一、组织工程重建兔颞下颌关节盘软骨（论文文献综述）
王晨宇,王英男,汪存艺,施洁珺,王慧明[1]（2021）在《组织工程修复颞下颌关节的关键因素研究进展》文中研究表明颞下颌关节骨关节炎（TMJOA）主要表现为颞下颌关节盘（TMJD）穿孔以及髁突骨软骨复合体（COCC）破坏。近年来,组织工程技术成为修复颞下颌关节的有效策略之一。随着支架材料技术的不断进步,结合天然材料与人工合成材料优势的复合支架成为优化支架性能的重要手段。近年来,微创理念下的原位成胶方法极大地解决了手术创伤以及材料吻合的问题,有利于组织工程向临床转化。细胞外基质支架技术在解决支架来源问题的同时最大程度地模拟了细胞外环境,为颞下颌关节组织工程向动物水平的转化提供了重要的手段。由于肋软骨细胞来源与扩增的限制,采用不同来源的间充质干细胞成为颞下颌关节组织工程的广泛选择,其中从关节软骨表面分离得到的纤维软骨干细胞可能更为合适。转化生长因子β超家族由于其明确的骨软骨活性,富血小板衍生物作为一种制备便捷的复合生物因子,同时结合间充质干细胞外泌体和应力刺激的形式调控细胞外微环境等方法均在颞下颌关节组织工程中得到运用。未来,通过复合生物活性因子并结合一定的应力刺激可能成为颞下颌关节组织工程研究的重要趋势之一。本文就组织工程技术修复颞下颌关节骨软骨复合体及关节盘的进展,尤其是在支架材料、种子细胞以及刺激因子方面的研究进展作一综述,以期为未来的研究设计和临床干预提供指导。
盛广[2]（2021）在《不可复性盘前移位患者髁突骨密度的差异性分析》文中认为目的:使用锥形束电脑体层摄影影像学方法测量不可复性盘前移位患者髁突骨皮质及骨松质骨密度,并以此总结并分析出不可复性盘前移位患者髁突骨皮质及骨松质变化,并为临床诊治提供思路指导。方法:收集2018-2019年期间就诊于本院颞下颌关节紊乱病专家门诊的所有的患有不可复性盘前移位的患者,其中随机挑选24例患者作为病例组,同样收集2018-2019年期间就住于我院颌面外科病房的所有病人,罹患颞下颌关节病的患者除外,随机挑选出24例患者作为对照组。两组患者都拍摄锥形束电脑体层摄影,并收集患者的既往史及现病史、一般资料,获得的锥形束电脑体层摄影资料后使用Mimics软件进行双侧髁突三维模型重组,通过重组的双侧髁突三维立体模型,病例组测量患侧髁突及关节结节的骨松质和骨皮骨密度;对照组测量双侧髁突及关节结节骨松质和骨皮质密度值。对照组的髁突及关节结节骨密度为左右侧髁突的平均值,然后两组数据采用两独立样本的T检验方法进行统计分析。结果:1.病例组髁突骨松质骨密度值（588.05±110.84Hu）大于对照组（428.96±90.68Hu）（P<0.05）;骨皮质骨密度值（610.21±77.75Hu）与对照组（633.95±57.39Hu）无明显差异（P>0.05）;2.病例组中的女性患者的髁突松质骨骨密度值与对照组女性松质骨骨密度值之间有明显的差异,P<0.05,差异有统计学意义;病例组中的女性患者的髁突皮质骨骨密度值与对照组女性皮质骨骨密度值没有明显差异,P>0.05,差异没有统计学意义;3.病例组中的男性患者的髁突松质骨骨密度值与对照组中男性松质骨骨密度值之间有明显的差异,P<0.05,差异有统计学意义;病例组中患者中的男性患者的髁突皮质骨骨密度值与对照组中男性皮质骨骨密度值没有明显差异,P>0.05,差异没有统计学意义;4.病例组关节结节骨松质骨密度值（567.49±61.07Hu）大于对照组（409.55±78.14Hu）（P>0.05）;骨皮质骨密度值（645.50±29.61Hu）与对照组（699.18±90.28Hu）无明显差异（P>0.05）;结论:不可复性盘前移位患者患侧髁突松质骨骨密度较正常人升高,髁突皮质骨骨密度较正常人没有明显变化;且这种差异性表现与性别没有相关性,即男性患者和女性患者的髁突骨松质和骨皮质的变化都和前面的结论相同;颞下颌关节不可复性前移位患者的关节结节的骨密度和正常人相比,差异没有统计学意义。
贾梦莹[3]（2021）在《NLRP3/Caspase-1焦亡经典途径在异常咬合导致颞下颌关节软骨退变中的作用》文中认为目的:颞下颌关节骨关节炎（Temporomandibular Joint Osteoarthritis,TMJOA）是影响口颌功能的颌面部高发病,髁突软骨缺损难以自愈,其退变分子机制不明。力学刺激直接作用软骨,炎症反应广泛参与髁突软骨破坏。细胞焦亡以释放炎性因子白细胞介素1β（Interleukin-1β）,IL-18为主要特征,参与慢性炎症,而细胞焦亡在TMJOA软骨细胞中的研究甚少。为此本研究旨在探索异常力学刺激下NLRP3/Caspase-1焦亡经典途径在软骨细胞的表达情况,为TMJOA的靶向治疗提供线索。方法:第一部分:（1）临床研究,收集就诊于新疆医科大学第一附属医院颞下颌关节紊乱病患者颞下颌关节滑液,根据CBCT或MRI检查分为伴髁突骨质破坏的TMJOA患者组与不伴髁突骨质破坏的颞下颌关节结构紊乱病（Temporomandibular Joint internal derangement,TMJID）组,分析临床基线资料。（2）酶联免疫法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）分析焦亡相关炎性介质IL-1β,IL-18,Caspase-1,NLRP3在两组的表达差异。第二部分:（1）组织水平,通过SD大鼠单侧前牙反牙合（Unilateral anterior crossbite,UAC）干预4周,8周,12周,建立TMJOA模型,通过体式显微镜观察软骨形态结构,Micro-CT扫描软骨下骨,Mimics 20.0系统分析骨体积分数BV/TV,骨表面积与骨体积比BS/TV,骨小梁厚度Tb.Th及骨小梁个数Tb.N,评价软骨下骨改建情况,组织病理学检查及评分系统评价软骨病损特征。（2）使用免疫组织化学技术检测焦亡经典途径关键分子IL-1β,IL-18,NLRP3,ASC,Caspase-1,GSDMD在正常组与UAC诱导组颞下颌关节组织的表达及分布,实时聚合酶链式反应（Real time polymerase chain reaction,RT-PCR）以及蛋白印迹法（Western blot,WB）检测焦亡关键基因及蛋白在UAC诱导组与对照组的表达情况。第三部分:（1）分子水平,分离培养SD大鼠软骨细胞,分别采用0 dyn/cm2,4 dyn/cm2,12dyn/cm2,16 dyn/cm2的流体剪切力（Fluid Flow Shear Stress,FFSS）干预软骨细胞1h;采用12 dyn/cm2的FFSS干预软骨细胞1h,2h,4h,通过ELISA技术比较软骨细胞培养基上清液中IL-18,IL-1β的表达差异。（2）通过AO-EB染色比较细胞破膜死亡在各组的表达情况。（3）通过WB技术比较焦亡关键蛋白IL-1β,IL-18,NLRP3,ASC,Caspase-1,GSDMD在各组的表达差异。结果:第一部分:（1）伴髁突骨质破坏的TMJOA患者与不伴有髁突骨质破坏的TMJID患者好于发中青年女性,均有颞下颌关节疼痛及功能紊乱症状,TMJOA组功能紊乱人数占比较大。（2）颞下颌关节滑液焦亡相关炎性介质IL-1β,IL-18,Caspase-1,NLRP3的表达比较分析,证明了伴髁突骨质破坏的TMJOA患者IL-1β,IL-18,Caspase-1,NLRP3的浓度较高（P<0.05）。第二部分:（1）UAC可诱导TMJOA样表现,体式显微镜可见软骨形变,随UAC作用时间延长,较同时间正常对照组病损加重,Micro-CT显示BV/TV较同时间正常对照组降低,软骨下骨丧失明显,UAC诱导4周出现BS/BV增高（P<0.05）,短期骨改建,UAC诱导8周及12周,差异无统计学意义（P<0.05）,Tb.Th在UAC诱导12周减小,Tb.N在UAC诱导4周,8周减小（P<0.05）。