一、SARS疫苗研究的动态（论文文献综述）
徐娜妮,喻剑华,胡小炜,李海燕,郑琳,孔庆鑫,叶非,李静,覃盼[1]（2022）在《新型冠状病毒感染者和灭活疫苗受种者抗体水平研究》文中进行了进一步梳理目的通过观测不同时期新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）感染者和SARS-CoV-2灭活疫苗受种者血清病毒特异性IgM和IgG抗体水平, 增进对SARS-CoV-2和SARS-CoV-2灭活疫苗进入机体后免疫学特征的了解。方法选取44名COVID-19确诊病例、118名SARS-CoV-2无症状感染者和273名SARS-CoV-2灭活疫苗受种者纳入观测, 分别收集检测不同时期的血清样本144份、381份和398份, 化学发光免疫分析法检测SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体水平, 结合人群基本特征和疫苗接种情况进行分析。结果确诊病例、无症状感染者和疫苗受种者IgM抗体阳性率分别为52.27%（23/44）、23.73%（28/118）和14.29%（39/273）, 确诊病例高于无症状感染者和疫苗受种者（χ2=12.106, P=0.001;χ2=34.755, P<0.001）;IgG抗体阳性率分别为100.00%（44/44）、97.46%（115/118）和98.81%（166/168）, 差异无统计学意义（χ2=2.944, P=0.229）。确诊病例中, <40岁人群的IgM抗体浓度低于≥40岁人群（Waldχ2=6.609, P=0.010）, 有SARS-CoV-2疫苗接种史人群的IgG抗体浓度高于无接种史人群（Waldχ2=12.402, P<0.001）;无症状感染者中, 有SARS-CoV-2疫苗接种史人群的IgG抗体浓度高于无接种史人群（Waldχ2=4.530, P=0.033）;疫苗受种者中, <40岁人群的IgG抗体浓度高于≥40岁人群（Waldχ2=9.565, P=0.002）。抗体水平动态分析显示, 从第1周到第9周, 确诊病例的IgM和IgG抗体浓度高于无症状感染者和疫苗受种者。结论确诊病例的IgM和IgG抗体水平高于无症状感染者和疫苗受种者, ≥40岁的确诊病例体内IgM抗体水平较高, 有SARS-CoV-2疫苗接种史的确诊病例和无症状感染者IgG抗体水平较高;SARS-CoV-2灭活疫苗全程接种后具备较好的免疫原性, <40岁的疫苗受种者体内IgG抗体水平较高。
林立鹏[2]（2021）在《抗体检测对COVID-19的诊断价值和疫苗的免疫性分析》文中认为目的新型冠状病毒肺炎疫情的发生与迅速扩散,给世界带来灾难性的后果,所以快速的诊断和治疗,以及有效的预防手段都是控制疫情的希望。本文通过前期的特异性抗体对严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的诊断价值研究以及后期对SARS-CoV-2疫苗的免疫有效性的研究,希望为临床防疫工作提供思路与建议。1.评价SARS-CoV-2特异性抗体IgG和IgM检测在2019冠状病毒病（COVID-19）诊断中的应用价值。2.国内已陆续开展SARS-CoV-2疫苗接种工作,疫苗主要来自国内北京生物制品研究所有限责任公司和武汉生物制品研究所有限责任公司生产的新型冠状病毒灭活疫苗,通过检测接种该疫苗成年人的抗S蛋白的IgG和IgM,了解和分析疫苗的体液免疫效果。方法1.采用回顾性研究方法,收集了2020年1月20日～4月16日确诊为COVID-19患者的94例血清标本为研究对象,对照组为161例确诊为非COVID-19的其他疾病患者的血清标本。通过胶体金免疫层析法检测血清中的SARS-CoV-2特异性IgG和IgM抗体,分析抗体检测对COVID-19的诊断价值。2.从100名接种过SARS-CoV-2疫苗的成年志愿者中采集166份血标本,并收集40份未接种SARS-CoV-2疫苗的血标本作为对照组,通过磁微粒化学发光法检测206份标本的抗S蛋白IgG、IgM的抗体水平,初步了解并分析SARS-CoV-2疫苗的体液免疫效果。结果1.（1）SARS-CoV-2特异性的IgG和IgM抗体检测结果:COVID-19患者中IgG阳性89例（94.68%）,IgM阳性78例（82.98%）,IgG/IgM（IgG和IgM抗体任一阳性即确定为阳性）阳性91例（96.81%）;对照组标本中IgG和IgM均阳性的1例（0.62%）,单IgG阳性1例（1.24%）,单IgM阳性1例（1.24%）。（2）SARS-CoV-2特异性IgG和IgM抗体检测对COVID-19的诊断敏感度和特异性:以核酸检测阳性为金标准,IgG/IgM诊断COVID-19的敏感性96.81%,特异性98.14%,准确度97.65%,阳性似然比51.95,阴性似然比0.03,约登指数0.95。IgG阳性、IgM阳性、IgG/IgM阳性诊断敏感性间的差异有统计学意义（P<0.01）,IgG/IgM的诊断敏感性最高。（3）SARS-CoV-2特异性IgG和IgM抗体检测与患者病程:COVID患者中有4例为主动筛查发现的无症状感染者,即患者检出IgG/IgM阳性的时间早于核酸确诊时间（发病天数<0）,对不同病程患者的IgG和IgM检测情况进行分析,结果显示发病时间在0～7d时,IgG阳性和IgM阳性结果间的差异有统计学意义（P<0.05）。2.（1）第一次注射疫苗后采集的66份标本中IgG全部为阴性,阳性率为0（0/66）,IgM阳性率为4.54%（3/66）。（2）第二次注射后采集的100份标本中IgG阳性率为71%（71/100）,IgM阳性率为20%（20/100）,总阳性率为71%（71/100）,其中注射后第14天的7例标本中有1例IgG阳性,即阳性率为14.29%,而第28天至35天的标本阳性率达75.27%（70/93）。（3）我们通过统计分析第二次标本的IgG抗体检测结果（样本发光值/临界值）和阳性转换率,对比发现男性的中位数结果为4.87（2.14,9.13）,女性的中位数结果为3.76（2.06,10.23）,p=0.485,差异无统计学意义。男性的IgG阳性率为64.29%（27/42）,女性的IgG阳性率为75.86%（44/58）,p=0.208,差异无统计学意义。我们又把年龄组分为三段（分别为<30岁,30-49岁,50岁及以上）进行统计比对,检测结果中位数分别为6.15（2.24,11.32）,4.21（2.19,9.10）,2.28（1.41,7.29）,p=0.271,差异无统计学意义。阳性率分别为83.33%（15/18）,71.64%（48/67）,53.33%（8/15）,p=0.164,差异无统计学意义。