病人会发展为不可逆的肾功能衰竭,需要引起广泛的重视。然而目前慢性肾脏病的防治手段较为局限,口服药物和替代治疗方法的选择面都很狭窄,且费用昂贵,亟需开发新药或者新的治疗手段来降低患者治疗成本并有效缓解疾病的进展。长久以来,我国多年来的深厚中医文化底蕴沉淀出了许多对于慢性肾病有效的经方,但因其中药成分繁多,治疗机制复杂难辨,难以形成国际认可并统一的治疗准则。亟待我们深入挖掘其中的小分子成分并探索研究其具体的分子机制。本研究通过构建单侧输尿管阻塞（UUO）诱导的小鼠体内纤维化及炎症的模型和体外提取原代肾小管上皮细胞（TECs）使用TGF-β1诱导刺激纤维化以及IL-1β诱导刺激炎症模型,使用血清肾功能检测、组织切片病理染色、Western Blot、Real-time PCR、ELISA、CCK8毒性分析、免疫组织化学染色和免疫荧光标记、过表达质粒等实验方法和指标,旨在探讨中草药丹参的主要单体成分原儿茶醛（PCA）治疗梗阻性肾病的作用,以及调控lnc RNA9884（LRNA9884）发挥抗炎和抗纤维化的潜在分子机制。方法:首先建立体内SPF级C57BL/6小鼠的梗阻性肾病UUO模型,30只雄性小鼠被随机分为假手术组（Sham组）、梗阻性肾病模型组（UUO组）、低剂量原儿茶醛治疗组（10 mg/kg/d PCA,UUO+PCA 10）和高剂量原儿茶醛治疗组（40 mg/kg/d PCA,UUO+PCA 40）。PCA治疗组手术前腹腔注射给药一次,之后连续注射7天,每日一次,其余各组小鼠每日给予等体积生理盐水腹腔注射。7日之后,麻醉小鼠心脏采血并处死小鼠收集血清和处理肾脏用于开展实验。检测小鼠血清肌酐、尿素氮肾功能指标,组织切片行HE、Masson染色观察肾脏病理学改变情况;免疫组化、免疫荧光或者蛋白印迹,realtime-PCR检测α-SMA、Fibronectin、Smad3、NF-κB、Collagen I及MCP-1、i NOS、COX-2、IL-1β、TNF-α和IL-6的表达;利用realtime-PCR检测LRNA9884表达情况;ELISA测定血清中促炎细胞因子IL-1β,TNF-α和IL-6的分泌情况。在体外利用TECs分别建立IL-1β刺激诱导的细胞炎症模型和TGF-β1刺激诱导的细胞纤维化模型,并同时予以PCA不同浓度治疗组（20μM,40μM,80μM）一同处理24小时后,收集细胞上清和细胞,并及时提取蛋白、RNA冻存用于后续的实验。免疫荧光染色近端肾小管标志物AQP1、CK18以检测所提取TECs细胞纯度;CCK-8检测不同浓度PCA干预后的细胞活力并筛选出适宜浓度作为体外治疗的剂量;利用蛋白印迹,realtime-PCR实验方法检测各组细胞中α-SMA,Fibronectin,Collagen I,Smad3,NF-κB及MCP-1,i NOS,COX2,TNF-α和IL-6的表达;通过realtime-PCR检测各组细胞中LRNA9884的表达情况;ELISA测定细胞上清液中促炎细胞因子TNF-α和IL-6的分泌情况;进一步通过体外转染pc DNA3.1-LRNA9884质粒在TECs中过表达LRNA9884,检测上述指标的变化情况。结果:通过血清肌酐、尿素氮的检测结果以及观察组织切片HE染色情况我们发现予以PCA治疗可部分逆转UUO引起的肾功能不全和病理改变。Masson染色及纤维化代表指标α-SMA,Fibronectin,Collagen I蛋白和m RNA水平realtime-PCR检测发现予以PCA治疗可显着减轻UUO所引起的纤维沉积。通过免疫荧光、蛋白印迹,realtime-PCR以及ELISA检测发现PCA干预后在蛋白和m RNA水平上均降低了UUO所引起的炎症细胞因子的过度表达。进一步检测发现PCA降低了NF-κB和Smad3通路的活化以及LRNA9884的表达。根据CCK-8检测结果筛选出药物适宜治疗浓度（20μM,40μM,80μM）,通过蛋白印迹,realtime-PCR检测发现PCA可以抑制IL-1β诱导的TECs中i NOS、COX2、MCP-1、TNF-α、IL-6、IL-1β促炎细胞因子在蛋白和m RNA水平上的表达。ELISA检测细胞上清发现促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达同样被PCA干预后抑制。蛋白印迹检测进一步发现磷酸化的NF-κB激活受到抑制,realtime-PCR检测发现LRNA9884的表达在PCA干预后呈剂量依赖性下降,结果提示我们PCA的抗炎作用于调控LRNA9884有着密切关系。进一步通过转染pc DNA3.1-LRNA9884质粒在TECs中过表达LRNA9884时,上述指标在蛋白和m RNA水平上的表达均显着逆转,表明PCA的确可通过介导LRNA9884/MCP-1信号通路来抑制炎症反应。进一步使用PCA干预TGF-β1刺激的TECs,我们发现PCA能抑制TGF-β1诱导的纤维化模型中磷酸化的Smad3的活化,在蛋白和m RNA水平上均减轻纤维相关指标α-SMA,Fibronectin,Collagen I的表达,从而阻止上皮-间质转化（EMT）。结论:1.原儿茶醛可改善UUO小鼠肾功能损害,减轻肾小管的坏死。2.原儿茶醛在体内外均可抑制小鼠肾脏上皮-间质转化的发生和促炎因子的浸润。3.原儿茶醛可通过下调LRNA9884/MCP-1信号途径减轻炎症以改善肾间质纤维化。总之,原儿茶醛可通过抑制LRNA9884和NFκB信号途径引起的炎症反应以减轻阻塞性肾病的纤维化,研究结果为PCA在未来应用于临床治疗奠定了新的理论基础。
聂萍[6]（2021）在《间充质干细胞对2型糖尿病肾脏保护作用及机制研究》文中研究指明糖尿病肾病是糖尿病最常见的并发症之一。其主要组织学特点为肾小球肥大、肾小球和肾小管基底膜增厚、肾小球系膜基质增多。糖尿病时高糖血症,诱导高脂血症,二者共同作用加重了肾脏组织的氧化损伤,进一步导致细胞凋亡及纤维化,进而发展为终末期肾病。肾小球系膜细胞是肾小球内的固有细胞,在糖尿病肾病的发生发展中起关键作用。高糖可以引起肾小球系膜细胞的过度增殖,产生活性氧并在肾实质细胞中积聚,导致细胞凋亡、基质重塑、组织纤维化,最终导致肾小球硬化。间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的成体干细胞,有自我更新,低免疫原性,组织修复等特性,可能是治疗糖尿病肾病的一种新方法,其具体机制尚不明确。人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UCMSCs）取材于人脐带组织,具有取材方便,易于分离,纯度高,体外增殖分化能力强,无伦理学争议等优点,比其他来源的干细胞更有应用前景。因此,本研究探讨h UCMSCs对2型糖尿病的肾脏保护作用及机制。研究指出,间充质干细胞可以通过调节核因子网织红细胞2相关因子2（Nuclear factor erythroid2-related factor2,Nrf2）减轻细胞凋亡,从而减轻肺损伤、脊髓损伤及肝脏损伤。Nrf2是调节氧化损伤的重要转录因子,亦参与抗细胞凋亡。