UAC诱导组较同时间正常对照组组织病理学评分增加。（2）免疫组化显示UAC组焦亡关键蛋白IL-1β,IL-18,NLRP3,ASC,Caspase-1,GSDMD高表达于软骨层,RT-PCR及WB亦检测到UAC诱导组较同时间正常对照组表达高水平的焦亡相关基因及蛋白（P<0.05）。第三部分:（1）ELISA结果表明软骨均接受1h FFSS干预时,4 dyn/cm2,12 dyn/cm2,16 dyn/cm2FFSS干预组较0 dyn/cm2FFSS对照组比较,培养基上清炎性因子IL-1β,IL-18的表达水平增高（P<0.05）。在12dyn/cm2FFSS作用下,随FFSS干预时间延长,软骨细胞焦亡关键分子表达增高（P<0.05）。（2）AO-EB染色表明随FFSS载荷的增加以及作用时间的延长,破膜死亡细胞数增多。（3）WB显示软骨细胞焦亡关键蛋白IL-1β,IL-18,NLRP3,ASC,Caspase-1,GSDMD的表达也随FFSS载荷增加以及作用时间的延长而上调（P<0.05）。结论:（1）TMJOA患者滑液中可表达高浓度的焦亡相关炎性介质。（2）单侧前牙反牙合可诱导TMJOA病损,焦亡关键蛋白可表达于髁突软骨层,随OA病损程度加重,焦亡关键分子基因及蛋白的表达量增加。（3）软骨细胞存在细胞焦亡,随FFSS作用软骨细胞强度及时间的增加,软骨细胞焦亡现象加重。
叶伟龙[4]（2021）在《自组装多肽水凝胶模拟TGF-β辅助软骨修复的研究》文中研究说明第一章RAD/CM水凝胶的制备与材料学表征目的:自组装多肽中带正电、电中性、带负电的氨基酸间隔排列,在非共价键作用下组装成长纳米纤维网。在肽链单体上接枝功能短肽后可以赋予其生物学活性。本次研究将TGF-β模拟肽CM10（LIANAK）接枝到RAD-I上,从自组装多肽水凝胶的制备过程,宏观形貌,微观结构,流变特性等材料学角度进行分析。方法:设计和合成自组装多肽RAD与RAD-CM,超声促溶于超纯水并按质量比1:1混合后,对混合多肽溶液进行原子力显微镜（Atomic Force Microscopy,AFM）,圆二色光谱仪（Circular Dichroism,CD）等表征,以评价其组装效果。使用培养基将p H中和成胶后,肉眼观察水凝胶的宏观形貌,并使用扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscopy,SEM）检测其微观纤维网形貌。此外行流变仪测试（Rheometer）,以评价水凝胶的粘弹性,分析其机械强度。结果:AFM显示RAD/CM组见多肽分子间组装成典型的相互交织的纳米纤维,直径约为7nm。CD显示在195nm波长处存在椭圆率正峰,而216nm处存在负峰,为典型的β-折叠结构的光谱曲线。中和p H后肉眼可见较稳定的柔性水凝胶样粘性液体,倒置后能稳定地停留在离心管底而不流动。SEM见致密的的纳米纤维网状结构表现。流变仪结果显示约1%形变以内储存模量显着高于损耗模量且保持稳定,而约5%形变后储存模量和损耗模量交汇。结论:RAD/CM混合多肽经过溶解和中和p H后能形成稳定的纳米纤维水凝胶。其独特的流变特性表明水凝胶能承受一定程度的压力,而负重过大时则会转为粘性流体适应缺损部位形貌,这在个性化修复中具有很好的应用前景。第二章RAD/CM水凝胶体外诱导干细胞成软骨分化目的:通过在RAD/CM水凝胶上培养兔骨髓间充质干细胞,验证生物相容性的同时,探索RAD接枝的CM在促进干细胞向成软骨细胞分化中的诱导作用,以评估功能化多肽模拟TGF-β活性的表现。方法:制备RAD/CM自组装多肽水凝胶,并设RAD作为阴性对照组。细胞相容性试验包括细胞增殖（CCK-8）、细胞活力（Live/Dead Staining）、细胞铺展（Cell Skeleton Staining）。CCK-8在第1/4/7天于酶标仪测定450nm处吸光度。细胞活死染色在第1/4天行钙黄绿素/碘化丙啶染色,于激光共聚焦显微镜,488/545nm激发光下观察活死细胞数量及比例。细胞骨架染色于第2/6天行Sytox Green/罗丹明-鬼笔环肽染色,于激光共聚焦显微镜,488/545nm激发光下观察细胞核与细胞内微丝分布。为检测CM接枝后生物学活性,将细胞在水凝胶上无TGF-β诱导21天后行阿利新蓝染色评估软骨基质分泌,同期RT-q PCR检测GAPDH,SOX9,Aggrecan,Collagen II,Collagen I表达。结果:CCK-8结果显示从1/4/7天的观察可见理想的增长曲线。活死染色显示第1天时RAD/CM水凝胶上基本无死细胞,第4天时仍零星少见。骨架染色显示第2天时细胞微丝隐约可见,第6天时细胞微丝密集分布成网。无TGF-β诱导分化21天后,RT-q PCR见RAD/CM组SOX9,AGG,COL l II,COL I的表达都高于RAD对照组。阿利新蓝染色见RAD/CM组水凝胶有较大的蓝染细胞团块,与RAD/TGF-β3组相近,显着优于基本为散在分布单个细胞的RAD组。结论:体外实验中RAD/CM自组装多肽水凝胶的生物相容性良好,具有TGF-β模拟肽的诱导成软骨作用,为进一步体内试验提供实验基础与理论依据。第三章RAD/CM水凝胶复合脱细胞基质辅助软骨修复目的:将RAD/CM多肽水凝胶复合于DCM支架,以增强其机械强度,评估其在兔膝软骨缺损修复模型中的应用。方法:用猪软骨制备脱细胞基质支架,切割成统一形状后将多肽溶液吸附于其中中和成胶。选择新西兰兔建立软骨全层缺损模型,分别加入不同分组的支架材料。4周后取材。分别进行修复区大体观评估、ICRS评分、Micro-CT评估软骨下骨、HE染色评估大致修复效果、番红O/固绿评估细胞外蛋白多糖、COL II免疫组化与天狼猩红染色鉴别胶原类型等分析,以评估软骨组织修复情况。结果:脱细胞基质松软有弹性,复合水凝胶后有所溶胀,同时很好地稳定了水凝胶的形貌。体内植入修复4周后,RAD/CM/DCM实验组在质地、透明度、与周围组织融合度等方面表现均优于其他组,ICRS评分与此一致;Micro-CT结果显示相比空白对照组,有DCM的三组,其软骨缺损区底部密度相对较低。HE与番红O/固绿染色见实验组修复组织丰满均匀、与周围软骨及软骨下骨很好地融合;抗II型胶原纤维免疫组化染色见实验组有最显着的染色征象,而天狼猩红染色中实验组有最少的I型与III型胶原纤维,表明实验组更趋向于分泌II型胶原纤维。结论:体内实验结果验证RAD/CM显着增强软骨基质的分泌,而脱细胞基质的占位作用为软骨修复提供了时间与空间的条件,二者表现出对软骨缺损修复的强协同作用。
董芳瑞[5]（2021）在《氧分压及葡萄糖浓度对羊颞下颌关节盘细胞呼吸代谢的影响》文中进行了进一步梳理目的:以葡萄糖浓度和氧浓度为观察指标模拟细胞生长环境,观察营养环境的改变对细胞增殖生长、基质合成、呼吸代谢的联合影响,以及探讨羊颞下颌关节盘细胞呼吸代谢的途径。实验设计:选取3-6月龄新鲜羊头体外分离提取原代羊颞下颌关节盘细胞,传代培养至三代,依照不同的葡萄糖浓度水平将实验组分为无糖组（0m M）、微糖组（0.5m M）、低糖组（3m M）、正常糖组（5.5m M）、高糖对照组（22.5m M）。再依照不同氧分压分为常氧组（21%O2）和低氧组（2%O2）。分别在不同培养环境中培养并检测各项指标。CCK-8法检测细胞增殖水平;XFe Seahorse糖酵解试剂盒检测细胞外酸化率（ECAR）和细胞耗氧量（OCAR）;酶联免疫分析（ELISA）试剂盒检测呼吸代谢相关因子的浓度:其中选取乳酸脱氢酶（LDH）、细胞活性氧（ROS）和超氧化物歧化酶（SOD）;RT-q PCR检测呼吸代谢相关基因表达量:葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）和AMP活化蛋白激酶（AMPKα1）以及细胞外基质相关基因的表达量:Ⅰ型胶原（COL-Ⅰ）、Ⅱ型胶原（COL-Ⅱ）和聚集蛋白多肽（Aggrecan）;Mitotracker-Green线粒体荧光探针染色后流式细胞仪（FCM）分析以及激光共聚焦显微镜（CLSM）观察并采集图像;数据分析使用单因素方差分析（one-way ANOVA）,双因素方差分析（two-way ANOVA）。