一、肝细胞生长因子受体在大鼠牙胚发育中的表达及其意义(论文文献综述)
张阳[1](2019)在《鸟嘌呤核苷酸结合蛋白3通过JNK和ERK信号通路促进根尖牙乳头干细胞的成牙/成骨分化》文中提出临床常见因无法保留天然牙或先天性缺牙需要牙齿修复,但目前牙齿缺失的修复治疗显然无法与天然牙媲美。根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs)是牙根再生最主要的成牙本质前体细胞,其成牙/成骨分化是牙根形成和发育的关键过程,但这一过程背后的分子机制很大程度上仍然未知。我们课题小组先前的一项研究表明,GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)通过鸟嘌呤核苷酸结合蛋白 3(guanine nucleotide binding protein alpha-inhibiting activity polypeptide 3,GNAI3)调控牙根发育,但是 GNAI3 的作用和机制仍然未知。在本研究中,我们进一步探讨了 GNAI3在牙根发育中的作用和机制。本实验分为三个部分进行探讨:第一部分:小鼠根尖GNAI3的表达,人SCAPs的培养、鉴定。通过免疫组织化学检验鉴定出生后14天小鼠磨牙Hertwig上皮根鞘(Hertwig’s epithelial root sheath,HERS)和HERS周围的间充质中显着表达GNAI3,这表明GNAI3至少参与了牙根的发育。本研究中分离培养的SCAPs,经流式细胞仪证实表达CD90 FITC、CD44 PE,而不表达 CD45 APC、CD14 PE-CY7,符合 SCAPs 的鉴定特征,为后续的实验提供实验细胞。第二部分:人SCAPs矿化过程中GNAI3的表达,GNAI3敲低对SCAPs增殖、成牙/成骨分化的影响。人SCAPs矿化诱导0,3,7,14天,通过Western Blotting检测矿化诱导后3天GNAI3蛋白表达显着上调,诱导7天达到峰值(P<0.01),表明GNAI3可能在SCAPs矿化过程中起着重要作用。我们采用低表达慢病毒颗粒GFP LV-3[pGLVH1/绿色荧光蛋白(GFP)+Puro]持续地敲低SCAPs中GNAI3表达并通过Western Blotting验证敲低效率(P<0.01)。我们通过CCK8实验、流式细胞仪分析和细胞划痕实验进一步发现GNAI3低表达抑制SCAPs的增殖(P<0.01)、细胞周期(P<0.05)、12小时和24小时迁移(P<0.01)等细胞生物活动,但细胞坏死和凋亡没有显着影响。通过碱性磷酸酶ALP染色(P<0.01)、茜素红ARS染色(P<0.01)检测SCAPs的矿化程度,通过qPCR检测成牙/成骨特异性指标的 mRNA 水平,包括 DMPI(P<0.01)、DSPP(P<0.05)、OCN(P<0.01)、OPN(P<0.01)、OSX(P<0.05)和 RUNX2(P<0.01),通过 Western Blotting检测成牙/成骨特异性指标的蛋白水平,包括DSPP(P<0.01)、RUNX2(P<0.01)、OSX(P<0.01)、OPN(P<0.01)、OCN(P<0.05)和 BMP4(P<0.05),以上结果表明,GNAI3低表达抑制SCAPs成牙/成骨分化。第三部分:GNAI3通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路促进SCAPs矿化。转染了 shGNAI3的人SCAPs矿化诱导培养7天,通过 Western Blotting 检测发现低表达 GNAI3 的 SCAPs 中 p-JNK(P<0.01)、p-ERK(P<0.05)的蛋白表达显着降低,而p-p38的蛋白表达没有统计学差异,表明JNK和ERK,而不是p38,是GNAI3的下游靶标。人SCAPs矿化诱导培养0、3、7和14天,通过Western Blotting检测发现在SCAPs的成牙/成骨分化过程中,矿化诱导3天磷酸化JNK的表达显着上调,诱导7天达到峰值(P<0.01),此表达模式与GNAI3在SCAPs矿化过程中的表达模式高度相似,这提示我们GNAI3可能是通过MAPK-JNK通路来调控SCAPs的成牙/成骨分化。为了进一步探索JNK和ERK信号通路的作用,SCAPs分别加入JNK抑制剂SP600125和ERK抑制剂U0126。通过CCK8实验发现,在2-6天内表现为SCAPs明显的增殖抑制(SP600125 P<0.01;U0126 P<0.01)。通过流式细胞仪分析发现其细胞周期的变化,G1期阻滞(SP600125 P<0.01;U0126 P<0.01),G2期细胞减少(SP600125 P<0.05;U0126 P<0.05)和 S 期细胞减少(SP600125 P<0.05;U0126 P<0.01)。通过细胞划痕实验发现,12小时迁移能力抑制(SP600125 P<0.01;U0126 P<0.01),24 小时迁移能力抑制(SP600125 P<0.01;U0126 P<0.01)。十分重要的是,SCAPs加入JNK抑制剂SP600125和ERK抑制剂U0126与SCAPs低表达GNAI3在增殖、细胞周期、迁移的作用模式高度相似。总结:综上所述,这些结果表明GNAI3可能通过JNK和ERK信号传导途径促进SCAPs成牙/成骨分化,这将为牙髓牙本质修复再生和生物性牙根再生领域提供有利的新思路。