间充质干细胞是否通过调节Nrf2改善糖尿病时肾脏氧化损伤,进一步起到抗凋亡及纤维化的作用值得我们深入探讨,因此我们进行了以下实验。第一部分,通过体内及体外实验,证明h UCMSCs对2型糖尿病有肾脏保护作用。体内实验,选用体重180-200g的斯普拉格-道利大鼠,高脂饮食喂养,6周后一次性腹腔注射35mg/kg剂量的链脲佐菌素,建立2型糖尿病模型。监测血糖、尿量及尿蛋白,STZ注射8周后,糖尿病大鼠尿量明显增多,出现尿蛋白,开始尾静脉注射h UCMSCs,每次2*106个/只,间隔10天,共注射3次。末次注射h UCMSCs 10天后处死大鼠。通过western blot、RT-q PCR、免疫组化、TUNEL染色等方法检测肾脏氧化损伤,炎症反应,凋亡,以及纤维化指标,观察h UCMSCs对糖尿病大鼠的肾脏保护作用。体外实验,以高糖高脂刺激的肾小球系膜细胞作为模拟2型糖尿病的细胞模型,并应用transwell小室构建肾小球系膜细胞和h UCMSCs共培养体系,观察h UCMSCs对高糖高脂刺激的肾小球系膜细胞的保护作用。第二部分,探讨h UCMSCs对2型糖尿病的肾脏保护作用的具体机制。首先应用western blot、RT-q PCR等方法检测Nrf2及Nrf2下游因子的表达水平,探讨h UCMSCs是否影响Nrf2及下游因子的表达;其次,分离大鼠肾组织核蛋白,通过western blot检测细胞核及细胞浆蛋白中Nrf2的含量,进一步探讨h UCMSCs对Nrf2的调节的方式是仅通过增加其表达,还是通过促进核转位;并应用细胞免疫荧光染色检测肾小球系膜细胞Nrf2的位置及表达水平;之后,给予肾小球系膜细胞Nrf2 si RNA干扰,观察特异性抑制Nrf2表达之后,h UCMSCs对系膜细胞的保护作用是否减弱,证实Nrf2是h UCMSCs治疗糖尿病肾病中的关键因子。最后,通过western blot检测PI3K/AKT/m TOR信号通路蛋白的磷酸化水平,探讨h UCMSCs是否通过激活Nrf2上游的PI3K/AKT/m TOR信号通路保护糖尿病肾病。本实验的研究结果如下:1.HUCMSCs降低2型糖尿病大鼠血糖,尿蛋白及肾脏肥大指数体内实验,我们检测了实验结束时各组大鼠的生化指标,发现给予h UCMSCs治疗的糖尿病大鼠血糖,尿微量白蛋白/尿肌酐,肾脏肥大指数明显低于糖尿病组大鼠（P<0.05）。2.HUCMSCs改善2型糖尿病大鼠肾脏组织学病变通过肾组织病理染色发现,糖尿病组大鼠肾小球面积增大,系膜基质增多,肾小球基底膜增厚,足细胞足突融合,肾小球及小管间质出现纤维化,给予h UCMSCs治疗后,上述病变明显减轻。3.HUCMSCs减轻2型糖尿病大鼠肾脏氧化损伤、炎症、凋亡及纤维化糖尿病大鼠肾组织氧化损伤指标丙二醛水平,4-HNE,炎症指标PAI-1,ICAM-1,TNF-α,凋亡指标caspase-3,纤维化指标TGF-β,CTGF和CollagenⅣ的表达水平与对照组大鼠相比,明显增加（P<0.05）,h UCMSCs治疗后,糖尿病大鼠丙二醛水平及上述蛋白表达明显降低（P<0.05）;此外,TUNEL染色证实,h UCMSCs治疗的糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡水平明显低于糖尿病组。4.HUCMSCs对高糖高脂干预的肾小球系膜细胞有保护作用体外实验证实,与对照组相比,高糖高脂处理的肾小球系膜细胞氧化损伤指标4-HNE,凋亡相关蛋白caspase-3的表达水平明显增加,Bcl2/Bax明显降低（P<0.05）;给予h UCMSCs共培养可显着降低系膜细胞4-HNE,caspase-3的表达水平,并上调Bcl2/Bax（P<0.05）。5.HUCMSCs促进Nrf2及其下游因子的表达体内实验,通过免疫组化染色证实h UCMSCs治疗的糖尿病大鼠肾组织中Nrf2表达明显高于糖尿病大鼠;h UCMSCs治疗的糖尿病大鼠Nrf2及下游因子SOD2,NQO-1,HO1的表达明显高于糖尿病组（P<0.05）。体外实验,高糖高脂刺激的肾小球系膜细胞中Nrf2及SOD2,NQO-1,HO1的表达低于对照组（P<0.05）,h UCMSCs共培养后,Nrf2及下游因子表达明显高于高糖高脂刺激组（P<0.05）。6.HUCMSCs不仅增加Nrf2表达,而且促进Nrf2核转位体内实验证实,与对照组和糖尿病组相比,h UCMSCs治疗的糖尿病大鼠肾组织细胞核Nrf2的表达均增加（P<0.05）,而细胞浆中Nrf2表达无统计学差异,说明在糖尿病时,h UCMSCs不仅能增加Nrf2表达,而且能够促进Nrf2核转位。体外实验,用细胞免疫荧光方法非定量观察Nrf2表达位置及表达水平,结果发现,对照组及高糖高脂组,Nrf2主要在聚集在细胞质中,给予h UCMSCs共培养后,肾小球系膜细胞Nrf2的荧光强度明显增加,且核内聚集明显增多。7.Nrf2在h UCMSCs保护糖尿病肾病的过程中起关键作用通过体外实验,给予Nrf2 si RNA干扰后,高糖高脂刺激的肾小球系膜细胞4-HNE,Bax蛋白表达明显高于对照组（P<0.05）,而给予h UCMSCs共培养不能减低上述蛋白的表达水平（P>0.05）。8.HUCMSCs激活Nrf2上游信号通路PI3K/AKT/m TOR体内实验证实,糖尿病大鼠AKT,m TOR的磷酸化水平明显低于对照组（P<0.05）,h UCMSCs治疗可以上调AKT,m TOR的磷酸化水平（P<0.05）。体外实验证实,h UCMSCs共培养后的系膜细胞PI3K,AKT的磷酸化水平明显高于高糖高脂刺激组,说明PI3K/AKT/m TOR信号传导途径参与了h UCMSCs激活Nrf2治疗糖尿病肾病的过程。综上,我们得出结论,人脐带间充质干细胞能够改善2型糖尿病时肾脏的氧化损伤,炎症、凋亡及纤维化;Nrf2激活是人脐带间充质干细胞保护糖尿病肾脏损伤的重要机制之一。
边红萍[7]（2021）在《基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究》文中研究说明研究目的本研究工作以2.5%腺嘌呤混悬液灌胃与单侧输尿管结扎两种方法复制CRF大鼠模型,以金匮肾气丸“补益肾气”为治法,研究肺、肾、膀胱上APQ1-4的表达,探讨机体水液代谢的调控与机理,评价中医“肾主水”理论的科学性,为金匮肾气丸在中医慢性肾脏病的治疗与干预水液代谢调控提供实验依据。研究方法1金匮肾气丸治疗腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠实验研究将60只健康雄性SD大鼠,随机分正常组（n=20只）和腺嘌呤造模组（n=40只）,适应性喂养1周后,用2.5%的腺嘌呤悬浊液剂量为250mg/（kg·d）灌胃复制CRF模型4周,两组中各取10只大鼠进行血、尿肾组织病理检测,评估腺嘌呤CRF大鼠模型。剩余40只大鼠分为正常组、CRF模型组、金匮肾气丸中剂量、金匮肾气丸高剂量4组,每组10只。金匮肾气丸中、高剂量组分别给予对应浓度剂量金匮肾气丸溶液灌胃,正常组、CRF模型组大鼠予以等量蒸馏水灌胃,治疗4周,比较各组大鼠24h-UTP,血常规、血生化与肾脏病理指标。