主要结果:（1）细胞增值率:21%常氧下短时间（9天）的葡萄糖浓度变化对细胞增殖无显着影响;2%低氧下高糖组细胞增殖速率为常氧组60%,低糖组细胞增殖停滞。（2）PCR检测结果:不论氧分压如何,随着糖浓度水平增高COL-Ⅰ和COL-Ⅱ基因表达量显着上调（p<0.0001）。低氧时COL-Ⅰ的基因表达量显着下调（p<0.0001）。（3）能量分析结果:常氧时,糖浓度越低的分组其OCAR越高,糖酵解能力也越高。低氧时TMJ关节盘细胞的ECAR（p<0.0001）和OCAR（p=0.0004）相比常氧时显着降低。低氧时,TMJ关节盘细胞的能量代谢受到抑制。（4）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒检测结果:常氧时,LDH浓度随培养时间而下降,ROS和SOD随着培养时间而上升,不同葡萄糖组间无统计学差异（p>0.05）。低氧时,LDH浓度随培养时间而上升,ROS和SOD浓度上升更加明显。（5）Mitotracker线粒体染色:随着葡萄糖浓度的增加,线粒体数量增加,低氧组与常氧组相比其数量显着增加,高糖组线粒体形态正常,而无糖组线粒体出现肿胀变形。结论:糖酵解可能是TMJ关节盘细胞能量代谢的主要途径,其代谢方式会随营养环境的改变而调节,葡萄糖是保证关节盘细胞存活、细胞外基质合成以及维持线粒体功能的必须营养素。
曹天栋[6]（2020）在《氧等离子体对3D-PGS/PLLA多孔支架的表面修饰可增强山羊关节盘细胞的增殖和分化》文中研究指明背景:颞下颌关节紊乱病（Temporomandibular joint disorders,TMD）为颞下颌关节区域的结构和功能异常的一种复杂的退行性变。其发病机理目前尚不明确,且目前的许多治疗方法都有一定的不足,部分患者在病程后期甚至可能需要摘除损坏的关节盘。而近年来组织工程的发展为颞下颌关节紊乱病的治疗提供了新的选择。颞下颌关节组织工程主要是对需要手术治疗的颞下颌关节区域疾病进行再生治疗。其目的是创造具有相似组织结构和功能以及良好生物学特性的新组织来修复受损组织。生物支架在支持细胞和/或生物活性分子促进受损组织修复和/或组织再生方面发挥着关键作用,而寻找合适的材料来替代、修复损坏的关节盘成为当前需解决的难题。我们课题组对聚癸二酸甘油酯（PGS）/左旋聚乳酸（PLLA）复合纳米支架的机械性能和生物学性能进行了探索,实验结果表明PGS/PLLA支架在颞下颌关节组织工程有一定的应用前景。但PGS/PLLA复合纳米支架的表面亲水性差,不利于细胞的黏附,针对这一问题,本课题组认为有必要改善支架表面的亲水性使其有利于细胞黏附。目的:对PGS/PLLA支架表面进行等离子体处理以改善其表面亲水性,并探索等离子体处理对支架表面性能改变的机理,为促进PGS/PLLA支架在颞下颌关节组织工程的应用提供新的方法。方法:在特定模具内用致热相分离法制备PGS/PLLA复合纳米支架,将支架分为两组,分别为:处理组和未处理组。细胞来源:体外分离、培养2-3月龄山羊颞下颌关节盘细胞,传代培养至P1代。等离子体处理仪对支架进行表面改性,处理条件为:100W,970S。分别对处理前后的PGS/PLLA支架进行性能表征和生物学性能评价。扫描电镜（SEM）用来观察等离子体处理前后支架表面形貌的变化;原子力显微镜（AFM）检测支架表面的粗糙度;傅里叶变换红外光谱仪（FTIR）检测处理前后支架的相关化学键有无变化;X射线光电子能谱（XPS）用来检测相关元素含量的变化;接触角分析仪用来测量支架表面的水接触角来反映支架表面的亲水性;将关节盘细胞接种在支架上,用扫描电镜观察其黏附情况;活/死细胞检测试剂盒用来检测支架表面细胞的活力;CCK-8检测关节盘细胞在两种支架上的增殖情况;RT-PCR检测Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的相关基因表达量。主要结果:1.扫描电镜和原子力显微镜观察显示:氧等离子体处理前的支架表面较光滑,处理后的支架表面有大小不等的浅坑状结构,表面变得凹凸不平,并且处理后支架表面的粗糙度明显增大。处理前的支架孔径主要为20μm和30μm,处理后支架的孔径主要为10μm和20μm,孔径变得均匀。2.傅里叶变换红外光谱和X射线光电子能谱显示:氧等离子体处理前后的PGS/PLLA支架红外光谱显示没有明显差异。处理后的支架含氧基团的含量高于未处理支架,氧元素所占的比例也高于未处理支架。3.接触角分析仪结果:处理前的支架表面水接触角为103.7±10.1°,处理后的支架表面水接触角为64.7±12.6°。4.细胞黏附结果:在扫描电镜下观察到未处理支架表面的关节盘细胞黏附较差,呈球状;而处理后支架表面的细胞黏附较好,并且伸出伪足。5.活/死细胞染色结果:山羊关节盘细胞在处理前后的PGS/PLLA支架上培养了2天和4天后观察细胞活性。大多数细胞在两种支架上都显示出活性状态,表明这两种支架具有良好的生物相容性,无生物毒性或低毒性。同时在处理后的PGS/PLLA支架上培养了2、4天后细胞的数量和细胞的密度均优于在未处理的PGS/PLLA支架培养的细胞。6.细胞增殖结果:关节盘细胞分别在处理前后的PGS/PLLA支架上培养了1天、3天和5天。随着细胞培养时间的延长,两种支架上细胞的数量均显着增加,并且处理后的支架表面的细胞均多于未处理支架。7.RT-PCR结果:在PGS/PLLA和PGS/PLLA-OH支架上培养14天后,与培养7天相比,I型胶原的基因表达显着增加,在PGS/PLLA-OH支架上培养的细胞基因表达水平高于未处理支架上的细胞。同样,氧等离子体处理的支架细胞中II型胶原的基因表达量也高于未处理支架,而在PGS/PLLA和PGS/PLLA-OH支架上培养7天和14天的细胞II型胶原的表达水平无显着差异。结论:氧等离子体处理前后的PGS/PLLA复合纳米支架均适合山羊颞下颌关节盘细胞在其表面的黏附生长;处理后的支架表面亲水性明显改善,更有利于的细胞的黏附增殖。
魏欣[7]（2019）在《硬组织切片技术应用于三种大动物TMJ形态与组织结构观测的实验研究》文中研究说明[目的]本实验应用硬组织切片技术对比格犬、滇南小型猪、山羊三种大动物的颞下颌关节进行比较研究。通过对未经未脱钙处理的TMJ结构分别进行解剖观测、影像测量、番红0-固绿染色、甲苯胺蓝染色、胶原纤维染色,比较三种动物的TMJ形态结构和组织结构的异同,完善大动物颞下颌关节的研究资料,为颞下颌关节疾病基础研究选择模型动物提供理论依据。[方法]通过解剖学研究方法收集成年健康、头颅发育正常的比格犬、滇南小耳猪、山羊尸头各2个。拍摄CT进行影像学观察,对比双侧髁突形态是否一致,有无先天骨质缺损,矢状位上是否存在关节间隙并测量前、上、后间隙宽度,冠状位上测量内外两侧上下斜面交角;对颞下颌关节进行大体解剖观察比较,使用游标卡尺测量髁突前后径及内外径,髁突表面骨性隆突长宽,髁突各边缘长度,关节盘前后径及内外径。使用角度尺测量髁突前后斜面交角,以髁突软骨覆盖最低点的连线为基准平面,测量髁突前后斜面与基准平面的交角。使用厚度测量尺测量关节盘边缘厚度,中央区域厚度;应用image pro plus软件测量髁突表面积;应用硬组织切片技术制作连续组织切片并应用番红0-固绿、甲苯胺蓝、胶原纤维、弹力纤维染色法观察3种动物颞下颌关节内关节盘、髁突软骨的细胞组成及排列特点。观察是否存在关节表面带、增殖带、纤维软骨带、钙化软骨带并比较它们之间的异同。