史聪翀[2](2019)在《BMP信号通路调节间充质干细胞对维持小鼠切牙内稳态机制的研究》文中提出[目 的]组织再生可以为修复人体组织器官缺损提供更优的策略,同时也面临更大的挑战。是否能实现与正常组织近似或相同的内稳态平衡是评价组织再生成功的标准之一。其中种子细胞的选择至关重要。间充质干细胞因其持续自我更新、多向分化潜能等方面的优异特性成为近年来研究的热点,其中牙间充质干细胞的成牙能力更具优势;同时因其易获得、易培养等优点,受到包括口腔医学研究者在内的多领域的关注。间充质干细胞通过一系列信号通路调控、维持组织器官内稳态的平衡。BMP信号通路已被证实在哺乳类动物牙胚发育阶段中发挥重要作用,但BMP信号通路在维持成年阶段牙体组织内稳态平衡中的作用仍不清楚。因此,本课题旨在利用至成年阶段仍保留间充质千细胞的小鼠切牙作为模型,探索BMP信号通路通过调控间充质干细胞以维持成年小鼠切牙内稳态中的作用机制,不仅有利于进一步阐明BMP信号通路的作用机制及间充质干细胞增殖分化等生物学特性,也为精确操纵间充质干细胞的定向分化,优化牙再生策略以及将来的临床应用等提供一些基础实验依据。[方 法]1.利用免疫荧光染色检测激活的BMP信号通路“指示剂”—pSmad1/5/9在成年小鼠切牙中是否有表达以及表达的模式,并运用谱系追踪的方法观察 pSmad1/5/9 在 Gli1+MSCs(Gli1+Mesenchymal Stem Cells,Gli1 阳性的间充质干细胞)、TACs(Transit Amplifying Cells,转运扩增细胞)及其子代细胞中是否有表达;2.运用Cre-LoxP重组系统构建Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl转基因小鼠,利用他莫昔芬诱导,敲除出生后1月龄Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl小鼠切牙Gli1+MSCs子代细胞中的Bmpr1a。采用Micro-CT、HE染色、免疫荧光染色及RNAscope原位杂交等方法检测是否成功敲除Bmpr1a,并观察实验组小鼠切牙颈环结构、成牙本质细胞、成釉细胞、小鼠切牙生长等变化;3.运用rtTA-tetoCre重组系统构建K14-rtTA;tetO-Cfre;Bmpr1afl/fl转基因小鼠,利用多西环素诱导,敲除出生后1月龄K14-rtTA;tetO-Cre;Bmpr1afl/fl小鼠切牙Gli1标记的上皮干细胞子代细胞中的Bmpr1a。采用Micro-CT、HE染色、免疫荧光染色及RNAscope原位杂交等方法观察实验组小鼠切牙颈环结构、成牙本质细胞、小鼠切牙近端牙本质等的改变,分别和对照组Bmpr1afl/fl及实验组Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl小鼠进行对比研究,进一步明确BMP信号通路通过调控间充质干细胞对成年小鼠切牙G1i1+MSCs增殖及分化的影响;4.采用免疫荧光染色、TUNEL分析、RNAscope原位杂交、RNAscope多重荧光染色、RT-PCR,Image J图像分析等方法研究BMP信号通路通过调控间充质干细胞影响成年小鼠切牙G1i1+MSCs增殖及分化的相关作用机制;5.构建 Glil-LacZ、Gli1-CreERT2;Gli1-LacZ、Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl;Gli1-LacZ、Glil-CreERT2;tdTomato、Glil-CreERT2;Bmprlafl/fl;tdTomato 多种转基因小鼠,采用免疫荧光染色法观察敲除成年小鼠切牙G1i1+MSCs子代细胞中的Bmpr1a后,对Gli1+MSCs分化速率以及对Glil+MSCs自身维持是否产生影响。[结 果]1.出生后1月龄对照组Bmpr1afl/fl小鼠切牙中激活的BMP信号(pSmad1/5/9阳性)主要表达在前成牙本质细胞/成牙本质细胞区以及牙髓,少量表达在TACs,不表达在G1i1+MSCs区。出生后1月龄对照组Bmpr1afl/fl小鼠切牙Ki67和pSmad1/5/9抗体的双重染色显示,pSmad1/5/9阳性信号与TACs在前成牙本质细胞/成牙本质细胞区出现共定位。谱系追踪结果显示,他莫昔芬诱导后第1天,G1i1+MSCs(tdTomato+)位于间充质干细胞龛,pSmad1/5/9在该区域不表达,二者之间未见共定位;他莫昔芬诱导后1周,G1i1+MSCs离开间充质干细胞龛,开始迁移到TACs区域,此时其子代细胞与pSmad1/5/9在前成牙本质细胞/成牙本质细胞区有共定位;他莫昔芬诱导后4周,随着Gli1+MSCs的子代细胞分化为成牙本质细胞和牙髓细胞,它们与pSmad1/5/9呈现广泛共定位。2.对实验组Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl和对照组Bmpr1afl/fl小鼠下颌骨进行Micro-CT扫描和三维重建结果显示,随着诱导时间延长,实验组小鼠切牙自近端向远端牙本质缺损范围扩大,提示BMP信号的丧失会影响Gli1+MSCs向成牙本质细胞的分化及牙本质的形成,最终影响切牙的生长。HE染色结果显示,用他莫昔芬对出生后1月龄Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl小鼠诱导4周后,其切牙颈环圆弧状结构消失,细胞排列紊乱,难以区分正常解剖层次,未见牙本质及牙釉质的形成:免疫荧光染色和RNAscope原位杂交结果也证实随着他莫昔芬诱导时间的延长,Amelx(Amelogenin,牙釉原蛋白)和 Dspp(Dentin sialophosphoprotein,牙本质涎磷蛋白)在Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl小鼠切牙中的表达由近端向远端减少;他莫昔芬诱导8周后,Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl;tdTomato小鼠牙髓组织严重紊乱,在牙髓腔中观察到异位软骨细胞,这种异位软骨细胞呈现Collagen Ⅱ阳性和tdTomato阳性,说明敲除Gli1+MSCs子代细胞中的Bmpr1a后,改变了Gli1+MSCs子代细胞的命运,使其由向成牙本质细胞分化转变为向软骨样细胞分化。3.用多西环素对出生后1月龄K14-rtTA;tetO-Cre;BmpBmpr1afl/fl转基因小鼠诱导4周后,CT扫描及三维重建结果显示小鼠切牙近端未见明显的牙本质缺损,长度也未见明显变短;HE染色结果显示,K14-rtTA;tetO-Cre;Bmpr1afl/fl小鼠颈环结构改变轻微,仍可见圆弧状结构,可区分外釉上皮和内釉上皮;RNAscope原位杂交结果显示,K14-rtTA;tetO-Cre;Bmpr1afl/fl小鼠切牙的前成牙本质细胞/成牙本质细胞区均可观察到Dspp 阳性信号,提示BMP信号通路主要通过调控Gli1+MSCs,而不是上皮干细胞来影响成牙本质细胞的分化及牙本质的形成。