2金匮肾气丸治疗UUO慢性肾功能衰竭大鼠实验研究50只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=10只）和UUO造模组（n=40只）。采用UUO手术法复制CRF模型,将大鼠10%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉,在左肾下极临近肾门处及输尿管的上1/3处用0#丝线结扎并剪断,缝合肌肉皮肤组织。假手术组大鼠给予等量10%水合氯醛腹腔麻醉开腹,仅钝性分离左侧输尿管并不予以结扎;正常组不做任何手术处理。UUO术后2周随机抽取10只大鼠评估UUO法CRF大鼠模型。剩余40只大鼠再分为假手术组、UUO模型组、金匮肾气丸中剂量组、金匮肾气丸高剂量组,每组10只。假手术组、UUO模型组采用蒸馏水灌胃;金匮肾气丸中、高剂量治疗组分别给予对应浓度剂量的金匮肾气溶液灌胃,疗程4周,比较各组大鼠的24h-UTP,血常规与生化、肾脏病理指标。（正常组同实验第一部分）3.慢性肾功能衰竭大鼠水通道蛋白表达的实验研究金匮肾气丸治疗4周,腺嘌呤灌胃与UUO法CRF各组大鼠获取肾脏、肺脏、膀胱组织,用Western blotting检测对应的水通道蛋白AQP1、AQP2、AQP3、AQP4,将不同蛋白条带图像用Image J软件进行灰度值分析,对应DAPDH蛋白条带作进行数据矫正。4.采用SPSS18.0软件对实验结果进行分析,计量资料用均数±标准差（x±s）表示,多组间均数的比较采用两独立样本t检验和单因素方差分析,双侧检验,检验水准α=0.05,P<0.05定义为统计差异性显着。研究结果1.腺嘌呤造模组4周大鼠24h U-TP、BUN、Scr与正常组比较均增高,统计有显着性差异（P<0.05）,大鼠肾脏病理损伤与CRF病理表现一致。金匮肾气丸治疗各组与腺嘌呤模型组24h U-TP、BUN、Scr水平比较降低,有显着统计学差异（P<0.05）,金匮肾气治疗组各组大鼠肾脏病理损伤与腺嘌呤模型组相比,有不同程度减轻。2.UUO术后2周大鼠24h U-TP、BUN、Scr水平与正常组比较均升高,统计有显着性差异（P<0.05）,UUO大鼠肾脏病理损伤与CRF病理表现一致。金匮肾气丸各治疗组与UUO模型组24h U-TP、BUN、Scr水平比较降低,有显着统计学差异（P<0.05）。金匮肾气治疗组各组大鼠肾脏病理损伤与UUO模型组相比,有不同程度减轻。3.各组大鼠肾脏、肺脏、膀胱AQP蛋白检测中（1）腺嘌呤模型组大鼠肾脏AQP1-4与膀胱AQP3表达上调,与正常组比较有显着性差异（P<0.05）。肺脏AQP1与膀胱AQP1表达下调,与正常组比较有显着性差异（P<0.05）。（2）UUO模型组大鼠肾脏AQP1与AQP4、肺脏AQP1、膀胱AQP4表达下调,与正常组比较统计有显着性差异（P<0.05）;膀胱AQP3表达上调,与正常组比较统计有显着性差异（P<0.05）。（3）腺嘌呤CRF金匮肾气丸中高剂量治疗组肾脏AQP1-4均有下调,与腺嘌呤模型组比较统计有差异显着性（P<0.05）。膀胱AQP1水平上调,与腺嘌呤模型组比较统计有差异显着性（P<0.05）。（4）UUO金匮肾气丸高剂量治疗组膀胱AQP4蛋白明显上调,与UUO模型组比较有显着性差异（P<0.05）。研究结论1、金匮肾气丸可以改善腺嘌呤与UUO慢性肾功能衰竭大鼠的生存质量,改善肾功能,减少24h尿蛋白定量,减轻大鼠肾脏的病理损害,可不同程度改善肾脏纤维化损伤程度。2、金匮肾气丸治疗UUO与腺嘌呤CRF大鼠,通过调节不同种类与部位AQP表达发挥作用。两者侧重有不同,金匮肾气丸治疗腺嘌呤CRF主要下调肾脏AQP1-4和上调膀胱AQP1表达。金匮肾气丸治疗UUO大鼠,其肾脏与肺脏AQP2、AQP3、AQP4表达上调不显着,而以膀胱AQP4蛋白表达上调突出。
庾雪鹰[8]（2021）在《复方仙草颗粒对早期糖尿病肾病患者肾小管间质损伤保护作用的研究》文中进行了进一步梳理目的:通过观察复方仙草颗粒对Ⅲ期糖尿病肾病（DKD）患者尿-β2微球蛋白（β2-MG）、尿胱抑素C（Cys C）、尿视黄醇结合蛋白（RBP）、尿N-乙酰β-D氨基葡萄糖苷酶（NAG）、尿微量白蛋白/尿肌酐（ACR）、24小时尿蛋白定量（24h-UTP）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、糖化血红蛋白（Hb Alc）等相关指标的影响,评价复方仙草颗粒对早期糖尿病肾病患者肾小管间质保护作用的有效性及安全性。方法:在广西中医药大学附属国际壮医医院和广西中医药大学附属瑞康医院肾内科门诊及住院部选取符合糖尿病肾病诊断标准且符合中医脾肾两虚、湿热瘀血证患者60名作为研究对象。随机分为治疗组和对照组,各30例,对照组采用西医常规治疗（降糖、控制血压、调脂等）,治疗组在对照组治疗的基础上加服复方仙草颗粒,两组共同疗程为12周。监测两组患者治疗前后相关指标变化:β2-MG、Cys C、RBP、NAG、ACR、24h-UTP、Scr、BUN、Hb Alc,对患者治疗前后的临床体征和症状进行观察,对两组治疗后的效果进行评价。结果:1、治疗后两组患者取得较好的疗效,治疗组89.29%优于对照组53.57%（P<0.05）,差异有统计学意义。2、中医证候积分比较:治疗组治疗前后比较神疲乏力、尿多浊沫症状改善明显,差异有统计学意义（P<0.01）;对照组治疗前后,差异有统计学意义（P<0.01）,两组治疗后比较,差异有统计学意义（P<0.01）。3、检测指标的比较:检测指标β2-MG、Cys C、RBP、NAG、ACR、24h-UTP、Scr、BUN、Hb Alc两组治疗前比较无统计学差异（P>0.05）;两组治疗后均较治疗前显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）,且治疗组较对照组下降更为明显（P<0.01）。结论:1.复方仙草颗粒对脾肾两虚,湿热瘀血证的DKD有明显的疗效。2.复方仙草颗粒能降低DKD患者β2-MG、Cys C、RBP、NAG、ACR、24h-UTP、Scr、BUN和Hb Alc的水平,减轻DKD患者肾小管间质损害,具有保护肾脏的作用。