（4）在实验中我们发现,研究对象第二次抽血标本的阴性结果检测发光值要比对照组的检测发光值高,所以我们将两组数据也进行统计比较。发现实验组IgG中位数结果为0.32（0.22,0.54）,对照组中位数结果为0.12（0.11,0.14）,P<0.001;实验组IgM中位数结果为0.27（0.14,0.50）,对照组中位数结果为0.10（0.08,0.11）,P<0.001。显示无论是IgG还是IgM,两组结果差距均具有显着的统计学意义。结论1.通过对94例COVID-19确诊患者和161例确诊为非COVID-19的其他疾病患者的研究发现,SAS-CoV-2特异性IgG或IgM抗体检测在COVID-19的临床诊断中有重要应用价值,是COVID-19的重要诊断和筛查指标。2.通过磁微粒化学发光法检测206份标本的抗S蛋白IgG、IgM的抗体水平,了解并分析COVID-19疫苗的免疫效果,明确了疫苗在人群中有较高的免疫性反应,具有良好的免疫效果。
杨韧[3]（2021）在《MERS-CoV与SARS-CoV-2亚单位疫苗与核酸疫苗研究》文中研究指明冠状病毒（Coronavirus）是一类含包膜结构的单股正链非节段的RNA病毒,广泛分布于多种哺乳动物宿主中,具有跨种传播能力。目前已知感染人类的冠状病毒有7种,其中严重急性呼吸综合征冠状病毒（Severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV）、中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）与 201 9 新型冠状病毒（Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2）是三种高致病人感染冠状病毒,在不同地区国家都曾造成严重的疫情危害。MERS-CoV自2012年首次于中东地区发现,2015年曾在韩国引发严重疫情,而至今依旧在部分地区发现偶发病例。2019年12月底由SARS-CoV-2引起的COVID-19（Corona Virus Disease 2019）疫情快速在全球蔓延,至今依旧没有得到有效的控制。然而,针对几种高危冠状病毒,目前尚无特效治疗性药物。因此,开发安全且有效的疫苗是控制病毒感染的最有效手段。亚单位疫苗及核酸疫苗,具有安全性高,易于生产制备研发等良好特点。本文基于前期的研究结果,使用哺乳动物细胞表达系统制备了基于MERS-CoV S蛋白RBD结构域的亚单位疫苗蛋白,使用肌肉或滴鼻免疫的方式在小鼠体内评价了抗原蛋白免疫原性。另外,研究基于重组RBD蛋白设计制备了信使RNA（Messenger RNA,mRNA）疫苗与自扩增RNA（Self-amplify mRNA,saRNA）疫苗,并在小鼠体内对两种RNA疫苗的免疫原性进行初步的评价。COVID-19疫情早期,我们设计了密码子优化序列的SARS-CoV-2 S蛋白的DNA疫苗与mRNA疫苗,其中mRNA疫苗与上海斯微公司合作研制。两种核酸疫苗在不同品系小鼠内进行免疫应答研究,并进行攻毒保护实验,探究疫苗的保护性。具体研究内容如下:1.MERS-CoV RBD重组亚单位疫苗和mRNA疫苗的设计与免疫原性研究MERS-CoVRBD偶联不同三聚体基序在CHO细胞表达制备的蛋白具有不同的聚集倾向,偶联T4f基序的RBD蛋白可以形成以三聚体为主二聚体为辅的高聚集态。重组蛋白RBD-T4f配合铝佐剂或铝佐剂联合CpG ODN均可以有效在BALB/c小鼠内诱导高滴度中和活性的抗体,不同佐剂的使用在细胞免疫水平表现有所差异。重组蛋白RBD-T4f配合CTA1-DD或CpG ODN佐剂滴鼻免疫可以有效诱导系统性及呼吸道局部免疫应答,在血液及呼吸道黏膜均可检测到高滴度的中和活性抗体,并可在肺组织局部检测到的高水平特异性细胞免疫应答。重组抗原RBD-T4f序列插入体外转录载体,通过酶促反应制备了重组抗原的mRNA与saRNA疫苗。研究同时对SFV4骨架saRNA的体外转录反应进行优化,成功制备了完整专一的长链saRNA分子,优化后的saRNA进入小鼠体内后可以持续表达目的蛋白至少11天。使用LPP技术包裹的重组抗原RBD-T4fmRNA疫苗初免后可以诱导抗原特异性IgM应答,两次免疫可以诱导特异性IFN-γ分泌细胞,高剂量三次免疫可以诱导一定水平的中和活性抗体产生。使用in vivo jet-PEI包裹的saRNA疫苗在免疫两次后可诱导高水平的细胞免疫应答,但难以诱导产生体液免疫应答。2.SARS-CoV-2 DNA与mRNA核酸疫苗免疫原性与保护效果研究研究对SARS-CoV-2 S蛋白序列进行人源细胞密码子优化,基于该序列设计制备了 DNA疫苗与化学修饰的mRNA疫苗。DNA疫苗使用肌肉免疫附电穿孔免疫部署后,可以有效诱导具有中和活性的特异性体液免疫应答,并诱导高水平Th1偏向的特异性细胞免疫。高剂量两次免疫后可产生攻毒保护效果。mRNA使用LPP技术包裹后物理稳定性良好,该方法生产的mRNA-LPP疫苗具有良好的免疫原性。免疫后可诱导产生高滴度的中和抗体,且具有一定的广谱中和性,可中和多种突变株病毒。高剂量两次免疫后,高水平的中和抗体与Th1偏向的细胞免疫记忆可保持13周。SARS-CoV-2攻击后,高剂量单次与两次免疫的C57BL/6小鼠肺组织病毒滴度显着降低,并有效缓解炎症病变;高或低剂量两次免疫的BALB/c小鼠也表现出相似良好的攻毒保护效果。另外,mRNA-LPP疫苗在恒河猴中也表现出良好的免疫原性,诱导高滴度广谱中和抗体,并产生攻毒保护效果。综上所述,本研究使用CHO制备的MERS-CoVRBD-T4f重组抗原蛋白具有良好的免疫原性,可以诱导高滴度的中和抗体,配合合适的佐剂可以用于传统疫苗及黏膜疫苗的制备。基于重组抗原RBD-T4f设计的mRNA与saRNA疫苗诱导体液免疫能力相对有限,但可以诱导高水平的特异性细胞免疫应答。基于SARS-CoV-2 S蛋白优化序列的DNA疫苗与含化学修饰的mRNA-LPP疫苗均具有良好的免疫原性,可诱导高滴度的中和抗体及高水平的Th1型细胞免疫应答。合适的免疫剂量与方案可以诱导足够强的免疫应答,产生攻毒保护效果。这些研究为冠状病毒的疫苗研发及应用奠定了理论基础。