4.用他莫昔芬诱导出生后1月龄Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl小鼠1周后,和对照组Bmpr1afl/fl小鼠比较,Ki67信号在TACs区明显减少,而在前成牙本质细胞/成牙本质细胞区异位升高,凋亡信号没有明显变化。采用Axin2和Etv4作为“指示剂”,分析WNT和FGF信号通路在小鼠切牙中的表达。结果显示,在对照组Bmpr1afl/fl小鼠切牙中,Axin2和Etv4在TACs区高表达,而在前成牙本质细胞/成牙本质细胞区表达量很少;敲除Bmpr1a后,Axin2和Etv4在TACs区表达量明显减少,但在前成牙本质细胞/成牙本质细胞区异位升高,Wnt10a和Fgf3也出现相同的改变,RT-PCR分析也证实Axin2和Etv4的升高。Axin2和Etv4的改变和Ki67变化相同。提示在Glil+MSCs增殖分化的过程中,BMP信号通路拮抗WNT/FGF信号通路,在Gli1+MSCs增殖形成TACs的过程中,需要BMP信号通路的抑制,WNT/FGF信号通路的激活;TACs分化形成成牙本质细胞时,在前成牙本质细胞/成牙本质细胞区则需要WNT/FGF信号通路的抑制、BMP信号通路的激活。当敲除Bmpr1a后,BMP信号通路不能对WNT/FGF信号通路发挥拮抗作用,故在前成牙本质细胞/成牙本质细胞区出现Axin2和Etv4的异位升高,继而使Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl小鼠TACs保持异位增殖的状态而无法向成牙本质细胞分化,最终造成牙本质形成缺陷。这也体现了信号通路之间的层级关系,它们通过相互作用组成信号调控网络精密控制Gli1+MSCs的增殖与分化。5.敲除成年小鼠切牙Gli1+MSCs子代细胞中的Bmpr1a后,在Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl;Gli1-LacZ小鼠切牙中Gli1+MSCs数量明显减少;同时,用他莫昔芬诱导出生后1月龄Gli1-CreERT2;Bmpr1afl/fl;tdTomato小鼠两周后发现,在切牙远端Gli1+MSCs子代细胞数量较对照组减少,提示BMP信号的缺失使Gli1+MSCs分化速率减慢。综合以上实验结果提示,BMP信号的缺失不仅可以影响Gli1+MSCs的增殖及分化,还可反馈作用于Gli1+MSCs本身,使Gli1+MSC自身的维持受损,影响内稳态的平衡。[结 论]本研究探讨BMP信号通路调控间充质干细胞维持成年小鼠切牙内稳态平衡的重要作用及调控机制。利用他莫昔芬进行诱导,条件性敲除Gli1+MSCs子代细胞中的Bmpr1a,造成BMP信号通路的缺失,影响Gli1+MSCs的增殖及分化,改变Gli1+MSCs子代细胞的细胞命运,最终导致牙本质形成障碍和切牙生长受阻。此外,BMP信号通路作为一个关键的调控因素,与WNT/FGF通路组成信号网络,通过拮抗WNT/FGF信号通路调节Gli1+MSCs的增殖与分化。此外,在Gli1+MSCs子代细胞中BMP信号的缺失导致Gli1+MSCs自身数量的减少及向子代细胞分化速率减慢。这表明BMP信号通路不仅对Gli1+MSCs增殖及分化很重要,而且还可反馈作用于Gli1+MSCs本身,使Gli1+MSCs自身的维持受损。BMP信号通路通过作用于间充质干细胞在维持成年小鼠切牙内稳态的过程中发挥双重调控作用。
巴娇娇[3](2014)在《牙胚组织发育过程中成牙基因的表达变化》文中研究说明目的:比较DMP1、AMBN、Collagen-Ⅰ和DLX1在SD大鼠牙胚发育过程中mRNA相对表达量的差别,探究SD大鼠牙胚分化过程中,这些基因的相对表达量的变化,揭示阶段性表达模式,探索适合做组织工程牙的种子细胞。方法:取胚胎14天、17天的SD胎鼠及出生后第4天的SD乳鼠的牙胚组织,并把出生后第4天SD乳鼠的牙胚组织经体外培养后得到第1、3、6天的牙胚细胞均用实时定量PCR的方法检测成牙基因mRNA水平相对表达量的变化。结果:牙胚组织中的DMP1、 AMBN、Collagen-Ⅰ和DLX1mRNA相对表达量在出生后第4天及胚胎17天均高于胚胎14天,差异有统计学意义(P<0.05)。牙胚细胞中DMP1、AMBN、Collagen-Ⅰ基因mRNA的相对表达量在培养第3天均高于培养第1天及第6天,差异有统计学意义(P<0.05),而DLX1mRNA的相对表达量在培养第1天均高于培养第3天及第6天,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:出生后第4天的牙胚组织中四个成牙基因相对表达量较多可以作为种子细胞。在培养后第3天的牙胚细胞是增殖和分化较好的时期可以用于构建组织工程牙。
程敏[4](2008)在《牙发育过程中TGF-β1、BMP-2、bFGF和E-Cadherin的表达及相关技术研究》文中进行了进一步梳理目前国内外对牙发育调控机制的研究已由细胞水平深入到了分子水平。一些生物分子以不同的时空表达模式在分子水平对牙发育的过程进行调控,主要包括信号分子、信号分子受体和转录因子等。这些分子形成了调节牙发育的信号网络系统。学者们对该信号网络系统进行了较多的研究工作,然而迄今为止有关此调控的分子机制尚不十分清楚。对牙发育机制方面的研究,常选用动物牙胚作为研究器官发育、形态发生和细胞分化的经典模型。以往的研究多选用大鼠、小鼠和犬的牙胚作为实验模型,近年来逐渐有报道采用人牙胚作为研究对象,但报道较少。本实验分别收集了人牙胚、出生后乳鼠及犬乳恒牙替换期组织学标本,常规切片制片,对牙胚发生、发育过程作系统观察,采用免疫组织化学方法,研究TGF-β1、BMP-2、bFGF、E-Cadherin四种生物分子在牙胚发育过程中的时空表达模式及可能的调控机制。本研究结果表明;TGF-β1、BMP-2、bFGF、E-Cadherin在牙胚发育的不同时期均有不同程度的时空表达,且相互之间存在着一定的时间和空间上的一致性和种属之间的一致性。它们在牙胚发育的早期及晚期均有不同程度的表达,说明在牙冠、牙根及牙周组织的发育中均参与了牙胚组织细胞增殖、分化及硬组织的矿化,参与了牙胚发育的分子调控。同时,本文还对口腔硬组织切片和组织化学染色及其应用进行了研究。针对牙和骨骼硬脆致密,难切易碎,牙龈、牙周膜和牙髓易受损伤分离及常规切片所出现的问题,对制片技术和染色方法进行了改良。改良方法制作的牙齿、骨骼、牙及牙周组织切片和常规HE染色,镜检各种组织和细胞形态结构清晰,切片质量和染色效果优良。本研究弥补了国内目前尚无口腔硬组织切片组织化学染色的空白。目前,改良的组织化学染色法,已逐渐用于牙发育、骨折愈合、骨缺损修复、颞下颌关节损伤、腭裂、正畸、种植、口腔材料和药物等实验研究,并取得了满意结果。