黎妞[9]（2021）在《2型糖尿病肾病大鼠体内IL-10、TGF-β1、HDAC4的表达及临床意义》文中认为背景糖尿病肾病（Diabetic nephropathy,DN）是糖尿病最常见的微血管病变之一。越来越多研究表明,炎症与组蛋白乙酰化在DN的发生、发展中起着极其重要的作用。IL-10是目前公认的抗炎和免疫抑制因子,参与炎症及免疫调节;TGF-β1是一种促纤维化炎症介质,在DN纤维化的发生、发展中起核心作用;HDAC4作为介导组蛋白乙酰化修饰的关键酶。关于炎症与组蛋白乙酰化之间有无内在联系是值得关注的问题。因此,本文以炎症与组蛋白乙酰化修饰为切入点,探讨DN大鼠体内IL-10、TGF-β1、HDAC4的表达及其临床意义。目的探讨2型糖尿病肾病大鼠体内IL-10、TGF-β1、HDAC4的表达,并分析IL-10、TGF-β1、HDAC4之间的关系,了解早期DN的炎症反应与组蛋白乙酰化修饰,有望为DN提供新的治疗靶点及策略。方法64只健康雄性SD大鼠,6-8周龄,体重180-200g,适应性喂养1周随机分为正常对照组（NC组,n=32只）,糖尿病肾病模型组（DN组,n=32只）,高脂高糖联合1%链脲佐菌素诱导糖尿病肾病模型的建立。72h测尾静脉随机血糖>16.7mmol/L,尿蛋白阳性即为造模成功。造模成功后分别于0、4、8、12周末处死大鼠,处死前测体重（Body weight,BW）、血糖、尿微量白蛋白、尿肌酐。处死后称肾重（Kidney weight,KW）计算肾脏指数（Kidney index,KI=KW（mg）/BW（g））,并行HE、PAS、PASM、Masson染色观察肾脏病理变化,应用Western blot方法检测肾组织中IL-10、TGF-β1和组蛋白去乙酰基转移酶4（Histone deacetyltransferase 4,HDAC4）的表达水平;同时留取心脏血应用ELISA检测上述指标表达,并分析IL-10、TGF-β1、HDAC4之间的关系。结果1.一般指标:DN的成模率高达78%,各期DN组大鼠血糖、尿微量白蛋白尿肌酐比均明显高于同期NC组（P<0.01）,直至12周末DN组大鼠血糖仍维持在23.61±2.51mmol/L,尿微量白蛋白尿肌酐比高达74.03±17.38mg/g;8、12周末DN组大鼠体重均明显低于同期NC组（P<0.01）;8、12周末DN组大鼠KI均高于同期NC组（P<0.05,P<0.01）。2.光镜下肾脏病理:光镜下观察NC组大鼠肾组织形态结构未见明显病理改变;12周末DN组可见系膜轻度节段增生,间质散在炎细胞浸润。3.ELISA结果显示:与同期NC组相比,各期DN组血清中IL-10、HDAC4表达水平均显着升高（P<0.01）;0周末两组大鼠血清中TGF-β1表达无明显差异,与同期NC组相比,4、8、12周末DN组大鼠血清中TGF-β1表达显着升高（P<0.01）。4.Western blot结果显示:与同期NC组相比,0、12周末DN组大鼠肾组织IL-10表达水平明显升高（P<0.01）,4、8周末DN组IL-10表达高于同期NC组（P<0.05）;0周末两组大鼠肾组织TGF-β1表达无明显差异,与同期NC组相比,4、8、12周末DN组大鼠肾组织TGF-β1表达明显升高（P<0.01）;0周末DN组大鼠肾组织HDAC4表达高于同期NC组（P<0.05）,与同期NC组相比,4、8、12周末DN组大鼠肾组织HDAC4表达明显升高（P<0.01）。5.DN大鼠肾组织中HDAC4与TGF-β1的表达呈正相关（r=0.928,p<0.01）,HDAC4与IL-10的表达呈负相关（r=-0.648,p<0.01）;血液中HDAC4与TGF-β1的表达呈正相关（r=0.638,p<0.01）,HDAC4与IL-10的表达呈负相关（r=-0.634,p<0.01）,而肾组织及血液中IL-10与TGF-β1表达水平均无明显相关性。结论DN发病过程中炎症、纤维化共存,组蛋白乙酰化亦参与其中;在DN发生发展中组蛋白乙酰化修饰与炎症和纤维化均有一定关联。
安春妹[10]（2020）在《胃泌酸调节素（OXM）类似物改善慢性肾病肾脏纤维化的作用研究》文中认为研究背景和目的:肾纤维化（Renal fibrosis）是多种慢性肾病（Chronic kidney disease,CKD）进展至后期最主要的病理特征,但是目前还没有能够有效治疗或者逆转肾脏纤维化的药物,因此,寻找能够有效防治肾纤维化的药物和方法具有重要的临床意义。胃泌酸调节素（Oxyntomodulin,OXM）作为一种肽类激素,可以同时激活胰高血糖素样肽-1受体（Glucagon like peptide-1 receptors,GLP1R）和胰高血糖素受体（Glucagon receptors,GCGR）两个受体,具有降低血糖和减轻体重等作用。研究发现OXM减肥和调控血糖作用优于单靶点GLP1R激动剂,激活GCGR可避免单个受体激动剂引起的低血糖风险,增加了药物应用的安全性和依存性。目前,OXM对于肾脏是否具有潜在的保护作用还没有相关报道,课题以此为创新点,期望为肾脏纤维化的治疗提供新策略。然而,内源性OXM由于其多肽的本质容易被机体产生的酶降解,因此,我们通过对OXM进行结构修饰后设计合成了6个长效OXM类似物（OA1-OA6）,进行体外和体内实验研究其对肾纤维化的作用并筛选优势多肽化合物。方法:（1）体外实验:高糖培养肾小球系膜细胞（Mesangial cells,MCs）和肾小管上皮细胞（Tubular epithelial cells,TECs）,模拟体外促纤维化环境,通过MTT、Western Blot和ELISA方法检测OXM类似物对高糖诱导细胞增殖和细胞内外纤维化相关因子表达的影响。（2）链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）诱导糖尿病肾病小鼠模型:腹腔注射STZ柠檬酸溶液诱导构建糖尿病小鼠模型,通过生化指标的测定、病理切片染色、免疫组化和RT-PCR方法判定OXM类似物对糖尿病肾病小鼠肾脏功能和纤维化程度以及肾组织中纤维化相关因子表达的影响。（3）单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteral obstruction,UUO）肾间质纤维化小鼠模型:手术结扎小鼠左侧输尿管构建肾间质纤维化小鼠模型,通过生化指标的测定和病理切片染色方法判定OXM类似物对UUO小鼠肾脏功能和纤维化程度的影响。结果:（1）体外实验结果显示,OXM类似物OA2可以抑制高糖刺激引起的MCs和TECs过度增殖,减少细胞内外纤维化相关因子的表达,在细胞水平对肾纤维化的抑制作用优于OA1和OA3-OA6。（2）在STZ诱导糖尿病肾病小鼠模型实验中,OA2能够改善糖尿病肾病小鼠肾脏功能,下调肾组织纤维化相关因子的表达,减轻肾脏纤维化程度,抑制肾纤维化作用优于OA1、OA3-OA6和利拉鲁肽。（3）在UUO肾间质纤维化小鼠模型实验中,OA2能够改善UUO小鼠肾脏功能,减少小鼠肾组织中胶原沉积,但并不能改善输尿管梗阻后引起的肾间质损伤。结论:在研究的6个OXM类似物中,筛选出多肽化合物OA2在细胞水平能够有效抑制高糖诱导MCs和TECs增殖以及纤维化相关因子的表达,在动物实验中具有改善STZ诱导糖尿病肾病小鼠肾纤维化,保护肾脏的作用,可以进一步的深入研究。本课题为多肽化合物OXM类似物的研究和应用提供新的思路,为肾纤维化治疗提供新的靶点和策略。
二、糖尿病肾病间质小管损害和TGF-β（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、糖尿病肾病间质小管损害和TGF-β（论文提纲范文）