[结果]1.CT影像测量关节间隙:比格犬关节前间隙为0.88mm、关节上间隙为0.75mm、关节后间隙为0.93mm。滇南小耳猪关节前间隙为1.57mm、关节上间隙为0.89mm、关节后间隙为1.20mm。山羊关节前间隙为1.65mm、关节上间隙为1.70mm、关节后间隙为1.77mm。2.解剖形态学结果:比格犬、滇南小耳猪、山羊的颞下颌关节均由上方的关节窝及关节结节,下方的下颌骨髁突,居于两者中间的关节盘以及外侧包绕的关节囊构成,颞下颌关节整体结构具有相似性。3.比格犬TMJ各部结构观测结果:髁突内外径长约为17.04mm,前后径宽度为10.04mm。髁突上表面似梭型面积约为103.14mm2。髁突前斜面和后斜面的交角为135度,前后斜面软骨覆盖最低点连线的交角为65度。髁突颈部宽2.80mm。关节盘内外径长度为18.04mm,关节盘最大前后径为11.74mm,高度为9.54mm。关节盘近似成椭圆形,面积为252.74mm2,关节盘中央成类圆形透明状,厚度极薄约为0.25mm,前后径为为7.14mm,内外径为11.02mm,环形边缘较厚,厚度为1.48mm。关节窝成马蹄形容纳关节,为颧骨末端与颞骨关节面构成,关节窝宽度为13.14mm,关节窝高度为2.20mm。,内侧中央部成凹陷穿行牵拉关节盘的韧带,凹陷宽度为4.9mm,关节窝前斜面宽度为5.80mm,关节窝后斜面宽度为 7.34mm。4.滇南小耳猪TMJ各部结构观测结果:髁突内外径为24.42mm,髁突前后径为29.10mm,髁突上表类似梭型面积约为466.273mm2。髁突前斜面和髁突后斜面的交角为118度,髁突前斜面和髁突前后斜面覆盖软骨最低点连线的交角为53度。髁突后侧覆盖脂肪组织,其长度为3.70mm,最大宽度为11.78mm。内侧有关节囊附着,其长度为11.80mm,宽度为2mm。关节盘为一前宽后窄的类椭圆形,最大前后径为24.42mm,最大内外径及关节盘前斜面内外径,前斜面宽度为15.20mm,后斜面宽度为14.70mm。关节盘表面积为510.675mm2。关节窝前斜面为一椭圆形,其前后径为20.60mm,内外径为20.20mm。5.山羊TMJ各部结构观测结果:髁突内外径为22.10mm,髁突前后径为11.92mm。髁突关节面的面积约为228.983mm2,髁突的后斜面位于髁突的后内侧1/3处,该区域长度为7.10mm,宽度为3.70mm。髁突前斜面与髁突后斜面的交角为62度。髁突前斜面与髁突前后斜面覆盖软骨最低点连线的交角为27度,未见明显的髁突颈部缩窄。关节盘分为前后两个斜面最大内外径长度为22.00mm,前后径为10.40mm,中央嵴长度为17.10mm,厚度为1.00mm,中央透明带自关节盘前斜面延伸至关节盘后斜面,总长度约为19.58mm,该区域在关节盘后斜面和前斜面外1/3处最为宽大。关节盘面积约为252.74mm2。关节窝可分为前后两个斜面,前斜面内外径为23.84mm,前后径为18.10mm,关节结节后斜面位于关节窝内1/3处,内外径为9.12mm,前后径4.82mm。6.组织结构:关节盘均含有大量胶原纤维,相互交织成网。三种动物髁突表面均覆盖有软骨,软骨分层明显,可分为:关节表面带、增殖带、纤维软骨带、钙化软骨带。比格犬髁突软骨增殖带较窄。滇南小耳猪髁突软骨前、中份细胞分层明显,后份细胞排列混杂没有明显分层。山羊髁突软骨前、中份细胞分层较其它两种动物更为明显,细胞间距小排列成条状,各层结构排列规则,后份细胞成片状分布,增殖带、纤维软骨带增宽,细胞间距增大。三种动物髁突软骨均含有胶原纤维。比格犬髁突软骨胶原纤维内外向走行及前后向走行相互交织成网,后份胶原纤维含量大于前、中份。滇南小耳猪髁突软骨胶原纤维内外向走行为主,同前后向走行的胶原纤维交织成网,中份胶原纤维含量较多。山羊髁突软骨胶原纤维前后向走行为主,同内外向走行的胶原纤维交织成网。比格犬髁突软骨中未发现弹力纤维。滇南小耳猪髁突软骨前、中、后份均含有弹力纤维,且中份含量最多。山羊髁突软骨软骨前、中、后份均含有弹力纤维,且含量未见明显差异。[结论]1.硬组织切片技术确保了大动物颞下颌关节结构的完整性,番红O-固绿染色、甲苯胺蓝染色、胶原纤维染色、弹力纤维染色应用于颞下颌关节硬组织切片有利于整体观察TMJ的组织结构。2.三种大动物的颞下颌关节解剖结构相似,比格犬的关节窝形态、关节盘髁突软骨与滇南小耳猪和山羊的差异较大。3.三种动物髁突均为梭型,髁突软骨细胞分层排列,各层结构规则与人的髁突软骨细胞分层相似。滇南小耳猪、山羊髁突软骨含有弹力纤维。4.三种动物关节盘均由大量胶原纤维相互交织成网状。5.比格犬的颞下颌关节结构与人类颞下颌关节的相似性最好,可作为颞下颌关节骨关节炎的建模动物
张玲[8]（2019）在《与颞下颌关节盘细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞向成纤维细胞样细胞分化的研究》文中进行了进一步梳理目的:探讨直接接触共培养法和Transwell间接接触共培养法诱导山羊骨髓间充质干细胞（Goat bone marrow mesenchymal stem cells,gBMSCs）向山羊颞下颌关节盘细胞（Temporomandibular joint disc cells,TMJ disc cells）中成纤维细胞样细胞分化的可行性及共培养最佳比例,为颞下颌关节盘组织工程的种子细胞来源提供理论依据。方法:1.BMSCs的提取培养和鉴定——提取培养原代BMSCs并传代;流式细胞仪检测BMSCs表面标志物;10μg/L bFGF的成纤维软骨诱导液诱导的BMSCs;甲苯胺蓝染色、天狼猩红染色、番红O染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色分别检测生长因子诱导后的BMSCs成纤维细胞样分化的潜能。2.TMJ disc cells的原代、传代培养并鉴定其特异性——提取并培养原代山羊颞下颌关节盘细胞;CCK8法检测细胞的增殖活性;甲苯胺蓝和天狼猩红染色鉴定TMJ disc cells;免疫组织化学染色检测Ⅰ、Ⅱ型胶原的分布;Elisa试剂盒检测糖胺聚糖（Glycosaminoglycan,GAG）表达水平。3.BMSCs和TMJ disc cells共培养——在直接共培养体系和Transwell共培养体系中,均按1:2、1:1、2:1的比例（BMSCS:TMJ disc cells）对BMSCs和TMJ disc cells进行共培养,同时设置相同浓度的BMSCs在DMEM/F12培养液中培养为阴性对照组,10μg/L bFGF的成纤维软骨诱导液诱导的BMSCs为阳性对照组,分别观察共培养前后细胞的形态与增殖情况;共培养21d时,定性检测——用甲苯胺蓝、天狼猩红、番红O以及免疫荧光染色技术分别检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原和GAG含量分布;定量检测——对各组细胞爬片进行GAG,Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原含量检测;分子水平检测——实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原mRNA的表达。蛋白水平检测——Western blot检测细胞Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原蛋白表达水平。结果:1.山羊BMSCs表达特异性抗原CD44,而低表达造血干细胞标志抗原CD34和CD45;10μg/L bFGF的成纤维软骨诱导液诱导BMSCs,早期细胞形态未见明显变化,10d后以类似于颞下颌关节盘纤维软骨样细胞的长三角形、长梭形细胞为主;诱导后BMSCs的甲苯胺蓝、天狼猩红的组织学染色和I型胶原免疫组化染色均呈阳性,表明BMSCs具有向关节盘细胞诱导分化的能力。