杨振华[5](2008)在《微环境对牙周再生及相关间充质干细胞分化影响的研究》文中认为如何使由于牙周疾病而遭到破坏的牙周支持组织获得完全性再生,一直是国内外学者追求的目标和着力研究的热点课题。从发育生物学的角度,要达到牙周组织结构与功能的完全恢复,以下两个因素至关重要:即恰当的细胞类型、适宜的微环境,二者缺一不可。传统牙周组织工程中局部诱导微环境的建立,主要是通过支架材料或单因子诱导的方式来促进牙周间充质干细胞的分化。由于牙周再生的微环境异常复杂,涉及到上皮-间充质的相互作用以及多种生长因子的参与,单纯依靠支架材料或某几种生长因子等非生理诱导的方式局限性较明显。然而,牙周再生修复与正常牙周发育的相似性提示我们,可以通过复制牙周早期发育的进程从而获得牙周组织的完全再生。根端牙胚组织作为牙根/牙周发育的“器官始基”,理论上能够为牙周间充质干细胞提供类似发育期的微环境。因此,本研究拟建立发育期根端牙胚细胞与牙周膜干细胞/骨髓间充质干细胞的间接共培养体系(条件培养液),利用人工重组的发育期牙根/牙周组织微环境,促进牙周膜干细胞/骨髓间充质干细胞的分化;并在此基础上首次尝试利用一种全新的“无支架细胞聚合体”的三维构建体系,体内异位构建具有完整复合结构的牙周组织,以期为组织工程化牙周组织的临床应用(如牙周病的正畸治疗、自体牙移植等)探寻一条新的研究途径。所取得的主要研究结果如下:1、根端牙胚细胞诱导牙周再生相关间充质干细胞分化的实验为了验证根端牙胚细胞所提供的发育期牙根/牙周组织微环境是否适合成体牙周膜干细胞/骨髓间充质干细胞的增殖、分化,本实验建立了根端牙胚细胞与牙周膜干细胞/骨髓间充质干细胞的间接共培养体系,观察根端牙胚细胞对牙周膜干细胞/骨髓间充质干细胞生物学活性的影响。结果显示:根端牙胚细胞条件培养液中包含的多种促增殖、分化的可溶性信号分子,能够有效诱导牙周膜干细胞和骨髓间充质干细胞分别向功能性成牙骨质细胞谱系和成骨细胞谱系分化,并在体内分别异位形成牙周膜/牙骨质复合体样结构以及骨样结构。本研究的结果充分说明,我们所设想的在牙周组织工程中以牙周膜干细胞和骨髓间充质干细胞为种子细胞,利用牙根/牙周发育学的机理来指导完整复合牙周结构构建的策略是切实可行的。2、新型细胞聚合体的构建及应用于牙周组织工程的研究本研究在充分借鉴细胞膜片技术的基础上,提出了一种全新的“无支架细胞聚合体”的牙周组织三维构建策略:先构建细胞-基质膜片;而后利用膜片体外容易聚合成团的特性建立高密度细胞聚合体的三维立体培养体系;最后对具备一定强度和厚度的不同类型细胞聚合体体外进行修整、塑形和叠加,构建包含牙周膜、牙槽骨、牙骨质在内的完整复合牙周结构。利用包含抗坏血酸的α-MEM培养基,体外扩增培养的牙周膜干细胞/骨髓间充质干细胞紧密结合、分泌基质,形成了具备一定强度和可操作性的细胞聚合体。将其单独或与支架复合进行体内移植的结果显示:单独的牙周膜干细胞聚合体无法生成牙周膜/牙骨质复合体样结构;根端牙胚细胞条件培养液诱导后的骨髓间充质干细胞聚合体形成了骨样结构;而经过根端牙胚细胞培养液诱导的牙周膜干细胞聚合体分别与CBB和牙本质片重组后均形成了形态上更加排列有序的牙周膜/牙骨质复合体样结构;牙周膜干细胞/骨髓间充质干细胞聚合体与牙本质片的重组体未能构建出完整复合牙周结构。本研究的结果说明,牙周膜干细胞聚合体利用细胞自身分泌的生物活性因子和细胞外基质建立局部微环境,再辅以根端牙胚细胞提供的生长因子微环境,最大限度地模拟了牙周组织形成过程中类似上皮根鞘和基底膜的作用。实验虽然未能按照预期设计最终构建出包含牙周膜、牙骨质、牙槽骨在内的完整复合牙周结构,但却初步验证了我们的构建策略具有一定的可行性,继续对其进行改进、完善将是我们今后的研究重点。
孙汉堂,肖明振,吴补领[6](2004)在《肝细胞生长因子受体在大鼠牙胚发育中的表达及其意义》文中研究指明目的研究肝细胞生长因子受体(c-Met)在大鼠牙胚发育过程中的时空表达模式。方法用免疫组织化学方法,检测c-Met在大鼠牙胚发育不同阶段表达的位置。结果c-Met在牙胚发育的不同阶段表达于牙胚中特定的部位帽状期(胚胎15d),内釉上皮阳性表达,中间层及部分星网状层细胞弱阳性表达;钟状期(胚胎19d),内、外釉上皮阳性表达,但内釉上皮较外釉上皮表达弱,中间层及星网状层细胞弱阳性表达;矿化期(生后7d),成牙本质细胞阳性表达。结论c-Met在大鼠牙胚发育过程中的表达具有时空特异性,在牙齿形态发生的过程中具有重要的作用,还可能与牙齿的矿化有关。
邢向辉[7](2005)在《大鼠牙根发育模式相关基因的筛选及部分基因功能的研究》文中研究表明牙齿的发育研究可以为牙齿再生及牙齿先天发育异常提供理论依据,同时牙齿发育也是发育生物学中器官发育形成的一个典型模型。目前牙齿早期发育研究较多,但后期的发育,特别是牙根发育相关基因研究较少。牙齿发育是口腔上皮组织与间充质组织相互作用的结果,牙根的发育与上皮根鞘有着密切关系,当牙冠发育即将完成之际上皮根鞘的形成揭开了牙根发育的序幕。本研究目的是利用大鼠下颌磨牙和切牙具有完全不同的牙根发育模式作为动物模型,对牙根发育相关的差异表达基因进行筛选并对部分差异基因的功能进行探讨,为牙根发育及牙根再生研究提供理论依据。 采用的方法及主要结果:本课题采用组织学、免疫组织化学、改良消减杂交技术、Northern blot、Western blot、RT-PCR、Real-time PCR、细胞培养、基因转染和RNA干扰等方法,进行了以下五部分实验研究: 第一部分 通过组织学观察大鼠下颌第一磨牙和下颌切牙的发育时序,结果发现胚胎18日(E18)大鼠磨牙和切牙发育开始出现差异,这种差异的表现是磨牙形成了双层细胞的上皮根鞘,开始启动牙根的发育,而切牙舌侧虽然也形成类似根鞘的结构,唇侧却仍然维持多层结构的颈环干细胞龛,始终未能启动牙根发育,仍旧保持牙冠的发育形式。 第二部分 实验1通过改良消减杂交技术,首次建立了大鼠牙根发育启动相关差异表达基因文库,文库总浓度约为1.5×104,经酶切鉴定含有500bp以上插入片段的克隆约为84%,表明所建立的基因文库质量较高,