（1）商陆粗提取物对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smads信号通路调控作用的初探（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 TGF-β1/Smad信号通路在糖尿病肾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）基于miR-218/GPRC5A通路探讨补阳还五汤干预糖尿病肾损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 主要英文缩略词表 |
| 第一部分 MIR-218/GPRC5A通路在高糖诱导HK-2细胞损伤中的作用机制 |
| 引言 |
| 第一章 生信分析 |
| 材料与方法 |
| 1差异基因分析:GEO数据集GSE114477(miRNA) |
| 2 MIR-218靶基因预测 |
| 3 GPRC5A差异表达分析 |
| 第二章 miR-218/GPRC5A对高糖诱导HK-2的作用及机制探讨 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞系 |
| 1.2 主要材料与试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要溶液试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 HK-2细胞株复苏 |
| 2.2 细跑传代 |
| 2.3 细跑冻存 |
| 2.4 细胞静止 |
| 2.5 细胞分组 |
| 2.6 细胞转染 |
| 3 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) |
| 3.1 全RNA提取 |
| 3.2 逆转录合成cDNA |
| 3.3 PCR扩增 |
| 4 蛋白质印迹法 |
| 4.1 总蛋白提取 |
| 4.2 BCA法测定细胞蛋白浓度 |
| 4.3 Western blot |
| 5 CCK-8(CELL COUNTING KIT-8)检测 |
| 6 ANNEXIN V/FITC凋亡检测 |
| 7 LUCIFERASE ASSAY荧光素酶报告检测 |
| 7.1 pMIR-REPORT载体 |
| 7.2 实验分组 |
| 7.3 细胞转染 |
| 7.4 Luciferase荧光测定 |
| 8 统计分析 |
| 9 结果 |
| 9.1 miR-218在Con、NG、HG组 HK-2中的表达情况 |
| 9.2 炎性因子在Con、NG、HG组 HK-2中的表达情况 |
| 9.3 miR-218对高糖条件下肾小管细胞功能的影响 |
| 9.4 miR-218直接靶向GPRC5A的验证 |
| 9.5 miR-218/GPRC5A对 HG下 HK-2细胞功能的影响。 |
| 讨论 |
| 第二部分 补阳还五汤调控miR-218/GPRC5A通路改善db/db小鼠肾损伤研究 |
| 引言 |
| 第一章 补阳还五汤对db/db小鼠肾脏保护作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂及药品 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 实验主要试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验用药 |
| 2.3 实验动物分组与给药 |
| 2.4 标本收集与处理 |
| 2.5 指标观察及检测 |
| 2.6 肾组织石蜡切片制备 |
| 2.7 肾组织病理染色 |
| 2.8 显微镜下观察肾脏组织形态变化 |
| 3 统计方法 |
| 4 结果 |
| 4.1 各组小鼠一般情况观察 |
| 4.2 各组小鼠体重变化 |
| 4.3 各组小鼠血糖(BS)情况 |
| 4.4 各组小鼠尿蛋白排泄率(UAE)变化 |
| 4.5 各组小鼠肾功能变化 |
| 4.6 各组小鼠肾脏病理结果 |
| 第二章 补阳还五汤对MIR-218/GPRC5A通路的调控作用 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模及分组:同第一章 |
| 2.2 实时荧光定量PCR反应(q RT-PCR) |
| 2.3 免疫印迹法 |
| 3 统计分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 各组小鼠肾组织中miR-218的表达情况 |
| 4.2 Western blot检测GRPC5A、a-SMA、Vimentin、Col-1蛋白的表达 |
| 4.3 Western blot检测凋亡蛋白及炎症因子蛋白的表达 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 MicroRNAs在糖尿病肾病中的研究概况 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 发表论文 |
| 科研课题 |
（3）灸药结合调节糖尿病肾病大鼠FN/TGF-β1蛋白表达的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述一 FN与肾间质纤维化的关系 |
| 参考文献 |
| 综述二 糖尿病“起源”——消渴的认识与发展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（4）基于中医象思维探讨肾衰饮干预慢性肾功能衰竭大鼠的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 观察肾衰饮对CRF大鼠抗炎、抗凋亡的作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 基于TLR4/MyD88/NF-κB通路探讨肾衰饮对CRF大鼠抗炎机制的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 肾衰饮对CRF大鼠肾脏细胞凋亡的调控机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文四 探讨肾衰饮调控CRF大鼠PI3K/Akt通路的作用机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 从炎症及细胞凋亡角度探讨CRF的发病机制及中药防治CRF的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（5）原儿茶醛抑制lncRNA9884介导的炎症以改善肾脏纤维化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分:原儿茶醛对小鼠慢性梗阻性肾脏疾病的作用 |
| 材料与方法 |
| 1.实验动物 |
| 2.实验试剂与仪器 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学处理应用 |
| 结果 |