2.山羊颞下颌关节盘细胞的甲苯胺蓝染色和天狼猩红染色均呈阳性,说明分离提取得到的是关节盘细胞;检测P1到P5代关节盘细胞的生长曲线图,P1,P2和P3山羊颞下颌关节盘细胞生长曲线图相似,P4开始增殖能力下降;同时从分子水平检测Ⅰ型胶原和GAG的表达,从第4代起Ⅰ型胶原和GAG表达逐渐减少,说明关节盘细胞中成纤维细胞样细胞数量减少,而且合成Ⅰ型胶原和GAG的能力下降。3.在共培养实验中,CCK8法检测各组细胞的生长曲线的对比分析发现:共培养组的增长速度对比关节盘细胞对照组相对较高,而BMSCs组增长速度最慢,且增长速度最高的是直接共培养组1:2（BMSCs:TMJ disc cells）,因此共培养组的细胞增长相对于Transwell间接培养体系和BMSCs诱导组生长增值能力更强;直接接触组的GAG、Ⅰ型胶原的合成和基因表达明显高于Transwell共培养组和BMSCs诱导组,且在直接共培养组的1:2（BMSCs:TMJ disc cells）表达量最高。GAG和Ⅰ型胶原是成纤维细胞样细胞特异性细胞外基质[20-21],两者的存在说明有成纤维细胞样细胞的产生;而Ⅱ型胶原合成及其基因表达在Transwell共培养组中较高,Ⅱ型胶原是软骨样细胞的特异性细胞外基质,在Transwell间接培养组中的含量表达明显,表明Transwell培养体系诱导BMSCs向软骨样细胞分化。结论:1.10μg/LbFGF诱导后的BMSCs具有向成纤维细胞样细胞分化增殖的能力2.取生长良好、I型胶原和GAG表达量居多的P2或P3关节盘细胞进行研究。3.在细胞直接接触共培养体系和Transwell间接接触共培养体系中,直接共培养法对BMSCs向成纤维细胞样细胞分化的影响大于Transwell共培养体系和BMSCs诱导组,且直接共培养最佳比例为1:2（BMSCs:TMJ disc cells）。
滕彬宏[9]（2018）在《KGN诱导人脐带间充质干细胞成软骨分化的体外研究》文中研究表明目的:评估新型小分子化合物Kartogenin（KGN）在体外二维培养环境下对人脐带间充质干细胞成软骨分化的诱导作用;制备、优化羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠自交联自愈合水凝胶,研究此水凝胶应用于软骨组织工程支架领域的可行性;探讨KGN在水凝胶三维培养环境中诱导人脐带间充质干细胞成软骨分化效果。方法:1.采用细胞球团培养法评估KGN诱导人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化效果。首先,从人脐带Wharton胶内提取人脐带间充质干细胞,通过细胞流式鉴定细胞性质。将人脐带间充质干细胞通过重悬离心成细胞团块,采用不同组份的成软骨诱导液（KGN为实验组,TGF-β3为阳性对照组,DMSO为空白对照组,KGN与TGF-β3联合应用组〈TK组〉）,分别诱导人脐带间充质干细胞21天后,通过HE和AB组织学定性染色,软骨蛋白和胶原的免疫荧光染色以及成软骨相关基因RT-PCR检测,分析KGN对人脐带间充质干细胞的成软骨诱导分化作用。2.利用羧甲基壳聚糖内的氨基与氧化海藻酸钠内的醛基所发生的席夫碱反应,以不同交联比例制备水凝胶,通过扫描电镜、凝胶流变分析、体外溶胀率和降解率检测、软骨粘附性测试等方法评估不同交联度水凝胶的理化性能,探究可以应用于软骨修复再生水凝胶材料的制备方法。3.以羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠水凝胶作为培养细胞的三维体系,将人脐带间充质干细胞负载于水凝胶内,通过扫描电镜、细胞增殖（CCK8检测）、Live/Dead染色研究水凝胶的生物相容性。采用不同组份的成软骨诱导液（KGN为实验组,TGF-β3为阳性对照组,DMSO为空白对照组,KGN与TGF-β3联合应用组〈TK组〉）诱导水凝胶内的人脐带间充质干细胞成软骨向分化。体外诱导21天后,通过HE染色、软骨蛋白和胶原的免疫荧光染色以及成软骨相关基因表达量,评估KGN在三维培养环境中诱导人脐带间充质干细胞的成软骨分化效果。结果:1.通过细胞流式分析鉴定得出所分离培养的细胞为人脐带间充质干细胞。细胞以球团的形式在体外诱导21天后,软骨细胞球的组织切片、免疫组化及成软骨相关基因检测表明,单纯KGN组有一定的成软骨诱导分化效果,KGN和TGF-β3联合应用后,成软骨诱导分化效果显着增强。2.以羧甲基壳聚糖内的氨基与氧化海藻酸钠内的醛基不同交联比,制备出各组份的水凝胶。通过对各组份凝胶理化性能的评价发现:当氨基和醛基比例为1:1时,扫描电镜可见均匀和密集的多孔结构;成胶时间可控制在2min;水凝胶与软骨组织的粘附拉力为146.20±5.87Pa,明显高于氨基/醛基比例为2:1的水凝胶（粘附拉力为112.64±7.34Pa）（P<0.05）;溶胀率和降解率都较氨基/醛基比例为2:1的水凝胶稳定。3.制备出的羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠水凝胶（氨基/醛基=1:1）对细胞的粘附、生长和增殖无影响,具有良好的生物相容性;细胞-凝胶复合体培养21天后,TK组和TGF-β3组中蛋白多糖和Ⅱ型胶原总含量明显高于KGN组和空白对照组（P<0.05）;组织学染色及免疫组化分析和成软骨相关基因检测表明,KGN在三维培养环境中诱导人脐带间充质干细胞有一定的成软骨分化效果,但不显着,TGF-β3有明显的成软骨诱导效果,并且KGN可以加强TGF-β3的成软骨诱导分化能力。结论:1.在二维细胞培养环境下,单纯KGN诱导人脐带间充质干细胞成软骨向分化效果不显着,将KGN与TGF-β3联合应用的成软骨分化效果显着,利用其协同效应加强成软骨分化诱导作用可以作为今后软骨组织工程的一种新方法。2.当羧甲基壳聚糖内的氨基和氧化海藻酸钠内的醛基交联比1:1时,此交联度制备的水凝胶具有稳定合适的成胶时间、良好的自愈合特性、与软骨组织有一定的粘附力、较为稳定的溶胀率和降解率,有望作为一种仿生支架材料应用于软骨组织修复和再生领域。3.羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠水凝胶具有良好的生物相容性,可以负载人脐带间充质干细胞在体外构建软骨组织工程化支架。单纯KGN组在三维培养环境中对人脐带间充质干细胞有一定的成软骨诱导分化效果,将KGN与TGF-β3联合应用,对成软骨诱导分化具有协同增强作用,进一步证明了将KGN与TGF-β3联合应用于软骨组织修复和再生的可行性,为之后的体内实验奠定基础。
保善英[10]（2018）在《星孢菌素对山羊颞下颌关节盘细胞自组装基体收缩性的影响》文中研究指明目的:探索不同浓度的星孢菌素对山羊颞下颌关节盘细胞自组装基体两周内的收缩性及细胞外基质合成的影响。方法:1.体外分离山羊颞下颌关节盘,Ⅰ型胶原酶过夜消化,提取关节盘细胞;单层培养山羊颞下颌关节盘细胞。甲苯胺蓝染色和Ⅰ型胶原免疫组织化学染色鉴定P3代细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）的分布。2.利用24孔板制作直径为5mm,深度为10mm的圆柱形琼脂糖模具;每个琼脂糖井用完全培养基连续换液一周。3.收集P3代关节盘细胞,以5.5×106个细胞按照对照组和不同浓度的星孢菌素（Staurosporine）组（0.1nM,1nM,10nM,100nM）种入每个琼脂糖井,每天每井相应换液,培养至一周和两周。4.观察自组装基体的形态变化;冰冻切片做天狼猩红染色展示胶原分布,番红染色显示糖胺聚糖（Glycosaminoglycan,GAGs）的分布;免疫组织化学染色显示Ⅰ型胶原、及α-肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）的分布;ELISA和Blyscan试剂盒检测不同时间段细胞外基质含量的变化。