周泽渊[8](2004)在《颌突外胚间充质干细胞的可塑性研究》文中提出外胚间充质是脊椎动物一个独特的结构,它包含了迁移来的颅神经嵴细胞及其衍生物。颅神经嵴细胞被认为具有最高的分化潜能,它可以分化成为神经和间充质两个胚层的组织,是一种具有多向分化潜能的干细胞。多年来通过对鸟类和哺乳动物体内、体外以及细胞水平的研究,对颅颌面部的发育和形成的神经嵴-外胚间充质的模式已经有了深入的了解。 在发育过程中,颅神经嵴细胞经历了三个主要步骤:从神经外胚层迁移至咽弓;在外胚间充质中增殖;最后分化成为颅颌面部的大部分组织。迁移的神经嵴细胞与周围组织的细胞相互作用,经历了一个从上皮到间充质表型的转化过程。以前研究认为神经嵴细胞的分化逐渐受到限制。然而1990年Baroffio等发现大约有2.6%的迁移的颅神经嵴细胞可以分化成神经和间充质两个胚层的许多衍生组织,提示迁移的细胞中包含具有多分化潜能性的颅神经嵴干细胞。目前还不清楚未分化的神经嵴干细胞迁移至外胚间充质后是否还存在,但是神经嵴是一个暂时性结构,而颅颌面部的大部分组织结构都由外胚间充质发育而来,提示外胚间充质也类似神经嵴是一个具有多分化潜能性的结构。因此,我们认为外胚间充质中包含迁移的神经嵴干细胞或其转化的干细胞-外胚间充质干细胞(Ecto-mesenchymal stem cell EMSC)。 第四军医大学博士学位论文 最近一些研究支持了这一观点,例如牙髓干细胞的发现,它存在于牙髓组织中,被认为来源于外胚间充质。另外一些研究显示神经峭干细胞迁移后仍然存在于它所迁移的组织中,一些时候它们的表型可以发生迅速改变。在周围神经系统中也存在神经峭干细胞,并且在体内可以自我更新。Labat等从长期培养的外周血单核细胞发现了一种神经晴来源的间充质干细胞,这种细胞同时表达神经外胚层和中胚层的标志,说明外胚间充质干细胞可能在体内长期存在。尽管许多证据显示EMSC的存在,但是目前对它的研究较少,还没有进行系统的鉴定和分离。 本研究旨在分离外胚间充质干细胞,并研究其可塑性。主要研究的内容和结果如下:1领突外胚间充质细胞的形态及表型鉴定1.1领突外胚间充质细胞的形态学研究 分离胚胎为E12.5 SD大鼠胚胎领突组织,制备电镜标本,观察外胚间充质细胞的超微结构。结果显示外胚间充质细胞主要为间充质样细胞,形状不规则,呈多突起的星形或梭形,突起不规则;核、浆比例大;核仁明显,大、靠边;常染色质多,异染色质少;高倍电镜显示细胞内部有大量的线粒体、少量粗面内质网和核糖体:未发现其它成熟己分化细胞,例如:脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞以及神经肌肉组织细胞及其超微结构特征,因此结果表明外胚间充质细胞代谢旺盛,增殖活性高,处于未分化状态。1.2领突外胚间充质细胞的表型鉴定 分离胚胎为E12.5 SD大鼠胚胎领突组织,制备石蜡标本,免疫组化鉴定外胚间充质细胞的分子表达。组织化学染色显示大部分领突间充质细胞表达神经峭干细胞的标志低亲和力神经生长因子受体LNGFR,Nestin,和人自然杀伤标志HNK一1,提示外胚间充质中存在表达神经峭干细胞标志的细胞。同时,外第四军医大学博士学位论文胚间充质细胞表达S一100,波形丝蛋白Vimtine,但不表达成熟细胞的标志。S一100是神经胶质前体细胞和神经峭来源的间充质前体细胞的标志,但是在中胚层来源的间充质细胞中不表达,说明外胚间充质细胞是一种幼稚的未分化细胞,并且来源于神经峭。结果说明外胚间充质中存在着迁移的神经峭干细胞或其转化的干细胞,我们称之为外胚间充质干细胞。2领突外胚间充质干细胞的分化研究2.1磁珠分离领突外胚间充质干细胞 采用差异消化贴壁法分离和纯化培养SD大鼠领突外胚间充质细胞;利用磁珠技术分离具有神经靖干细胞标志一LNFGR的外胚间充质干细胞,倒置显微镜观察细胞生长特性;利用免疫荧光双标技术鉴定分离的细胞。结果显示磁珠分离的外胚间充质细胞呈成纤维细胞样细胞生长,状态稳定;免疫荧光结果显示磁珠分离的LNGFR十的细胞共表达神经峭干细胞的其它标志Nestin和HNK一1,结果说明成功分离了LNGFR+的外胚间充质干细胞,为下一步研究打下了良好的基础。2.2诱导领突外胚间充质干细胞向骨骼肌细胞分化 利用DMSO诱导外胚间充质干细胞分化,通过免疫组化和RT一尸CR鉴定,以大鼠成纤维细胞作为对照。结果显示外胚间充质干细胞经DMSO诱导后,细胞形态发生变化,细胞明显变大、变扁平,开始有管状排列现象,细胞与细胞之间互相融合,即成为肌管细胞,此时细胞内有数个细胞核象串珠样排列在细胞中央;免疫组化结果说明诱导的外胚间充质干细胞表达骨骼肌细胞的标志Desmin;RT一PCR鉴定结果显示诱导的外胚间充质干细胞表达成肌细胞特异标志一Myod mRNA。而对照组细胞形态未出现变化,也无骨骼肌细胞标志表达。以上说明外胚间充质干细胞被DMSO诱导成为骨骼肌细胞。2.3诱导领突外胚间充质干细胞向成骨细胞分化 第四军医大学博士学位论文 利用矿化液诱导外胚间充质干细胞分