| 1.原儿茶醛对梗阻性肾病小鼠肾脏外观及功能的影响 |
| 2.原儿茶醛改善梗阻性肾病小鼠肾脏结构变化 |
| 3.原儿茶醛对梗阻性肾病小鼠肾脏上皮-间质转化所导致纤维化的作用 |
| 4.原儿茶醛对梗阻性肾病激活巨噬细胞引起的炎症反应的影响 |
| 5.原儿茶醛改善梗阻性肾病小鼠炎症因子的蛋白表达 |
| 6.原儿茶醛改善梗阻性肾病小鼠促炎细胞因子的m RNA表达 |
| 7.原儿茶醛可参与调节NF-κB和 Smad3 信号途径 |
| 8.原儿茶醛可抑制梗阻性肾病小鼠中LRNA9884 的表达 |
| 第二部分:原儿茶醛分别在IL-1β诱导的炎症和TGF-β1 诱导的纤维化微环境中对小鼠原代肾小管上皮细胞的作用 |
| 材料与方法 |
| 1.细胞培养 |
| 2.实验试剂与仪器 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学处理应用 |
| 结果 |
| 1.原代肾小管上皮细胞的鉴定 |
| 2.原儿茶醛对肾小管上皮细胞的干预浓度筛选 |
| 3.原儿茶醛改善了IL-1β诱导的肾小管上皮细胞促炎因子的蛋白表达 |
| 4.原儿茶醛改善了IL-1β诱导的肾小管上皮细胞促炎因子和LRNA9884的mRNA表达 |
| 5.原儿茶醛对IL-1β诱导的肾小管上皮细胞形态的影响 |
| 6.过表达LRNA9884 阻碍了PCA在 IL-1β诱导的肾小管上皮细胞中的抗炎作用 |
| 7.原儿茶醛抑制了TGF-β1 诱导的肾小管上皮细胞间质转化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 综述 肾纤维化的发病机制及研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（6）间充质干细胞对2型糖尿病肾脏保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 糖尿病肾病的发病机制 |
| 1.1.1 血流动力学改变 |
| 1.1.2 代谢紊乱 |
| 1.1.3 糖尿病肾病与氧化损伤 |
| 1.1.4 糖尿病肾病与炎症 |
| 1.1.5 糖尿病肾病与纤维化 |
| 1.1.6 糖尿病肾病与细胞凋亡 |
| 1.2 Nrf2 与糖尿病肾病 |
| 1.3 MSCS对糖尿病肾脏保护作用研究进展 |
| 1.3.1 MSCs直接分化为受损伤的组织细胞 |
| 1.3.2 MSCs通过旁分泌机制改善肾损伤 |
| 1.3.3 MSCs治疗糖尿病肾病的临床研究 |
| 1.3.4 MSCs治疗糖尿病肾病的展望 |
| 第2章 HUCMSCS对糖尿病大鼠肾脏的保护作用 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要抗体 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 HUCMSCs的制备、培养及鉴定 |
| 2.2.2 2 型糖尿病大鼠模型的建立 |
| 2.2.3 实验分组及处理 |
| 2.2.4 血液、尿液及组织标本的收集 |
| 2.2.5 大鼠生化指标检测 |
| 2.2.6 PAS、Masson染色 |
| 2.2.7 免疫组化 |
| 2.2.8 肾组织透射电镜标本制备 |
| 2.2.9 TUNEL染色 |
| 2.2.10 蛋白免疫印迹法(western blot) |
| 2.2.11 实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR) |
| 2.2.12 统计方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 HUCMSCs对大鼠生理、生化指标的影响 |
| 2.3.2 HUCMSCs对糖尿病大鼠肾脏形态学改变的影响 |
| 2.3.3 HUCMSCs对糖尿病大鼠肾脏氧化损伤的影响 |
| 2.3.4 HUCMSCs对糖尿病大鼠肾脏炎症反应的影响 |
| 2.3.5 HUCMSCs对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响 |
| 2.3.6 HUCMSCs对糖尿病大鼠肾脏纤维化的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第3章 HUCMSCS对高糖高脂刺激的肾小球系膜细胞的保护作用 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验细胞 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要试剂配制 |
| 3.1.4 主要仪器设备及耗材 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 人肾小球系膜细胞培养,传代,冻存及复苏 |
| 3.2.2 HUCMSCs的培养,传代,冻存及复苏 |
| 3.2.3 HUCMSCs与肾小球系膜细胞共培养体系的构建 |
| 3.2.4 细胞增殖水平测定 |
| 3.2.5 Western blot检测相关蛋白的表达 |
| 3.2.6 免疫荧光检测系膜细胞Nrf2 的表达 |
| 3.2.7 统计方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 建立高糖高脂刺激的肾小球系膜细胞模型 |
| 3.3.2 h UCMSCs与肾小球系膜细胞共培养体系的构建 |
| 3.3.3 细胞实验分组的确定 |
| 3.3.4 HUCMSCs对高糖高脂刺激的肾小球系膜细胞形态的影响 |
| 3.3.5 HUCMSCs对肾小球系膜细胞氧化损伤的影响 |
| 3.3.6 HUCMSCs对肾小球系膜细胞凋亡的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第4章 HUCMSCS对2 型糖尿病肾脏保护作用机制研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验细胞 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 实验药物及抗体 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 肾组织核蛋白、浆蛋白的提取 |
| 4.2.2 Nrf2 siRNA干扰 |
| 4.2.3 统计方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 HUCMSCs对糖尿病大鼠Nrf2 及其下游因子的影响 |
| 4.3.2 HUCMSCs对系膜细胞Nrf2 及其下游因子的影响 |
| 4.3.3 HUCMSCs激活Nrf2 的方式 |
| 4.3.4 Nrf2是hUCMSCs保护糖尿病肾病的关键因子 |