结果:1.光学显微镜下P0,P1,P2及P3代的不同代次细胞形态:从P0代到P3代,细胞形态逐渐变为扁平的长梭形和多边形,其中P3代细胞形态明显粗大。P3代细胞甲苯胺蓝染色和Ⅰ型胶原免疫组织化学染色为阳性,显示细胞外基质糖胺聚糖（GAGs）和Ⅰ型胶原的合成。2.星孢菌素组和对照组细胞均在琼脂糖井内自组装成球形,一周内各组基体都有收缩现象,两周内基体形态变化基本稳定;其中,10nM星孢菌素组直径和湿重最大（P<0.01）;两周时各组基体湿重有增加,但直径增加不是很明显（P<0.01）。3.一周和两周冰冻切片染色显示:各组基体天狼猩红,番红及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色为阳性,星孢菌素组更明显,尤其10nM组为强阳性;而星孢菌素组相对于对照组α-SMA免疫组织化学染色为弱阳性。4.ELISA检测的自组装基体内的Ⅰ型胶原含量和Blyscan试剂盒检测的GAGs含量显示星孢菌素组高于对照组,其中10nM组最明显（P﹤0.01）;另外,各组基体在两周时细胞外基质的含量高于一周组（P<0.01）。结论:不同浓度星孢菌素对于预防自组装基体的收缩有一定效果,但不是非常突出,它更有利于自组装基体细胞外基质的合成。
二、组织工程重建兔颞下颌关节盘软骨（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、组织工程重建兔颞下颌关节盘软骨（论文提纲范文）
（1）组织工程修复颞下颌关节的关键因素研究进展（论文提纲范文）
| 1 组织工程支架材料 |
| 2 组织工程种子细胞 |
| 3 组织工程刺激因子 |
| 4 结语 |
（2）不可复性盘前移位患者髁突骨密度的差异性分析（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容及方法 |
| 1 资料及方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.1.1 纳入标准 |
| 1.1.2 排除标准 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 实验分组 |
| 1.2.2 扫描方法及体位 |
| 1.2.3 扫描机器 |
| 1.2.4 测量方法 |
| 1.2.5 质量控制 |
| 1.2.6 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 颞下颌关节盘不可复性及可复性患者健患侧髁突骨密度的差异性分析 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 新疆医科大学硕士研究生学位论文导师评阅表 |
（3）NLRP3/Caspase-1焦亡经典途径在异常咬合导致颞下颌关节软骨退变中的作用（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 TMJOA患者与TMJID患者颞下颌关节滑液焦亡相关炎性介质的表达研究 |
| 1 研究内容及方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 质量控制 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 NLRP3/Caspase-1焦亡经典途径在大鼠TMJOA组织的表达研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象及材料 |
| 1.2 研究内容 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 流体剪切力干预对软骨细胞焦亡的作用研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象及分组 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 靶向NLRP3炎性小体治疗炎症疾病 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 新疆医科大学博士研究生学位论文 导师评阅表 |
（4）自组装多肽水凝胶模拟TGF-β辅助软骨修复的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一章 RAD/CM水凝胶的制备和材料学表征 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 水凝胶制备及倒置实验 |
| 1.3.2 原子力显微镜测试 |
| 1.3.3 圆二色光谱分析 |
| 1.3.4 扫描电子显微镜测试 |
| 1.3.5 流变学测试 |
| 1.4 结果分析 |
| 1.4.1 倒置实验 |
| 1.4.2 纳米纤维形态 |
| 1.4.3 多肽二级结构 |
| 1.4.4 微观形貌 |
| 1.4.5 储存模量和损耗模量 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 RAD/CM水凝胶体外诱导干细胞成软骨分化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 兔BMSC准备 |
| 2.3.2 细胞相容性实验 |
| 2.3.3 细胞分化实验 |
| 2.4 结果分析 |
| 2.4.1 细胞兼容结果 |
| 2.4.2 细胞分化结果 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 RAD/CM水凝胶复合脱细胞基质辅助软骨修复 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 复合支架制备及形貌观察 |
| 3.3.2 建立兔膝软骨缺损模型 |
| 3.3.3 取材宏观评估 |
| 3.3.4 M-CT |
| 3.3.5 组织学特异性染色 |
| 3.4 结果分析 |
| 3.4.1 复合支架宏观结果 |
| 3.4.2 取材宏观评估 |
| 3.4.3 软骨底部骨化评估 |
| 3.4.4 组织学特异性染色 |
| 3.5 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 生长因子来源的功能模体与软骨组织工程 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（5）氧分压及葡萄糖浓度对羊颞下颌关节盘细胞呼吸代谢的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 颞下颌关节概述 |
| 1.2 颞下颌关节盘 |
| 1.3 颞下颌关节紊乱病 |
| 1.3.1 颞下颌关节紊乱病概述 |
| 1.3.2 颞下颌关节紊乱病的病因 |
| 1.3.3 颞下颌关节紊乱病的治疗 |
| 1.4 颞下颌关节盘细胞的代谢 |
| 1.5 选题依据及研究思路 |
| 第二章 常氧下不同葡萄糖浓度培养对羊颞下颌关节盘细胞能量代谢的影响 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 主要试剂及仪器 |
| 2.2.3 主要试剂配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 羊颞下颌关节盘细胞的提取 |
| 2.3.2 羊颞下颌关节盘细胞的传代培养 |
| 2.3.3 cck-8 细胞增殖检测 |