余擎[9](2002)在《核心结合因子a1在牙齿发育矿化中作用机制的研究》文中指出牙齿的发育矿化是上皮和间充质相互作用的结果,研究表明,众多的基因参与了牙齿的发育矿化过程,包括生长因子及其受体、信号分子、转录因子和细胞外基质蛋白等。转录因子是一类可以通过与下游靶DNA结合,从而调控下游基因转录的分子,它们接受来自生长因子等方面的信号,再将这些指令具体地传递给直接执行功能的蛋白分子。cbfal是一种成骨分化特异性转录因子,可以诱导成骨前体细胞合成和分泌ALP、OC、OPN、BSP等矿化相关蛋白,向成骨细胞分化。最近国外学者发现cbfa1在牙齿发育过程有表达;基因敲出的小鼠不仅全身骨发育异常,还出现牙齿发育障碍,而且牙齿特异的成釉蛋白基因的启动子上也发现了cbfa1结合位点。本课题采用细胞培养、PCR、基因重组、基因转染、免疫组织化学、反义核酸等方法研究cbfa1在牙齿发育矿化中的作用,在牙乳头细胞中探讨几种生长因子对cbfa1的作用以及cbfa1对矿化相关基因转录的调控,从而在转录水平阐明牙齿发育矿化的分子调控机制,为进一步研究奠定基础。 首先我们从小鼠牙胚组织中成功地克隆到了小鼠cbfa1全部编码区,约1.7kb,进一步证实了cbfa1在牙胚组织中的存在;根据cbfa1的基因结构和读框,我们选取了其中一个含有部分runt结构域和核定位信号的约204bp的基因片段,采用基因重组的方法成功地构建了原核表达载体pRSETA-cbfa1(204),并通过对T7启动子有较好效果的大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,结果获得了预计的约14KD的cbfa1融合蛋白,并用Ni-NTA柱亲和层析进行了初步纯化;纯化的cbfa1融合蛋白免疫新西兰大白兔,获得了滴度为1/28的多克隆抗体,采用免疫组织化学和western blot的方法证明了所制备的抗体是成功的,效价分别为1:400和1:1000,为进一步的研究奠定了物质基础。 第四军医大学博士学位论文4 随后我们采用自行制备的抗体对牙胚组织和体外培养的人牙乳头细胞进 行了免疫组织化学研究,发现:cbfal在帽状期牙胚中表达于内釉上皮、外釉 上皮、牙胚间充质和牙囊;在钟状早、中期牙胚,Cbfal表达于内釉细胞、成 釉细胞以及紧靠成牙本质细胞层的牙乳头细胞,在牙槽骨中呈强阳性表达:钟 状晚期,成牙本质细胞和成釉细胞分泌牙本质和牙釉质基质,。bfal在牙乳头 表达为阴性,成牙本质细胞层弱阳性,成釉细胞为阳性或强阳性,牙囊中成骨 细胞强阳性表达,牙囊细胞弱阳性表达。表明。bfal参与了牙胚发育过程,尤 其是在成牙本质细胞和成釉细胞分化中可能起着重要作用。体外研究表明,体 外培养的人牙乳头细胞没有。bfal基因和蛋白的表达,当采用脂质体法瞬时转 染构建的真核重组质粒pGDNA3七 后,细胞中出现了Cbfal基因和蛋白的 表达,为进一步稳定转染作好了准备。 由于体外培养的人牙乳头细胞不表达。bfal,而体内牙乳头细胞的表达出 现在紧邻成牙本质细胞层的下方,于是我们设计了体外稳定转染。bfal基因的 实验。将以构建好的含全部编码区的真核表达重组质粒PCDNA3七,用脂 质体介导转染牙乳头细胞,并用 G4进行多次筛选,获得了 3个抗性克隆, 经过基因水平和蛋白水平多种方法的验证,鉴定出1个抗性克隆能稳定表达 。bfal基因和蛋白,并对其进行了一系列研究。结果表明:转染cbfal基因后 牙乳头细胞的增殖能力减弱,而与矿化相关的有关指标增高,如。AMP:ALP。 OC等。Cbfal不仅可以上调ALP和OC的活性,还能诱导OPN、BSP、ON 和DMPI这些矿化相关蛋白的表达,但对牙本质特异性蛋白DSP的表达和其 编码基因DSPP无明显作用,对1型胶原的表达量也有所增加,但经图像分析 和统计学处理无显着性差异。这些结果表明,牙乳头细胞也是cbfal作用的靶 细胞,Cbfal可以诱导牙乳头细胞表达矿化相关的基因和蛋白,提示Cbfal在 牙乳头细胞分化为成牙本质细胞中起着非常关键的作用。 为了探讨几种生长因子对牙乳头细胞中。bfal的作用,我们采用RT-PCR、 WestCm blot和免疫组织化学的方法观察 BMPZ、TGF p;、FGFZ和 EGF四种生 D叩。tment Of印e。t。e De。t。时and砌咖加n闲J 风WU 第四军医大学博土学位论文5 长因子在牙乳头细胞中对cbfal基因表达、蛋白合成和蛋白表达部位的影响。 结果表明:200ng/llil BMPZ和 50gb的FGFZ刺激正常人牙乳头细胞6h后 cbfal的表达明显升高,而 20ng/llil和 40n归的 TGF p;作用 12 h能抑制稳定 转染Cbfal基因的细胞中cbfal InRNA的表达;EGF则对牙乳头细胞中Cbfal 的表达没有显着影响。
刘军[10](1998)在《神经生长因子和神经肽对牙乳头间充质细胞和牙胚生长、分化影响的体外实验研究》文中研究表明牙胚的发育涉及到一个十分复杂的过程,包括上皮与间充质问有序的相互作用,生长因子之间及其与细胞外基质成分之间的相互作用等过程,在上述因素的联合作用下,牙胚发育至一定阶段出现分泌釉基质和牙本质基质的成釉细胞和成牙本质细胞的分化。随着分子生物学和基因技术的飞速发展,对牙胚发育尤其是成牙本质细胞分化过程的研究已进入分子机理和基因调控的水平。目前,一些神经源性的因素在非神经系统的生物学效应已受到广泛重视。神经生长因子的研究就经历了从周围神经系统进入中枢神经系统,继而扩展至非神经系统3个发展阶段。与其它生长因子一样,神经生长因子也是一个多功能的生长因子,二者之间已无明显界限。神经生长因子和间充质源性的速激肽在牙胚发育不同阶段的表达,提示其与牙胚的生长、分化密切相关。本研究通过牙乳头间充质细胞和牙胚的体外培养,从细胞和分子水平探讨了神经生长因子和神经肽对牙乳头间充质细胞和牙胚生长、分化的影响。实验分为3个部分:1.神经生长因子和神经肽对体外培养的人牙乳头间充质细胞的生物学效应;2.神经肽在人正常牙髓成牙本质细胞层分布的免疫组化研究;3.神经生长因子和神经肽与大鼠牙胚生长、分化关系的研究。 1 神经生长因子和神经肽对体外培养的人牙乳头间充质细胞的生物学效应 采用组织块法培养了人牙乳头间充质细胞,ABC免疫组化染色,细胞呈波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性,提示细胞来源于外胚间叶组织。采用3H-TdR掺入法检测不同浓度的SP、CGRP和NGF对培养的第4代人牙乳头间充质
二、肝细胞生长因子受体在大鼠牙胚发育中的表达及其意义(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝细胞生长因子受体在大鼠牙胚发育中的表达及其意义(论文提纲范文)