丁一波[4]（2021）在《新型冠状病毒基因进化与无症状感染的流行病学特征》文中研究说明研究目的早在2019年11月初,新型冠状病毒（SARS-Co V-2）感染在欧洲、美洲、亚洲等全球多地出现。新冠肺炎（COVID-19）在全球范围内引起极大的公共卫生危机。至今,SARS-Co V-2在全球仍呈大流行趋势,且进化速度较快,常出现新的变异株,导致传播速率上升,无症状感染者所占比例呈升高趋势。然而,SARS-Co V-2的起源和进化关系仍不清楚。对于新冠病毒的防控、病原体进化溯源和临床诊疗等方面还有很多需要进一步明确的问题。公共数据库中的病毒序列可以为全面了解和识别病毒的特性提供必要信息。深入研究病毒的突变方式及其在不同区域的序列特征,对于了解病毒的致病和传播机制至关重要。在本研究中,我们进行了生物信息学分析,追踪各国SARS-Co V-2的序列演变特征,描述全球传播过程,并使用公共数据库中的所有可用序列评估SARS-Co V-2突变的影响。同时进行细胞实验,观察突变株病毒的亲和力与感染力变化。针对目前新冠疫情防控中无症状感染者和新冠确诊患者之间的流行病学特征、病毒清除时间和抗体动态转换的数据进行了分析,将为新冠疫情防控提供基础数据支撑,为进一步防控新冠和其他新发传染病提供新思路。研究方法第一部分利用现有的公共数据,我们对全球各地的新冠序列突变特征进行了分析。用进化树分析描述了SARS-Co V-2的进化过程。利用生物信息学软件预测的新冠病毒棘突蛋白和宿主ACE2受体亲和力变化以评估在棘突蛋白受体结合域（RBD）发生的突变对病毒感染力和亲和力的影响。通过假病毒转染和中和抗体试验检测HEK293T-ACE2细胞的病毒感染性和抗原性。第二部分我们收集了2020年1月21日至3月6日在中国浙江宁波市和舟山市的193名SARS-Co V-2阳性人员的流行病学特征、病毒清除时间和抗体动态转换的数据。采用酶联免疫吸附法检测血清抗SARS-Co V-2抗体Ig M和Ig G的动态变化。结果第一部分在来自自然界的冠状病毒中,发现了2个与SARS-Co V-2样病毒相关的潜在重组事件。进化树分析表明,世界范围内鉴定出的SARS-Co V-2毒株是集群的。通过生物信息学分析发现,SARS-Co V-2在核苷酸和氨基酸水平上不断变化,在全球传播期间表现出充分的多样性,尤其是在印度和日本等国家。中国的病毒主要集中在某单一类型,美国的病毒并非直接来自中国。欧洲病毒株在传播网络上更接近北美病毒,且病毒出现时间明显早于中国。刺突蛋白RBD区共有38个突变增加了SARS-Co V-2的受体结合亲和力。筛选出V367F和N354D两种病毒突变,证明它们能提高SARS-Co V-2假病毒的感染力。V367F突变体对中和抗体的敏感性高于野生型假病毒。第二部分193人中31例为无症状SARS-CoV-2携带者,149例为有症状的COVID-19患者,14例为潜伏期COVID-19患者。与有症状的COVID-19患者相比,无症状携带者更年轻,白细胞和淋巴细胞水平较高,慢性炎症指标血清C反应蛋白水平较低,病毒清除时间较短。无症状携带者的Ig M从阳性转为阴性的时间显着短于COVID-19患者（7.5天vs.25.5天,p=0.030）。在COVID-19患者中SARS-Co V-2抗体持续阳性的比例显着高于无症状携带者（66.1%vs.33.3%,p=0.037）。有症状患者的病毒载量显着高于潜伏期患者（p=0.003）和无症状携带者（p=0.004）。潜伏期COVID-19患者的病毒清除时间显着长于无症状携带者（48.0天vs.24.0天,p=0.002）。与COVID-19患者相比,无症状携带者感染更多来自于家族内传播（61.0%vs.89.0%,p=0.028）。在4个SARS-Co V-2感染家族中,无症状携带者主要为儿童和青年,而严重COVID-19主要见于60岁以上有高血压等基础病的家庭成员。结论病毒变异和病毒间的重组所致的病毒进化是冠状病毒向人类溢出,并造成SARS-Co V-2大流行的重要原因。目前大部分流行病学和遗传学证据都不支持病毒源于中国大陆。突变株可能通过增强与其受体ACE2结合促进SARS-Co V-2的传播。无症状携带者对清除SARS-Co V-2的非特异性抗病毒免疫能力高于有症状的COVID-19患者,早期抗病毒免疫不应与体液免疫有关。COVID-19的严重程度与年龄和高血压等基础病有关。
周晶晶[5]（2021）在《新型冠状病毒RBD重组蛋白疫苗及多肽疫苗的设计和免疫原性研究》文中研究表明新冠肺炎疫情已严重影响全球公共健康,疫苗仍是控制疫情蔓延最有效的手段。疫苗的综合评价包括有效性,安全性,生产成本,生产速度,储存运输等因素。本研究围绕新型冠状病毒设计RBD重组蛋白疫苗和多肽疫苗,并进行了免疫原性研究。主要内容包括以下方面:新冠病毒通过棘突蛋白的RBD结合宿主细胞表面受体——血管紧张素转换酶2,并介导病毒进入宿主细胞。本研究通过哺乳动物表达系统高效表达了Fc融合形式的RBD重组蛋白疫苗。BALB/c小鼠在疫苗免疫后3个月内,不仅中和抗体滴度维持较高水平,同时具有诱导细胞免疫的能力。而且免疫后并没有对肺、肾组织产生明显损伤,证明了该疫苗的有效性和安全性。此外,为应对病毒突变对现有疫苗的影响。本研究通过生物信息学方法预测了病毒抗原表位,从中筛选了21条候选抗原表位。并以此为基础制备了四条KLH偶联多肽疫苗。BALB/c小鼠在免疫后,通过效价分析验证了SP＿497-505,SP＿529-537,SP＿680-689,NP＿185-195表位的免疫原性。为克服单一表位抗原多肽的免疫原性不足的问题,我们进一步设计并制备了多肽自组装纳米疫苗,该方法能够同时组装十种不同的抗原多肽形成均一的多肽自组装纳米颗粒,为后续开发多表位多肽疫苗奠定了基础。综上所述,本研究通过多种形式为新冠病毒疫苗的设计提供更多元的选择,相关技术方法也为其它冠状病毒的疫苗开发提供了借鉴。
王宾,钟一维[6]（2020）在《新冠病毒疫苗安全性和有效性的展望》文中研究指明2019年12月起,新型冠状病毒（以下简称"新冠病毒"）率先在国内被检测出,随即在全球蔓延、爆发,虽然目前国内病毒传播得到了控制,但世界其他国家仍处于疫情的高发或平台期。截止到2020年7月26日,世界卫生组织报告新型冠状病毒肺炎（以下简称"新冠肺炎"）确诊病例15 581 009例,死亡病例635 173例,然而目前仍没有有效的预防和治疗手段。疫苗被认为是人类面对病毒感染最有效的预防手段,因此,世界各国都在加紧开发新冠病毒疫苗。据世界卫生组织统计,当前已有18款疫苗进入临床Ⅰ期,12款进入临床Ⅱ期,4款进入临床Ⅲ期。在临床研究中,评价疫苗在人体上的安全性和有效性是疫苗临床研究的关键点,同时也是难点。本篇综述将围绕着评估新冠疫苗安全性和有效性的几个关键问题展开讨论。由于前期对SARS和MERS疫苗的研发成果对于新冠疫苗也有一定的借鉴意义,因此,本文将这些成果与目前观察到的新冠病毒感染的临床免疫学特点相结合,以预测新冠疫苗研发可能的瓶颈以及解决思路。
于永利[7]（2020）在《严重急性呼吸综合征冠状病毒2疫苗》文中认为在严重急性呼吸综合症冠状病毒2 （severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2, SARS-CoV-2）全球大流行并无终止迹象的情况下,急需研制出安全、有效的SARS-CoV-2疫苗。现对SARS-CoV-2疫苗研制的相关问题作一综述。