| 2.3.4 RT-qPCR检测 |
| 2.3.5 XFe Seahorse糖酵解压力测试盒检测 |
| 2.3.6 酶联免疫分析试剂盒(ELISA)检测 |
| 2.3.7 Mitotracker-Green线粒体探针染色 |
| 2.3.8 数据分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 羊颞下颌关节盘原代细胞的培养 |
| 2.4.2 cck-8 检测羊颞下颌关节盘细胞的增殖曲线 |
| 2.4.3 RT-qPCR检测羊颞下颌关节盘细胞外基质相关基因表达量 |
| 2.4.4 RT-qPCR检测呼吸代谢相关基因表达量 |
| 2.4.5 XFe seahorse糖酵解压力测试结果 |
| 2.4.6 ELISA检测呼吸代谢相关产物含量 |
| 2.4.7 流式细胞仪检测线粒体染色荧光强度 |
| 2.4.8 激光共聚焦显微镜观察线粒体形态 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 低氧下不同葡萄糖浓度培养对羊颞下颌关节盘细胞能量代谢的影响 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 主要试剂及仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 羊颞下颌关节盘细胞的提取 |
| 3.3.2 羊颞下颌关节盘细胞的传代培养 |
| 3.3.3 cck-8 细胞增殖检测 |
| 3.3.4 RT-qPCR检测 |
| 3.3.5 XFe Seahorse糖酵解压力测试盒 |
| 3.3.6 酶联免疫分析试剂盒(ELISA)检测 |
| 3.3.7 Mitotracker-Green线粒体探针染色 |
| 3.3.8 数据分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 CCK8 检测羊关节盘细胞的增殖曲线 |
| 3.4.2 RT-qPCR检测羊颞下颌关节盘细胞外基质相关基因 |
| 3.4.3 RT-qPCR检测呼吸代谢相关基因 |
| 3.4.4 XFe seahorse糖酵解压力测试结果 |
| 3.4.5 ELISA检测呼吸代谢相关产物含量 |
| 3.4.6 流式细胞仪检测线粒体染色荧光强度 |
| 3.4.7 激光共聚焦显微镜观察线粒体形态 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 在学期间研究成果 |
| 致谢 |
| 临床病例 |
（6）氧等离子体对3D-PGS/PLLA多孔支架的表面修饰可增强山羊关节盘细胞的增殖和分化（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 颞下颌关节概述 |
| 1.1.1 颞下颌关节盘组织结构 |
| 1.1.2 颞下颌关节紊乱病 |
| 1.2 颞下颌关节组织工程概述 |
| 1.2.1 关节盘组织工程的种子细胞来源 |
| 1.2.2 关节盘组织工程支架的作用及类型 |
| 1.2.3 PGS概述 |
| 1.2.4 PLLA概述 |
| 1.2.5 选题依据与研究意义 |
| 第二章 氧等离子体处理PGS/PLLA纳米支架 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和试验方法 |
| 2.2.1 试剂和实验仪器 |
| 2.2.2 实验试剂配制 |
| 2.2.3 PGS/PLLA纳米支架的制备 |
| 2.2.4 PGS/PLLA纳米支架性能的表征 |
| 2.2.5 山羊颞下颌关节盘细胞的培养 |
| 2.2.6 细胞生物学评价 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 氧等离子处理PGS/PLLA纳米支架的结构与性能 |
| 2.3.2 氧等离子处理PGS/PLLA纳米支架的生物学评价 |
| 第三章 全文总结 |
| 3.1 主要结论 |
| 3.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
| 临床病例 |
（7）硬组织切片技术应用于三种大动物TMJ形态与组织结构观测的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂及配制方法 |
| 方法 |
| 1.3 颞下颌关节的CT观察与数据测量 |
| 1.4 关节盘、髁突的大体解剖观察与数据测量 |
| 1.5 颞下颌关节的硬组织切片制作及染色观察 |
| 结果 |
| 2.1 三种动物颞下颌关节的影像结构 |
| 2.2 三种动物颞下颌关节的解剖结构 |
| 2.3 三种动物的关节盘和髁突软骨组织结构 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 颞下颌关节骨-软骨染色方法 |
| 参考文献 |
| 小型实验动物颞下颌关节骨关节炎动物模型的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（8）与颞下颌关节盘细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞向成纤维细胞样细胞分化的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 骨髓间充质干细胞的培养、鉴定和诱导 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 山羊BMSCs的分离培养 |
| 1.2.2 BMSCs表面标记检测 |
| 1.2.3 BMSCs成纤维软骨诱导 |
| 1.2.4 BMSCs的冻存与复苏 |
| 1.2.4.1 BMSCs冻存 |
| 1.2.4.2 BMSCs复苏 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 原代BMSCs的形态学观察 |
| 1.3.2 BMSCs诱导后倒置显微镜观察 |
| 1.3.3 BMSCs表面标志物检测 |
| 1.3.4 BMSCs诱导后组织学染色结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 颞下颌关节盘细胞的培养 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 山羊TMJ disc cells的分离培养 |
| 2.2.2 山羊TMJ disc cells的复苏与冻存 |
| 2.2.3 山羊 TMJ disc cells 的形态学染色 |
| 2.2.4 CCK8 法检测山羊 TMJ disc cells 的增殖活性 |
| 2.2.5 统计学分析统计学处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 直接和间接Transwell共培养体系下诱导骨髓间充质干细胞向成纤维细胞样细胞分化的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 BMSCs和颞下颌关节盘细胞直接共培养法 |
| 3.2.2 BMSCs和颞下颌关节盘细胞Transwell共培养法 |
| 3.2.3 细胞增值能力分析 |
| 3.2.4 测定指标 |
| 3.2.5 GAG的定量检测 |
| 3.2.6 实时荧光定量PCRⅠ型、Ⅱ型胶原基因表达分析 |
| 3.2.7 WB检测Ⅰ、Ⅱ型胶原 |
| 3.2.8 统计学处理 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 CCK8 法检测共培养细胞的增殖活性 |