(1)鸟嘌呤核苷酸结合蛋白3通过JNK和ERK信号通路促进根尖牙乳头干细胞的成牙/成骨分化(论文提纲范文)
中英文缩略词表 |
中文摘要 |
Abstract |
前言 |
第一部分 小鼠根尖CNAI3的表达,人SCAPs的培养、鉴定 |
前言 |
1. 材料 |
2. 方法 |
3. 结果 |
4. 讨论 |
5. 总结 |
第二部分 人SCAPs矿化过程中GNAI3的表达,GNAI3敲低对SCAPs增殖、成牙/成骨分化的影响 |
前言 |
1. 材料 |
2. 方法 |
3. 结果 |
4. 讨论 |
5. 总结 |
第三部分 CNAI3通过MAPK通路促进SCAPs矿化 |
前言 |
1. 材料 |
2. 方法 |
3. 结果 |
4. 讨论 |
5. 总结 |
参考文献 |
综述 口腔来源的干细胞及其临床应用 |
参考文献 |
个人简历 |
致谢 |
(2)BMP信号通路调节间充质干细胞对维持小鼠切牙内稳态机制的研究(论文提纲范文)
缩略词表 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
第一部分 BMP信号通路在成年小鼠切牙中表达的研究 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
第二部分 敲除Gli1+MSCs子代细胞Bmpr1a对成年小鼠切牙组织学及形态学影响的实验研究 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
第三部分 敲除Gli1+上皮干细胞子代细胞Bmpr1a对成年小鼠切牙组织学及形态学影响的实验研究 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
第四部分 BMP信号通路调控成年小鼠切牙Gli1+MSCs增殖及分化的机制研究 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
第五部分 敲除Gli1+MSCs子代细胞Bmpr1a对成年小鼠切牙Gli1+MSCs自身维持的影响 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
参考文献 |
全文总结 |
综述 BMP信号通路与牙发育及牙再生的研究进展 |
参考文献 |
攻读学位期间获得的学术成果 |
致谢 |
(3)牙胚组织发育过程中成牙基因的表达变化(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
前言 |
研究内容与方法 |
1 研究对象 |
2 材料和仪器 |
2.1 细菌 |
2.2 培养基的配制 |
2.3 主要实验试剂、仪器及耗材 |
2.4 主要试剂的配制 |
3 实验方法与步骤 |
3.1 聚合酶连反应检测DMP1、AMBN、Collagen-I、DLX1、β-actin |
3.2 实时荧光定量PCR检测DMP1、AMBN、Collagen-I、DLX1、β-actin |
4 质量控制 |
5 统计方法 |
6 技术路线图 |
结果 |
讨论 |
小结 |
致谢 |
参考文献 |
附录 |
综述 |
参考文献 |
攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
导师评阅表 |
(4)牙发育过程中TGF-β1、BMP-2、bFGF和E-Cadherin的表达及相关技术研究(论文提纲范文)
提要 |
前言 |
第一章 文献综述 |
第一节 牙发育的生物学过程 |
第二节 牙发育中上皮—间充质的相互作用 |
第三节 牙发育的分子调控机制 |
第二章 实验研究 |
实验一 牙发育的各阶段形态与 TGF-β1表达及其意义 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
实验二 BMP-2在牙发育各阶段的表达及意义 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
实验三 bFGF在牙发育各阶段的表达及意义 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
实验四 E-Cadherin在牙发育各阶段的表达及意义 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
小结 |
实验五 口腔硬组织切片和组织化学染色及其应用研究 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
参考文献 |
攻博期间发表的论文、科研及获奖情况 |
中文摘要 |
Abstract |
致谢 |
(5)微环境对牙周再生及相关间充质干细胞分化影响的研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
文献回顾 牙周组织再生发育的研究进展 |
第一部分 根端牙胚细胞诱导牙周再生相关间充质干细胞分化的实验 |
实验一 根端牙胚细胞条件培养液诱导牙周膜干细胞分化的实验 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
实验二 根端牙胚细胞条件培养液诱导骨髓间充质干细胞分化的实验 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
第二部分 新型细胞聚合体的构建及应用于牙周组织工程的研究 |
实验一 新型细胞聚合体的体外构建 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
实验二 应用细胞聚合体异位构建复合牙周结构的实验研究 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
全文总结 |
参考文献 |
附图 |
个人简历和研究成果 |
致谢 |
(7)大鼠牙根发育模式相关基因的筛选及部分基因功能的研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