王超[8]（2011）在《SARS冠状病毒免疫增强型核酸疫苗构建及免疫效果评价》文中进行了进一步梳理本研究首先利用原核系统表达SARS-CoV S1蛋白和霍乱毒素B亚单位CTB蛋白制备了相应的多克隆抗体。然后,成功构建了真核表达质粒pVAX-S1、pVAX-CTB;并利用SOE-PCR技术将S1基因和CTB基因进行连接,得到融合基因真核表达质粒pVAX-S1-CTB。利用脂质体2000将各种真核表达质粒转染BHK-21细胞。间接免疫荧光的结果表明,各种真核表达质粒均能在哺乳动物细胞中表达,为后续动物免疫实验提供了理论基础。利用6周龄昆明鼠进行DNA疫苗免疫效果研究。在动物免疫实验中设计6个处理组,即PBS组（免疫灭菌PBS）、pVAX载体对照组（免疫真核载体pVAX1）、病毒对照S1组（免疫真核表达质粒pVAX-S1）、佐剂对照CTB组（免疫真核表达质粒pVAX-CTB）、联合免疫S1+CTB组（联合免疫pVAX-S1和pVAX-CTB）和融合免疫S1-CTB组（免疫融合基因真核表达质粒pVAX-S1-CTB）。检测小鼠脾脏和外周血特异性T淋巴细胞增值效果、CD4+和CD8+T淋巴细胞数量变化、特异性CTL活性、IL-4和IFN-γ产量以及血清中特异性IgG抗体效价。瞬时转染实验结果表明,重组真核表达质粒pVAX-S1、pVAX-CTB和pVAX-S1-CTB均可在哺乳动物细胞中表达。免疫后42d,两疫苗组T淋巴细胞增殖效果明显高于各对照组,差异极显着（P<0.01）。联合组脾脏和外周血CD4+T细胞均在免疫后42d达到最大值;联合组脾脏和外周血CD8+T细胞均在免疫后42d达到最大值。特异性细胞毒性作用结果表明,免疫后42d联合组及融合组细胞毒性效果明显,融合组效果尤佳。小鼠血清抗S1蛋白IgG含量检测结果表明,两疫苗组IgG含量均呈一定的增长趋势;免疫后42d,融合组IgG含量明显高于其他各组,差异极显着（p<0.01）。外周血IFN-γ和IL-4含量检测结果表明,免疫后42d联合组及融合组以上两种细胞因子含量明显高于其他各对照组,且融合组刺激产生更多的细胞因子,二者差异显着（p<0.05）。综上所述,通过本试验研究表明,CTB基因在配合SARS-CoV S1抗原基因免疫过程中,不但能够促进机体的细胞免疫应答能力,而且能够提高机体体液免疫应答的能力。本实验结果为进一步研究CTB的生物活性提供了实验依据,同时为探讨开发研制新型免疫增强型抗SARS病毒核酸疫苗提供了理论基础。
刘利锋[9]（2010）在《严重急性呼吸综合征（SARS）康复者长期的体液免疫记忆反应》文中指出经过采取传统的隔离和对症治疗等措施,SARS疫情在2003年6月份得到控制,但SARS（?）可能从动物宿主跨种传播导致SARS再次爆发。抗体尤其是抗体的中和活性滴度以及维持时间决定着机体对SARS病毒的再次感染是否具有免疫保护力,SARS-COV体液免疫研究还有些未知领域：针对结构蛋白的抗体动态变化规律,抗体抵御病原体的作用机制等。为了揭示SARS康复者长期的体液免疫记忆反应规律,在SARS康复者康复后的第3个月、12个月、18个月、24个月、36个月,我们连续留取了19个康复者的血清标本（还留取了其中4名康复者第5年的标本）。用优化的S蛋白、N蛋白、受体结合区（RBD）蛋白间接ELISA方法,与商品化试剂盒一起对上述标本进行了IgG抗体检测。用假病毒中和方法进行了抗体的中和活性检测。我们的研究有以下发现：（1）S蛋白、N蛋白特异抗体下降趋势有所不同。N蛋白特异抗体在第3个月到第12个月下降快,之后在稍高于阈值的低水平缓慢下降,而S蛋白特异性抗体从第3个月到第36个月在较高水平（相对于N蛋白）缓慢下降。（2）商品化的试剂盒检测和S蛋白间接ELISA检测的血清稀释度分别为1：10和1：100,但是,在第36个月,商品化试剂盒检测的抗体阳性率是42%,低于S蛋白间接ELISA检测的阳性率100%,以上结果表明S蛋白间接ELISA的灵敏度高于商品化试剂盒。（3）在康复后的第36个月,89%（17/19）的随访者能检测到中和性抗体,平均抑制率为48%。（4）S蛋白特异抗体与中和活性的相关系数为0.717,明显高于SARS-CoV抗体与中和活性的相关系数0.571。（5）RBD蛋白IgG抗体和S蛋白特异抗体变化趋势类似,平均OD值缓慢下降。RBD蛋白间接ELISA勺灵敏度也高于商品化的试剂盒。RBDIgG抗体和抗体的中和活性相关系数是0.737,高于S蛋白抗体与中和活性的相关系数0.717。总之,本研究揭示了SARS-CoV及其病毒成分的抗体动态变化规律,证实了体液免疫记忆反应能维持3年,RBD蛋白是产生中和抗体的主要区域,抑制与受体结合是抗体具有中和活性的主要机制。SARS康复者长期的免疫记忆反应研究将有助于理解SARS-CoV感染的机制,有助于疫苗和诊断试剂的研制。
汤芳[10]（2009）在《SARS患者感染危险因素及其随访观察研究》文中提出2003年严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome, SARS）的流行曾带来世界范围内的灾难,其传染性之强、传播速度之快、流行范围之广、影响之大远超出人们的想象。SARS过后,遗留下的未解之谜还很多,在SARS流行病学方面仍存在众多热点问题值得探讨。医务人员（healthcare workers, HCW）是SARS感染的高危人群,其感染的危险/保护因素研究较多而结果并不一致。我们采用病例对照研究的方法,选取来自同一医院感染SARS的HCW病例51名,与SARS患者密切接触的HCW对照426名,利用标准调查问卷,对其在诊疗SARS患者时的危险因素及采取的防护措施进行了全面系统的回顾性调查。多因素logistic回归分析表明胸外心脏按压操作（调整OR=4.52,95%CI=1.08–18.81）和接触患者呼吸道分泌物（调整OR=3.27,95% CI=1.41–7.57）是HCW感染SARS的主要危险因素。戴12层棉纱口罩、16层棉纱口罩、多层防护口罩、预防服药、鼻腔清洗和防护知识培训6个因素是SARS发生的保护因素。近期研究表明SARS发生、发展和预后等与宿主遗传因素有关。本研究选取抗病毒过程中发挥重要作用的基因白介素12受体β1（interleukin-12 receptorβ1, IL12Rβ1）作为候选易感基因,运用病例对照研究设计,采用聚合酶链式反应-限制性片段多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP）的方法,探讨IL12Rβ1基因多个SNP位点多态性与SARS的易感性关系。