| 3.3.2 Ⅰ型胶原的定性检测 |
| 3.3.3 GAG定性检测 |
| 3.3.4 Ⅱ型胶原定性检测 |
| 3.3.5 GAG定量检测 |
| 3.3.6 Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原基因表达的定量分析 |
| 3.3.7 Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原蛋白表达量检测 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 全文总结 |
| 1 本文的主要小结 |
| 2 本文的创新之处 |
| 3 尚需完善及进一步研究之处 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 在学期间成果 |
| 致谢 |
| 临床病例左上后牙牛牙症RCT一例 |
（9）KGN诱导人脐带间充质干细胞成软骨分化的体外研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、体外二维培养环境评估KGN诱导人脐带间充质干细胞成软骨分化效果 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验试剂和设备 |
| 1.1.2 人脐带间充质干细胞的分离、培养及体外扩增 |
| 1.1.3 人脐带间充质干细胞的流式细胞学分析 |
| 1.1.4 体外诱导人脐带间充质干细胞成软骨分化 |
| 1.1.5 不同组份软骨诱导液对对人脐带间充质干细胞的增殖影响 |
| 1.1.6 软骨细胞球团的组织学和免疫组化分析 |
| 1.1.7 细胞球的RT-PCR检测软骨分化相关分析 |
| 1.1.8 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 诱导后的软骨球团和人脐带间充质干细胞的大体观察 |
| 1.2.2 不同组份软骨培养液对人脐带间充质干细胞增殖的影响 |
| 1.2.3 人脐带间充质干细胞的流式分析结果 |
| 1.2.4 诱导后软骨球的组织化学和免疫组化分析 |
| 1.2.5 成软骨相关基因的RT-PCR表达量分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、自交联自愈合软骨组织工程水凝胶支架的制备及表征 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验材料和设备 |
| 2.1.2 水凝胶的制备 |
| 2.1.3 水凝胶的流变学分析 |
| 2.1.4 水凝胶的扫描电镜观察 |
| 2.1.5 水凝胶与软骨组织的粘附拉力测试 |
| 2.1.6 水凝胶的溶胀度 |
| 2.1.7 水凝胶的体外降解实验 |
| 2.1.8 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 水凝胶的成胶效果和凝胶粘附状态 |
| 2.2.2 水凝胶的微观形态观察 |
| 2.2.3 水凝胶的流变学分析 |
| 2.2.4 水凝胶与软骨组织的粘附拉力分析 |
| 2.2.5 水凝胶的溶胀率分析 |
| 2.2.6 水凝胶的降解率分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、体外三维培养环境评估KGN诱导人脐带间充质干细胞的成软骨分化效果 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验试剂和设备 |
| 3.1.2 人脐带间充质干细胞的分离、培养及体外扩增 |
| 3.1.3 自交联自愈合水凝胶的生物相容性评价 |
| 3.1.4 评价细胞-水凝胶复合体的成软骨诱导效果 |
| 3.1.5 RT-PCR检测细胞-凝胶复合体的软骨分化相关基因表达 |
| 3.1.6 诱导后细胞-支架复合体的蛋白多糖和Ⅱ型胶原定量检测 |
| 3.1.7 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 自交联自愈合水凝胶的生物相容性评估 |
| 3.2.2 KGN诱导人脐带间充质干细胞在三维水凝胶内的成软骨分化效果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 颞下颌关节盘和髁突组织工程研究现状和进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（10）星孢菌素对山羊颞下颌关节盘细胞自组装基体收缩性的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 文献回顾 |
| 1 颞下颌关节盘组织工程的研究 |
| 1.1 颞下颌关节盘概述 |
| 1.2 无支架组织工程 |
| 1.3 自组装基体收缩性 |
| 2 星孢菌素 |
| 2.1 化学特性 |
| 2.2 生物特性 |
| 实验 星孢菌素对山羊颞下颌关节盘细胞自组装基体收缩性的影响 |
| 1 引言 |
| 2 实验试剂及仪器 |
| 2.1 主要实验试剂 |
| 2.2 主要实验试剂配制 |
| 2.3 主要实验仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 山羊颞下颌关节盘的分离,消化及单层细胞培养 |
| 3.2 细胞染色 |
| 3.3 三维自组装基体制备 |
| 3.4 自组装基体培养 |
| 4 实验组别 |
| 5 自组装基体观察指标 |
| 5.1 大体组织形态学指标 |
| 5.2 组织学和免疫组织化学染色 |
| 5.3 ELISA检测Ⅰ型胶原蛋白含量 |
| 5.4 Blyscan检测GAGs含量 |
| 5.5 统计学分析 |
| 6 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 在学期间研究成果 |
| 致谢 |
| 临床病例 |
四、组织工程重建兔颞下颌关节盘软骨（论文参考文献）
- [1]组织工程修复颞下颌关节的关键因素研究进展[J]. 王晨宇,王英男,汪存艺,施洁珺,王慧明. 浙江大学学报(医学版), 2021(02)
- [2]不可复性盘前移位患者髁突骨密度的差异性分析[D]. 盛广. 新疆医科大学, 2021(09)
- [3]NLRP3/Caspase-1焦亡经典途径在异常咬合导致颞下颌关节软骨退变中的作用[D]. 贾梦莹. 新疆医科大学, 2021(08)
- [4]自组装多肽水凝胶模拟TGF-β辅助软骨修复的研究[D]. 叶伟龙. 大连医科大学, 2021(01)
- [5]氧分压及葡萄糖浓度对羊颞下颌关节盘细胞呼吸代谢的影响[D]. 董芳瑞. 兰州大学, 2021(09)
- [6]氧等离子体对3D-PGS/PLLA多孔支架的表面修饰可增强山羊关节盘细胞的增殖和分化[D]. 曹天栋. 兰州大学, 2020(01)
- [7]硬组织切片技术应用于三种大动物TMJ形态与组织结构观测的实验研究[D]. 魏欣. 昆明医科大学, 2019(06)
- [8]与颞下颌关节盘细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞向成纤维细胞样细胞分化的研究[D]. 张玲. 兰州大学, 2019(09)
- [9]KGN诱导人脐带间充质干细胞成软骨分化的体外研究[D]. 滕彬宏. 天津医科大学, 2018(02)
- [10]星孢菌素对山羊颞下颌关节盘细胞自组装基体收缩性的影响[D]. 保善英. 兰州大学, 2018(11)