文献回顾 |
一.发育模式形成机制与牙齿发育机制研究进展 |
二.差异表达基因的筛选技术和RNA干扰在基因功能研究中的应用研究进展 |
实验部分 |
第一部分 大鼠上皮根鞘发育时序的组织学研究 |
第二部分 大鼠牙根发育模式相关基因的克隆及筛选 |
实验1 大鼠牙根发育模式相关基因消减文库的建立 |
实验2 大鼠牙根发育模式相关基因消减文库的鉴定和筛选 |
第三部分 差异新基因Mrpl的组织表达研究、结构分析及原核表达载体构建 |
实验1 Mrpl基因组织表达谱研究及结构分析 |
实验2 大鼠Mrpl基因原核表达载体的构建 |
第四部分 差异基因NfiC在磨牙胚组织选择性剪接体的克隆 |
第五部分 差异基因Sel1L在牙齿发育中表达及功能研究 |
实验1 Sel1L在牙胚发育及体外培养牙胚细胞中表达的研究 |
实验2 Sel1L基因RNAi载体的构建及转染牙胚细胞的研究 |
实验3 Sel1L干扰后牙胚细胞的增殖、凋亡检测及对Hes1、Smad4及DSPP表达的影响 |
全文总结 |
展望 |
个人简历和研究成果 |
致谢 |
附图 |
(8)颌突外胚间充质干细胞的可塑性研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言和文献回顾 |
正文 |
第一部分 颌突外胚间充质细胞的形态及表型鉴定 |
实验一 颌突外胚间充质细胞的形态学研究 |
实验二 颌突外胚间充质细胞的表型鉴定 |
第二部分 颌突外胚间充质干细胞的分化研究 |
实验一 磁珠分离颌突外胚间充质干细胞 |
实验二 诱导颌突外胚间充质干细胞向骨骼肌细胞分化 |
实验三 诱导颌突外胚间充质干细胞向成骨细胞分化 |
第三部分 颌突外胚间充质干细胞在组织损伤修复再生中的作用 |
实验一 颌突外胚间充质干细胞参与牙胚发育的研究 |
实验二 颌突外胚间充质千细胞参与肌肉缺损修复的作用 |
实验三 颌突外胚间充质干细胞参与颅骨缺损修复的作用 |
实验四 颌突外胚间充质干细胞参与根尖缺损修复的作用 |
全文总结 |
附图 |
附图解释 |
个人简历和研究成果 |
致谢 |
(9)核心结合因子a1在牙齿发育矿化中作用机制的研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
文献回顾 |
综述一 牙胚发生和形成的分子机制 |
综述二 成牙本质细胞分化的分子机制 |
综述三 核心结合因子a1的研究进展 |
研究内容 |
第一部分 核心结合因子a1的cDNA克隆、蛋白表达和多克隆抗体的制备 |
实验一 小鼠核心结合因子a1成熟肽编码区的cDNA克隆及序列分析 |
实验二 小鼠核心结合因子a1部分编码区在大肠杆菌中的表达和纯化 |
实验三 小鼠核心结合因子a1多克隆抗体的制备和鉴定 |
第二部分 核心结合因子a1在牙齿组织和细胞中的表达 |
实验一 核心结合因子a1在牙胚发育过程中的表达 |
实验二 核心结合因子a1在人牙乳头细胞中的免疫组织化学研究 |
第三部分 核心结合因子a1对牙乳头细胞作用机制的研究 |
实验一 稳定表达核心结合因子a1的人牙乳头细胞模型的建立和鉴定 |
实验二 核心结合因子a1对牙乳头细胞增殖和矿化能力的影响 |
实验三 核心结合因子a1对牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白的影响 |
第四部分 几种生长因子对核心结合因子a1的调控机制 |
实验一 几种生长因子对体外培养的牙乳头细胞表达核心结合因子a1的研究 |
实验二 核心结合因子a1在BMP_2调控细胞外基质蛋白表达中的作用 |
全文总结 |
展望 |
致谢 |
课题完成所在实验室情况 |
简历 |
参考文献 |
附图 |
(10)神经生长因子和神经肽对牙乳头间充质细胞和牙胚生长、分化影响的体外实验研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
第一部分: 神经生长因子和神经肽对体外培养的人牙乳头间充质细胞的生物学效应 |
实验一 神经生长因子和神经肽对人牙乳头间充质细胞增殖和细胞周期的影响 |
实验二 神经生长因子和神经肽对人牙乳头间充质细胞ALP活性的影响 |
第二部分: 神经肽在人正常牙髓成牙本质细胞层分布的免疫组化研究 |
第三部分: 神经生长因子和神经肽与大鼠牙胚生长、分化关系的研究 |
实验一 神经生长因子和神经肽对体外大鼠牙胚生长、分化影响的组织学观察 |
实验二 反转录多聚酶链反应检测大鼠牙胚中牙本质涎蛋白mRNA的表达 |
结论 |
文献综述 |
综述一 牙胚发育的神经源性调节 |
综述二 神经生长因子研究进展 |
致谢 |
简历 |
附图 |
四、肝细胞生长因子受体在大鼠牙胚发育中的表达及其意义(论文参考文献)
- [1]鸟嘌呤核苷酸结合蛋白3通过JNK和ERK信号通路促进根尖牙乳头干细胞的成牙/成骨分化[D]. 张阳. 南京医科大学, 2019(04)
- [2]BMP信号通路调节间充质干细胞对维持小鼠切牙内稳态机制的研究[D]. 史聪翀. 昆明医科大学, 2019(02)
- [3]牙胚组织发育过程中成牙基因的表达变化[D]. 巴娇娇. 新疆医科大学, 2014(02)
- [4]牙发育过程中TGF-β1、BMP-2、bFGF和E-Cadherin的表达及相关技术研究[D]. 程敏. 吉林大学, 2008(11)
- [5]微环境对牙周再生及相关间充质干细胞分化影响的研究[D]. 杨振华. 第四军医大学, 2008(02)
- [6]肝细胞生长因子受体在大鼠牙胚发育中的表达及其意义[J]. 孙汉堂,肖明振,吴补领. 牙体牙髓牙周病学杂志, 2004(12)
- [7]大鼠牙根发育模式相关基因的筛选及部分基因功能的研究[D]. 邢向辉. 第四军医大学, 2005(06)
- [8]颌突外胚间充质干细胞的可塑性研究[D]. 周泽渊. 第四军医大学, 2004(04)
- [9]核心结合因子a1在牙齿发育矿化中作用机制的研究[D]. 余擎. 第四军医大学, 2002(02)
- [10]神经生长因子和神经肽对牙乳头间充质细胞和牙胚生长、分化影响的体外实验研究[D]. 刘军. 第四军医大学, 1998(02)