| 4.3.5 HUCMSCs激活Nrf2上游PI3K/AKT/mTOR信号通路 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 第5章 结论与课题创新性 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 课题创新性 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（7）基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Absract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 金匮肾气丸治疗腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器与设备 |
| 1.4 实验动物分组 |
| 1.5 给药方法 |
| 1.6 观察指标 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠一般情况 |
| 2.2 各组大鼠体重变化 |
| 2.3 各组大鼠血常规与生化指标 |
| 2.4 各组大鼠24hU-TP |
| 2.5 腺嘌呤复制CRF大鼠模型 |
| 2.6 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏形态 |
| 2.7 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏病理 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 金匮肾气丸治疗UUO慢性肾功能衰竭大鼠实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器与设备 |
| 1.4 实验动物分组 |
| 1.5 UUO法复制CRF大鼠模型 |
| 1.6 给药方法 |
| 1.7 观察指标 |
| 1.8 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠一般情况 |
| 2.2 各组大鼠体重变化 |
| 2.3 各组大鼠血常规与生化指标 |
| 2.4 各组大鼠24hU-TP |
| 2.5 UUO法复制CRF大鼠模型 |
| 2.6 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏外形 |
| 2.7 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏病理 |
| 3、讨论 |
| 4、小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 慢性肾功能衰竭大鼠水通道蛋白表达的实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备 |
| 1.4 实验AQP检测 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠肾脏AQP蛋白检测结果 |
| 2.2 各组大鼠肺脏AQP蛋白检测结果 |
| 2.3 各组大鼠膀胱AQP蛋白检测结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结语 |
| 附录 文献综述 |
| 文献综述一 慢性肾功能衰竭研究进展 |
| 文献综述二 慢性肾功能衰竭中医药研究进展 |
| 文献综述三 水通道蛋白(AQPs)的相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 读博期间发表的文章及参与的科研 |
| 致谢 |
（8）复方仙草颗粒对早期糖尿病肾病患者肾小管间质损伤保护作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一章 研究对象和方法 |
| 1 选取对象 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 西医诊断标准 |
| 2.2 中医诊断要点 |
| 2.3 研究对象选取标准 |
| 2.4 研究对象排除标准 |
| 2.5 研究对象的脱落 |
| 2.6 研究对象的伦理学审查 |
| 2.7 研究步骤 |
| 第二章 研究结果 |
| 1 治疗前一般情况 |
| 2 结果 |
| 2.1 复方仙草颗粒对糖尿病肾病患者临床疗效的影响 |
| 2.2 复方仙草颗粒对糖尿病肾病患者中医证候积分的影响 |
| 2.3 复方仙草颗粒对糖尿病肾病患者相关理化指标的影响 |
| 第三章 讨论 |
| 一、西医对DKD的认识 |
| 1 DKD患者肾脏结构和功能的表现 |
| 2 DKD的病因及发病机制 |
| 2.1 糖代谢紊乱 |
| 2.2 血流动力学改变 |
| 2.3 氧化应激反应 |
| 2.4 细胞因子 |
| 2.5 炎症反应 |
| 2.6 高血压 |
| 2.7 遗传因素 |
| 3 DKD肾小管间质损害的相关标志物 |
| 3.1 β2-微球蛋白(β2-MG) |
| 3.2 N-乙酰-β-D-氨基葡萄苷酶(NAG) |
| 3.3 胱抑素C(Cys C) |
| 3.4 尿视黄醇结合蛋白(RBP) |
| 3.5 尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR) |
| 4 现代医学对DKD治疗的研究 |
| 4.1 控制血糖 |
| 4.2 降低血压 |
| 4.3 降低血脂 |
| 4.4 抗氧化应激 |
| 4.5 抑制糖基化终末产物 |
| 4.6 抑制多元醇代谢通路 |
| 4.7 抑制蛋白激酶C |
| 二、祖国医学对DKD的认识与研究 |
| 1 历代医家的认识 |
| 2 对病因病机的认识 |
| 2.1 阴虚燥热 |
| 2.2 脾肾亏虚 |
| 2.3 气阴两虚 |
| 2.4 肝肾两虚 |
| 2.5 瘀血组络 |
| 2.6 湿热内蕴 |
| 3 中医治疗DKD的探讨 |
| 3.1 辨证论治 |
| 3.2 经方 |
| 3.3 中成药 |
| 3.4 单味中药 |
| 三、复方仙草颗粒对DKD的作用 |
| 1 复方仙草颗粒的组成及方解特点 |
| 2 复方仙草颗粒的药物分析研究 |
| 四、研究结果分析 |
| 1 改善患者的临床症状及中医证候积分 |
| 2 改善患者肾小管间质功能 |
| 五、安全性评估 |
| 第四章 问题及展望 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 综述 糖尿病肾病对肾小管间质损害的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（9）2型糖尿病肾病大鼠体内IL-10、TGF-β1、HDAC4的表达及临床意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 组蛋白乙酰化与炎症在糖尿病肾病发病机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 常见英文缩写 |