研究结果表明+705A/G、+1158T/C、+1196G/C位点的等位基因以及基因型在病例组和对照组中的分布频率没有显着性差异。+1664C/T（CT）和（TT）基因型在病例组中的分布显着高于对照组（P<0.05）,ORs（95%CI）分别为2.09（1.90–7.16）和2.34（1.79–13.37）。单体型分析发现,+705A/G、+1158T/C以及+1196G/C三个位点存在强烈的连锁不平衡（D’=0.90–0.98）,+1664C/T与其它三个位点之间存在中等程度的连锁不平衡,ATGC和GCCT单体型是最普遍的单体型,GCCT单体型在病例组中的分布频率显着高于对照组,ORs（95%CI）为2.31（1.72–8.47）。提示IL-12Rβ1基因多态性与中国汉族人群SARS发病存在关联,但与疾病的严重程度无显着性关联。SARS感染后机体体液免疫状况,包括抗体水平及抗体持续时间是预防再次发生疾病流行的关健因素之一,然而对于抗体动态变化规律的持续时间和影响因素目前未有定论。本研究选取44例临床确诊并且血清抗体阳性的SARS患者进行了4年的追踪随访,用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）方法检测血清SARS-CoV特异性IgG抗体动态变化规律,同时收集流行病学和临床信息等相关资料,估计可能影响抗体水平变化的因素。结果表明,发病后第12、27、40、50个月IgG抗体阳性率分别为85%、80%、62%、32%;IgG抗体滴度的GMTs分别为1:31、1:27、1:13、1:6。生存分析显示不同激素用量、疾病严重程度和抗体转阴时间之间有显着性关联（P=0.033和P=0.024）,激素用量越大,抗体水平下降越明显。从上述结果我们认为,4年后抗体滴度降低到保护性水平以下,保护性免疫只能持续有限时间。激素使用、疾病严重程度是影响抗体水平变化的重要因素。虽然SARS病人的保护性免疫只能持续有限时间,但保护性抗体消失后,患者体内是否存在记忆性淋巴细胞免疫应答反应是决定机体再次接触SARS-CoV后是否患病的关键。本研究进行了SARS康复期患者SARS-CoV特异性T、B细胞淋巴细胞免疫应答反应。结果显示SARS康复期患者在发病6年后,不仅血清IgG抗体消失,而且体内SARS-CoV特异性记忆性B细胞水平也已不能检出,提示自然感染SARS-CoV后体液免疫反应及免疫记忆的持续时间有限。体内记忆性T细胞免疫应答能够维持一定水平,产生的淋巴细胞斑点数显着高于密切接触者和正常健康人群,其对于再次暴发的SARS流行能否提供免疫保护作用的问题仍然需要进一步探索。本研究结合现场调查、实验室检测,综合应用描述流行病学、分析性流行病学等方法,阐明了SARS感染的环境危险因素及宿主遗传易感因素在SARS发病过程中的作用;通过对SARS队列进行6年的随访观察,阐明了人群免疫水平动态变化规律及其影响因素,通过ELISPOT试验方法,首次提出保护性抗体消失后,SARS康复期患者记忆性B淋巴细胞免疫反应不会长期存在,而记忆性T淋巴细胞免疫应答可在体内长期维持免疫记忆。本研究结果不仅为预防可能再次暴发的SARS提供防控措施和临床治疗的科学依据;同时也可为SARS疫苗开发、新药研制提供可以借鉴的新思路。
二、SARS疫苗研究的动态（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、SARS疫苗研究的动态（论文提纲范文）
（2）抗体检测对COVID-19的诊断价值和疫苗的免疫性分析（论文提纲范文）
| 中英文缩写对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 IgG和 IgM检测对COVID-19 的诊断价值 |
| 1.1 前言 |
| 1.1.1 冠状病毒(coronavirus)概述 |
| 1.1.2 SARS-CoV-2 生物学研究的进展 |
| 1.1.3 病原学诊断概述 |
| 1.1.4 特异性抗体IgM/IgG检测与COVID-19研究进展 |
| 1.1.5 T淋巴细胞与COVID-19 研究进展 |
| 1.1.6 促炎因子与COVID-19 研究进展 |
| 1.1.7 血常规与COVID-19研究进展 |
| 1.2 研究目的 |
| 1.3 材料与方法 |
| 1.3.1 研究对象 |
| 1.3.2 检测试剂和方法 |
| 1.3.3 统计学分析 |
| 1.4 结果 |
| 1.4.1 SARS-CoV-2 特异性的IgG和 IgM抗体检测结果 |
| 1.4.2 IgG和IgM检测对COVID-19诊断的敏感性和特异性 |
| 1.4.3 SARS-CoV-2 特异性IgG和 IgM抗体检测与患者病程 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 小结 |
| 第2章 SARS-CoV-2 疫苗的体液免疫效果探究 |
| 2.1 前言 |
| 2.1.1 SARS-CoV-2疫苗研发的免疫学基础 |
| 2.1.2 SARS-CoV-2 疫苗的研发概述 |
| 2.1.3 SARS-CoV-2 疫苗的免疫原性研究 |
| 2.1.4 SARS-CoV-2 疫苗研究中存在的问题 |
| 2.2 研究目的 |
| 2.3 材料与方法 |
| 2.3.1 研究对象 |
| 2.3.2 检测方法、仪器和试剂 |
| 2.3.3 统计学分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 抗S蛋白特异性抗体的IgG和 IgM检测结果 |
| 2.4.2 IgG和 IgM抗体的检测结果和阳性率统计比较 |
| 2.4.3 阴性结果与对照组结果的统计结果对比 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 2.7 展望 |
| 参考文献 |
| 附录1 国内外文献综述 SARS-CoV-2的实验室检测技术 |
| 参考文献 |
| 附录2 攻读硕士学位期间发表的与学位论文相关的学术论文 |
| 致谢 |
（3）MERS-CoV与SARS-CoV-2亚单位疫苗与核酸疫苗研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 引言 |
| 1. 冠状病毒概述 |
| 1.1 冠状病毒结构 |
| 1.2 冠状病毒的感染与复制 |
| 1.3 人类冠状病毒 |
| 2. 冠状病毒动物模型研究进展 |
| 3. MERS-CoV与SARS-CoV-2疫苗研究进展 |
| 3.1 灭活病毒疫苗 |