| 附件 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）胃泌酸调节素（OXM）类似物改善慢性肾病肾脏纤维化的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 肾纤维化及其致病机制 |
| 1.1.1 慢性肾病概述 |
| 1.1.2 引起CKD有关的疾病 |
| 1.1.3 肾纤维化与CKD |
| 1.1.4 肾纤维化相关的通路 |
| 1.1.5 治疗肾纤维化的相关靶点和药物 |
| 1.2 胰高血糖素样肽-1受体激动剂与糖尿病肾病 |
| 1.3 胃泌酸调节素的生物活性 |
| 参考文献 |
| 第二部分 OXM类似物对高糖诱导MCs和 TECs的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 细胞株 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 主要试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 溶液的配制 |
| 2.3.2 细胞培养 |
| 2.3.3细胞毒性实验 |
| 2.3.4 高糖诱导的细胞增殖模型的建立 |
| 2.3.5 TGF-β1诱导的细胞增殖模型的建立 |
| 2.3.6 ELISA法检测高糖诱导下MCs胞外COLIV和 FN的表达 |
| 2.3.7 Western Blot实验 |
| 2.3.8 统计分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 OXM类似物对MCs正常生长情况的影响 |
| 2.4.2 OXM类似物对高糖诱导MCs增殖的影响 |
| 2.4.3 OXM类似物对高糖诱导MCs胞内FN表达的影响 |
| 2.4.4 OXM类似物对高糖诱导MCs胞内TGF-β1 表达的影响 |
| 2.4.5 OXM类似物对高糖诱导MCs胞外COLIV和 FN含量的影响 |
| 2.4.6 OXM类似物对高糖诱导TECs增殖的影响 |
| 2.4.7 OXM类似物对TGF-β1 诱导TECs增殖的影响 |
| 2.4.8 OXM类似物对高糖诱导TECs胞内TGF-β1 表达的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 第三部分 OXM类似物对糖尿病小鼠肾脏的保护作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 主要试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 动物模型的构建 |
| 3.3.2 实验分组 |
| 3.3.3 生理和生化指标的测定 |
| 3.3.4 肾脏病理切片常规染色 |
| 3.3.5 免疫组化染色 |
| 3.3.6 RT-PCR实验 |
| 3.3.7 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 OXM类似物对糖尿病小鼠血糖和体重的影响 |
| 3.4.2 OXM类似物对糖尿病小鼠生化指标的影响 |
| 3.4.3 OXM类似物对小鼠肾脏组织形态学改变的影响 |
| 3.4.4 RT-PCR:OXM类似物对小鼠肾组织中FN和 TGF-β1 mRNA表达的影响 |
| 3.4.5 OXM类似物对小鼠肾脏组织中FN表达的影响 |
| 3.4.6 OXM类似物对小鼠肾脏组织中CTGF表达的影响 |
| 3.4.7 OXM类似物对小鼠肾脏组织中胶原的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 第四部分 OXM类似物对UUO小鼠肾脏的保护作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 主要试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 动物模型的构建 |
| 4.3.2 实验分组 |
| 4.3.3 生化指标的测定 |
| 4.3.4 肾脏病理切片Masson染色 |
| 4.3.5 统计分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 OXM类似物对UUO小鼠生化指标的影响 |
| 4.4.2 OXM类似物对UUO小鼠肾脏组织中胶原的影响 |
| 4.4.3 OXM类似物对UUO小鼠肾脏组织病理改变的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 5.1 主要结果 |
| 5.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
| 附录 |
四、糖尿病肾病间质小管损害和TGF-β（论文参考文献）
- [1]商陆粗提取物对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smads信号通路调控作用的初探[D]. 赵婷. 遵义医科大学, 2021(01)
- [2]基于miR-218/GPRC5A通路探讨补阳还五汤干预糖尿病肾损伤的机制研究[D]. 苏珊珊. 山东中医药大学, 2021
- [3]灸药结合调节糖尿病肾病大鼠FN/TGF-β1蛋白表达的机制研究[D]. 刘琳娜. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [4]基于中医象思维探讨肾衰饮干预慢性肾功能衰竭大鼠的机制研究[D]. 张亮. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [5]原儿茶醛抑制lncRNA9884介导的炎症以改善肾脏纤维化的研究[D]. 杨洁珂. 西南医科大学, 2021(01)
- [6]间充质干细胞对2型糖尿病肾脏保护作用及机制研究[D]. 聂萍. 吉林大学, 2021(01)
- [7]基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究[D]. 边红萍. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [8]复方仙草颗粒对早期糖尿病肾病患者肾小管间质损伤保护作用的研究[D]. 庾雪鹰. 广西中医药大学, 2021(02)
- [9]2型糖尿病肾病大鼠体内IL-10、TGF-β1、HDAC4的表达及临床意义[D]. 黎妞. 新乡医学院, 2021(01)
- [10]胃泌酸调节素（OXM）类似物改善慢性肾病肾脏纤维化的作用研究[D]. 安春妹. 兰州大学, 2020(01)