| 3.2 亚单位疫苗与病毒样颗粒疫苗 |
| 3.3 重组病毒载体疫苗 |
| 3.4 核酸疫苗 |
| 4. 研究背景与目的 |
| 实验材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 生物学材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 质粒构建 |
| 2.2 疫苗制备 |
| 2.3 抗原检测及表达验证 |
| 2.4 动物免疫与分组 |
| 2.5 免疫学检测 |
| 2.6 攻毒保护实验 |
| 2.7 统计学分析 |
| 结果 |
| 第一部分 MERS-CoV重组亚单位疫苗与mRNA疫苗研究 |
| 前言 |
| (一) MERS-CoV重组RBD抗原亚单位疫苗研究 |
| 1. MERS-CoV RBD重组蛋白设计与制备 |
| 1.1 MERS-CoV RBD重组抗原设计与构建 |
| 1.2 MERS-CoV RBD重组抗原蛋白的制备与鉴定 |
| 2. 重组抗原蛋白RBD-T4f的免疫原性初步研究 |
| 2.1 重组蛋白RBD-T4f诱导高水平的中和抗体 |
| 2.2 重组蛋白RBD-T4f可以诱导特异性细胞免疫应答 |
| 3. 重组抗原蛋白RBD-T4f的黏膜免疫应用研究 |
| 3.1 重组蛋白RBD-T4f配合黏膜佐剂诱导系统性体液免疫应答 |
| 3.2 重组蛋白RBD-T4f配合黏膜佐剂诱导呼吸道高水平中和IgA |
| 3.3 重组蛋白RBD-T4f配合黏膜佐剂诱导肺组织细胞免疫应答 |
| (二) MERS-CoV mRNA疫苗研究 |
| 1. 自扩增mRNA疫苗制备优化与体内表达研究 |
| 1.1 自扩增mRNA分子体外转录制备优化 |
| 1.2 自扩增mRNA疫苗分子可在小鼠体内持续表达目的蛋白 |
| 2. 基于重组三聚体靶抗原RBD-T4f的两种mRNA疫苗的设计与构建 |
| 2.1 重组抗原mRNA与自扩增mRNA疫苗设计 |
| 2.2 重组抗原mRNA与自扩增mRNA的表达验证 |
| 3. 重组抗原RBD-T4f的两种mRNA疫苗的免疫原性研究 |
| 3.1 重组抗原mRNA疫苗可诱导有限的体液免疫应答 |
| 3.2 重组抗原mRNA疫苗与自扩增mRNA疫苗诱导较强的细胞免疫应答 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 SARS-CoV-2核酸疫苗研究 |
| 前言 |
| (一) SARS-CoV-2 DNA疫苗免疫原性与保护性研究 |
| 1. SARS-CoV-2 DNA疫苗构建与表达鉴定 |
| 2. SARS-CoV-2 DNA疫苗免疫原性研究 |
| 2.1 SARS-CoV-2 DNA疫苗可以诱导中和活性抗体 |
| 2.2 SARS-CoV-2 DNA疫苗诱导Th1型细胞免疫应答 |
| 3. SARS-CoV-2 DNA疫苗免疫后可产生攻毒保护效果 |
| (二) SARS-CoV-2 mRNA疫苗免疫原性与保护性研究 |
| 1. SARS-CoV-2 mRNA-LPP疫苗物理性状与表达鉴定 |
| 2. SARS-CoV-2 mRNA-LPP疫苗免疫原性研究 |
| 2.1 mRNA-LPP疫苗诱导高中和活性且较为持久的体液免疫应答 |
| 2.2 mRNA-LPP疫苗诱导广谱中和活性抗体 |
| 2.3 mRNA-LPP疫苗可以诱导高水平Th1型细胞免疫应答 |
| 3. SARS-CoV-2 mRNA-LPP疫苗可产生持久的保护性 |
| 4. SARS-CoV-2 mRNA-LPP疫苗与DNA疫苗免疫效果比较 |
| 5. SARS-CoV-2 mRNA-LPP疫苗恒河猴攻毒保护效果评价 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）新型冠状病毒基因进化与无症状感染的流行病学特征（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 新型冠状病毒基因溯源及进化规律 |
| 一、引言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第二部分 新型冠状病毒感染者流行病学研究 |
| 一、引言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 Ⅲ 型干扰素与核酸免疫在预防新冠病毒中的作用机制 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况 |
| 致谢 |
（5）新型冠状病毒RBD重组蛋白疫苗及多肽疫苗的设计和免疫原性研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩写、符号清单、术语表 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 SARS-CoV-2 RBD重组蛋白疫苗的设计及免疫原性研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料及基本操作 |
| 2.2.1 主要材料与试剂 |
| 2.2.2 细胞株和菌株 |
| 2.2.3 主要实验仪器 |
| 2.2.4 相关溶液配制 |
| 2.3 实验步骤与方法 |
| 2.3.1 RBD重组质粒的构建 |
| 2.3.2 RBD重组蛋白的表达 |
| 2.3.3 RBD重组蛋白基本性质分析 |
| 2.3.4 RBD重组蛋白免疫原性分析 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 RBD重组质粒的构建 |
| 2.4.2 RBD重组蛋白表达、纯化及分析 |
| 2.4.3 RBD重组蛋白免疫原性分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 SARS-CoV-2 多肽疫苗的设计及免疫原性研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与基本操作 |
| 3.2.1 数据收集 |
| 3.2.2 B细胞表位分析及预测 |
| 3.2.3 T细胞表位分析及预测 |
| 3.2.4 KLH偶联多肽疫苗的制备以及小鼠免疫实验 |
| 3.2.5 小鼠免疫实验的效价分析 |
| 3.2.6 多肽自组装纳米疫苗的制备以及小鼠免疫实验 |
| 3.3 实验结果与讨论 |
| 3.3.1 预测候选多肽结果 |
| 3.3.2 KLH偶联多肽疫苗的免疫效价分析 |
| 3.3.3 多肽自组装纳米疫苗的制备 |
| 3.3.4 多肽自组装纳米疫苗的免疫效价分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 总结与展望 |
| 主要创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 新型冠状病毒疫苗开发策略及进展 |
| 一、前言 |
| 二、SARS-CoV-2抗原的选择 |
| 三、免疫保护相关机制 |
| 四、新冠病毒疫苗开发五大策略 |
| 五、疫苗开发面对的挑战 |
| 六、总结 |
| 七、参考文献 |
| 作者简历及在读期间主要研究成果 |
（6）新冠病毒疫苗安全性和有效性的展望（论文提纲范文）
| 1 新冠疫苗的安全性评价 |
| 1.1 制剂安全性评价 |
| 1.2 免疫病理的评价 |
| 2 新冠疫苗的有效性评价 |
| 2.1 疫苗免疫应答的强度 |
| 2.2 疫苗免疫应答的持久性 |
| 2.3 老年人群对疫苗的应答水平 |
| 3 小结 |
（7）严重急性呼吸综合征冠状病毒2疫苗（论文提纲范文）
| 1 SARS-CoV-2及其诱导的免疫应答 |
| 2 SARS-CoV-2疫苗的种类 |
| 2.1 减毒活疫苗 |
| 2.2 灭活病毒疫苗 |
| 2.3 病毒载体疫苗 |
| 2.4 核酸疫苗 |
| 2.5 蛋白疫苗 |
| 3 SARS-CoV-2疫苗的动物模型 |
| 4 SARS-CoV-2疫苗研制须关注的问题 |
| 4.1 控制下人体感染研究 |
| 4.2 疫苗疾病增强 |
| 4.3 SARS-CoV-2疫苗诱导保护性免疫力的持续时间 |
| 4.4 年长者SARS-CoV-2疫苗 |
| 4.5 SARS-CoV-2疫苗的佐剂 |
| 4.6 SARS-CoV-2疫苗研制的长期性 |
| 4.7 SARS-CoV-2疫苗效力的判断 |
| 4.8 非SARS-CoV-2疫苗的抗SARS-CoV-2作用 |
（8）SARS冠状病毒免疫增强型核酸疫苗构建及免疫效果评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1. 前言 |
| 1.1 SARS 冠状病毒及SARS 研究进展 |
| 1.1.1 SARS-CoV 在冠状病毒家族中的分类学地位 |
| 1.1.2 SARS-CoV 的分子生物学特性 |
| 1.1.3 SARS-CoV 的结构蛋白及其生物学功能 |
| 1.1.4 SARS 疫苗的研究 |
| 1.2 免疫佐剂的研究进展 |
| 1.2.1 铝佐剂、MF59 以及磷酸钙佐剂 |
| 1.2.2 细胞因子佐剂 |
| 1.2.3 CpG ODN |
| 1.2.4 霍乱毒素B 亚单位 （Cholera Toxin B subunit，CTB） |
| 1.3 实验目的与意义 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌株与载体 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 标准参照物 |
| 2.1.5 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 SARS-CoV S1 基因及霍乱毒素B 亚单位的亚克隆及原核表达 |
| 2.2.2 SARS-CoV S1 蛋白及CTB 蛋白多克隆抗体制备 |
| 2.2.3 真核表达质粒的构建及体外瞬时表达检测 |
| 2.2.4 真核表达质粒的大量制备 |
| 2.2.5 实验动物分组及其处理 |
| 2.2.6 试验材料采取及处理 |
| 2.2.7 免疫小鼠T 淋巴细胞增殖实验 |
| 2.2.8 免疫小鼠脾脏及外周血T 淋巴细胞亚型检测 |
| 2.2.9 酶联免疫吸附实验 （ELISA） 检测外周血中抗S1 蛋白抗体 |
| 2.2.10 免疫小鼠脾脏及外周血特异性细胞毒性T 淋巴细胞实验 |
| 2.2.11 小鼠外周血IFN-γ的检测 |
| 2.2.12 小鼠外周血IL-4 的检测 |
| 2.2.13 数据处理 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 SARS-CoV S1 基因及霍乱毒素B 亚单位的亚克隆及原核表达 |
| 3.1.1 重组质粒pGE-S1 与pGE-CTB 的构建与鉴定 |
| 3.1.2 SARS-CoV S1 基因的原核表达、鉴定与纯化 |
| 3.1.3 CTB 基因的原核表达、鉴定与纯化 |
| 3.2 SARS-CoV S1 蛋白与CTB 蛋白多克隆抗体制备及效价检测 |
| 3.3 真核表达质粒的构建及体外瞬时表达检测 |
| 3.3.1 真核表达质粒pVAX-S1、pVAX-CTB 和pVAX-S1-CTB 的构建 |
| 3.3.2 真核表达质粒体外瞬时表达检测 |
| 3.4 小鼠脾脏及外周血T 淋巴细胞增殖功能动态变化 |
| 3.4.1 脾脏T 淋巴细胞增殖功能动态变化 |
| 3.4.2 外周血T 淋巴细胞增殖动态变化 |
| 3.5 免疫小鼠脾脏及外周血T 淋巴细胞亚型动态变化 |
| 3.5.1 脾脏CD4~+T 淋巴细胞动态变化 |
| 3.5.2 外周血CD4~+T 淋巴细胞动态变化 |
| 3.5.3 脾脏CD8~+T 淋巴细胞动态变化 |
| 3.5.4 外周血CD8~+T 淋巴细胞动态变化 |
| 3.6 免疫小鼠脾脏及血液特异性细胞毒性T 淋巴细胞活性检测 |
| 3.6.1 脾脏特异性细胞毒性T 淋巴细胞活性检测 |
| 3.6.2 外周血特异性细胞毒性T 淋巴细胞活性检测 |
| 3.7 小鼠外周血抗SARS-CoV S1 IgG 抗体含量动态变化 |
| 3.8 小鼠外周血IFN-γ的检测 |
| 3.9 小鼠外周血IL-4 的检测 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 真核表达载体的选择 |
| 4.2 SARS-CoV S1 基因和佐剂CTB 重组质粒联合免疫设计 |
| 4.3 SARS-CoV S1 蛋白及霍乱毒素B 亚单位的原核表达 |
| 4.4 重组真核表达质粒体外瞬时转染分析 |
| 4.5 脾脏及外周血T 淋巴细胞增殖活性分析 |
| 4.6 脾脏及外周血T 淋巴细胞亚群动态变化及特异性T 淋巴细胞毒性检测结果分析.. |
| 4.6.1 脾脏及外周血CD4~+T 淋巴细胞动态变化结果分析 |
| 4.6.2 脾脏及外周血CD8~+T 淋巴细胞动态变化结果分析 |
| 4.6.3 脾脏及外周血特异性T 淋巴细胞毒性结果分析 |
| 4.7 小鼠外周血抗SARS-CoV S1 IgG 抗体含量动态变化分析 |
| 4.8 细胞因子IL-4 及IFN-γ含量分析 |
| 5. 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（9）严重急性呼吸综合征（SARS）康复者长期的体液免疫记忆反应（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 病毒的可能来源和跨种传播 |
| 1.2 SARS-CoV的主要结构蛋白 |
| 1.2.1 SARS-CoV S蛋白、受体和受体结合区(RBD) |
| 1.2.2 SARS-CoV N蛋白 |
| 1.3 SARS-CoV的实验室诊断 |
| 1.4 SARS-CoV的免疫应答 |
| 1.4.1 SARS-CoV的体液免疫反应 |
| 1.4.2 SARS-CoV的细胞免疫反应 |
| 1.5 本研究目的、意义和实验流程 |
| 1.5.1 研究目的与意义 |
| 1.5.2 本研究的实验流程 |
| 2 研究对象、实验材料与实验方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 实验材料、试剂、仪器和试剂配制 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.2.4 常见试剂配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1. 大肠杆菌(E.coli)化学感受态的制备 |
| 2.3.2 转化 |
| 2.3.3 质粒的大量提取(QIAGEN试剂盒) |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.3.5 质粒定量 |
| 2.3.6 pRBD质粒转染293T细胞(用LIPOFECTAMINE 2000) |
| 2.3.7 ELISA初步检测RBD表达 |
| 2.3.8 RBD蛋白的纯化与浓缩 |
| 2.3.9 蛋白定量(Bio-Rad Protein Assay) |
| 2.3.10 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) |
| 2.3.11 Western Blotting |
| 2.3.12 SARS-CoV IgG检测(商品化试剂盒) |
| 2.3.13 S蛋白、N蛋白、RBD蛋白间接ELISA |
| 2.3.14 功能性假病毒的获得 |
| 2.3.15 功能性假病毒的滴度测定 |
| 2.3.16 中和抗体检测操作流程 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 RBD质粒琼脂糖电泳 |
| 3.2 ELISA初步检测RBD转染后的表达 |
| 3.3 SDS-PAGE分析纯化的RBD蛋白 |
| 3.4 RBD蛋白免疫印迹 |
| 3.5 RBD蛋白定量 |
| 3.6 假病毒制备所用质粒琼脂糖电泳 |
| 3.7 功能性假病毒的滴度测定 |
| 3.8 SARS-CoV,S蛋白和N蛋白IgG动态变化 |
| 3.9 抗体的中和活性及与SARS-CoV、S蛋白IgG相关性 |
| 3.10 RBD IgG抗体动态变化以及与中和活性的相关性 |
| 3.11 4名康复者第五年IgG抗体和抗体的中和活性检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 SARS-CoV及其结构蛋白抗体动态变化 |
| 4.1.1 S蛋白、N蛋白特异抗体动态变化 |
| 4.1.2 S蛋白间接ELISA的灵敏度高于商品化试剂盒 |
| 4.1.3 SARS康复者抗体的中和活性 |
| 4.1.4 S蛋白特异IgG抗体与中和活性相关性 |
| 4.1.5 RBD蛋白特异IgG抗体与中和活性相关性 |
| 4.2 抗体长期存在机制与意义 |
| 4.2.1 抗体长期存在的机制 |
| 4.2.2 抗体长期存在的意义 |
| 5 小结 |
| 6 参考文献 |
| 综述 SARS研究概述 |
| 综述参考文献 |
| 文章发表 |
| 致谢 |
（10）SARS患者感染危险因素及其随访观察研究（论文提纲范文）
| 主要英文缩略语一览表 中文摘要 英文摘要 引言 参考文献 第一部分 |
| 某医院SARS |
| 感染相关因素分析 材料与方法 结果 讨论 参考文献 第二部分 |
| SARS |
| 感染易感基因的病例对照研究 材料与方法 结果 讨论 参考文献 第三部分 |
| SARS |
| 病例的前瞻性血清流行病学研究 材料与方法 结果 讨论 参考文献 第四部分 |
| SARS |
| 病例记忆性淋巴细胞免疫应答研究 材料与方法 结果 讨论 参考文献 总结 致谢 附录1 |
| 综述 参考文献 附录2 |
| 从事非典型肺炎一线医护人员调查表 附录3 |
| 传染性非典型肺炎临床诊断标准 附录4 |
| 博士期间已发表和待发表论文 附录5 |
| 个人简历 |
四、SARS疫苗研究的动态（论文参考文献）
- [1]新型冠状病毒感染者和灭活疫苗受种者抗体水平研究[J]. 徐娜妮,喻剑华,胡小炜,李海燕,郑琳,孔庆鑫,叶非,李静,覃盼. 中华微生物学和免疫学杂志, 2022(01)
- [2]抗体检测对COVID-19的诊断价值和疫苗的免疫性分析[D]. 林立鹏. 汕头大学, 2021(02)
- [3]MERS-CoV与SARS-CoV-2亚单位疫苗与核酸疫苗研究[D]. 杨韧. 中国疾病预防控制中心, 2021(02)
- [4]新型冠状病毒基因进化与无症状感染的流行病学特征[D]. 丁一波. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(02)
- [5]新型冠状病毒RBD重组蛋白疫苗及多肽疫苗的设计和免疫原性研究[D]. 周晶晶. 浙江大学, 2021(02)
- [6]新冠病毒疫苗安全性和有效性的展望[J]. 王宾,钟一维. 中国科学基金, 2020(05)
- [7]严重急性呼吸综合征冠状病毒2疫苗[J]. 于永利. 微生物学免疫学进展, 2020(04)
- [8]SARS冠状病毒免疫增强型核酸疫苗构建及免疫效果评价[D]. 王超. 东北农业大学, 2011(04)
- [9]严重急性呼吸综合征（SARS）康复者长期的体液免疫记忆反应[D]. 刘利锋. 北京协和医学院, 2010(12)
- [10]SARS患者感染危险因素及其随访观察研究[D]. 汤芳. 中国人民解放军军事医学科学院, 2009(09)