一、高血压心肌纤维化的影响因素和药物逆转（论文文献综述）
董菲[1]（2021）在《芪参六味方对自发性高血压大鼠心肌纤维化作用机制的探讨》文中研究说明背景:长期和持续的高血压导致心脏压力负荷增加,引起心肌细胞结构和功能障碍,使心肌顺应性下降,出现心肌纤维化,心脏舒张功能异常。心肌纤维化是高血压性心脏病的临床演变中重要病理特征。如何在副作用最小化下防治高血压心肌纤维化是目前乃至今后心血管研究的重大课题,而中医药研究有可能是解决问题的一种思路。芪参六味方是根据气血理论及高血压的病机所创立的复方,具有补益肝肾,益气活血化瘀的功效,课题组前期研究表明其可改善高血压患者左心室舒张功能,降低左室舒张末期内径,能够有效抑制心室重塑。而心肌纤维化是心脏舒张功能障碍的重要过程之一。因此,本研究使用芪参六味方干预自发性高血压导致的心肌纤维化大鼠,探讨其可能机制。目的:观察芪参六味方对自发性高血压大鼠所诱导的心肌纤维化的干预作用,并探讨其可能机制。方法:将30只20周龄的雄性SHR大鼠及WKY大鼠分为模型组、芪参六味方低浓度组、高浓度组、西药组,同龄雄性WKY大鼠为对照组;各组大鼠适应性喂养1周后,各给药组灌胃给药12周,SHR和对照组分别给与等体积无菌蒸馏水。干预12周,测量大鼠血压、超声心动。后处死全部动物,取出其心脏并称重,计算大鼠心质量指数。采用HE染色观察大鼠左心室形态;采用Masson染色观察心肌胶原纤维的含量;采用天狼猩红染色观察Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的比例;Western blot法检测各组大鼠左心室组织中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、Smad2、Smad3 以及 CD31、VE-Cadherin 蛋白的表达、间质细胞标志 α-SMA、FSP1 和 β-catenin、Snail、Notch ICD蛋白的表达;Real-Time RT-PCR法检测各组大鼠左心室组织中Collagen Ⅰ、CollagenⅢ、MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、Smad2、Smad3、β-catenin、Snail、Notch mRNA 的表达和内皮细胞标志物CD31、VE-Cadherin mRNA表达、间质细胞标志α-SMA、FSP1 mRNA的表达。结果:1.血压:给药12周后,与对照组相比,32周龄模型组大鼠收缩压显着上升（P<0.05）,与模型组相比,高浓度组、西药组大鼠的收缩压明显下降（P<0.05）,低浓度组与模型组差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比,模型组大鼠的舒张压升高,中药低浓度组、中药高浓度组、西药组舒张压均显着低于模型组（P<0.05）。2.超声心动:与对照组相比,32周龄SHR大鼠的射血分数和短轴收缩率均无明显的统计学差异（P<0.05）;与SHR大鼠相比,中药低浓度组、中药高浓度组、西药组射血分数及短轴收缩率无明显统计学差异（P>0.05）。与对照组相比,模型组大鼠E/E’明显升高（P<0.05）;与SHR大鼠相比,中药高浓度组与西药组E/E’明显下降（P<0.05）。3.心脏质量指数:与对照组大鼠相比,模型组心质量指数明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05;与模型组大鼠相比,高浓度组、西药组的比值明显降低（P<0.05）。4.HE染色可见:对照组大鼠内膜光滑,心肌细胞排列整齐,结构正常。模型组心肌细胞增生肥大,排列紊乱,边界模糊。与模型组相比,西药组大鼠给药后心肌细胞肥大增生较轻,血管内平滑肌细胞排列较整齐,血管细胞结构较清晰。心肌细胞直径结果显示:各组间均无明显统计学差异（P>0.05）。5.Masson染色结果显示,与对照组相比,模型组蓝色区域明显扩大,且心肌肌束间隙变大,在心肌细胞间质中可见明显的纤维化改变,且伴有严重的胶原沉积。与模型组相比,各干预组心肌纤维化程度明显减轻,胶原含量减少。胶原纤维比例结果显示:与对照组相比,模型组胶原纤维面积百分比明显增加（P<0.01）;与模型组相比,高浓度组、西药组胶原纤维面积显着减小（p<0.01）,低浓度组统计学无显着差异（P>0.05）。6.苦味酸天狼猩红染色结果显示:对照组大鼠心肌胶原纤维分布正常,排列整齐,清晰均匀,而模型组大鼠心肌间质胶原纤维分布明显增多,排列紊乱,可见明显互相交错的网状胶原纤维。与模型组相比,中药低浓度组、高浓度组、西药组心肌胶原纤维数量明显减少,其中高浓度组、西药组心肌纤维化程度最轻。Ⅰ型胶原/Ⅲ型胶原纤维结果可见:与对照组相比,模型组比值明显增加（P<0.01）;与模型组大鼠相比,中药高浓度组、西药组比值降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,而低浓度组无明显差异（P>0.05）。7.Western blot 结果:7.1 Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原蛋白表达:结果显示,与对照组相比,在模型组大鼠左心室组织中的Collagen Ⅰ及CollagenⅢ蛋白表达含量明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组大鼠相比,中药组、西药组Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ表达含量均明显下降,具有显着统计学差异（P<0.01）。7.2 MMP-9及TIMP-1蛋白表达:结果显示,与对照组相比,模型组大鼠的MMP-9蛋白表达含量明显升高（P<0.01）,同时TIMP-1蛋白的表达含量明显下降（P<0.01）,差异具有统计学意义。与模型组大鼠相比,西药组、中药高浓度组MMP-9蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,西药组TIMP-1的蛋白表达水平显着升高（P<0.05）,而中药高浓度组TIMP-1的表达含量无明显差异（P>0.05）。7.3大鼠左心室中内皮细胞标志CD31、VE-Cadherin蛋白表达及间质细胞标志α-SMA、FSP1蛋白表达:结果显示,与对照组大鼠相比,模型组大鼠FSP1、α-SMA mRNA表达增加（P<0.05）,VE-Cadherin mRNA表达降低（P<0.01）,差异具有统计学意义;与SHR 大鼠相比,西药组 FSP1、α-SMA mRNA 降低（P<0.05）,VE-Cadherin mRNA 表达显着增高（P<0.01）。高浓度芪参六味方组α-SMA mRNA显着降低（P<0.01）,VE-Cadherin mRNA表达显着增高（P<0.01）,高浓度芪参六味方FSP1 mRNA无明显统计学差异。各组间CD31mRNA表达无明显差异（P>0.05）。7.4大鼠TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达:结果显示,与对照组相比,模型组大鼠心肌组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平均明显上调（P<0.05）;与模型组大鼠相比,中药组的SHR大鼠左心室组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白的表达含量均明显下降（P<0.01）,西药组的SHR大鼠心肌组织中Smad2、Smad3蛋白的表达含量均下降（P<0.05）,西药组大鼠左心室组织中TGF-β 1的含量无明显差异（P>0.05）。7.5大鼠左心室中β-catenin蛋白、Snail蛋白表达:结果显示,与对照组相比,模型组大鼠心肌组织中β-catenin蛋白、Snail蛋白的表达水平均显着升高（P<0.05）;与模型组大鼠相比,中药组大鼠心肌组织中的β-catenin蛋白、Snail蛋白含量均下降（P<0.05）,西药组SHR大鼠心肌组织中的β-catenin蛋白、Snail蛋白均无明显差异（P>0.05）。7.6大鼠左心室中Notch ICD蛋白的表达:结果显示,与对照组相比,模型组大鼠心肌组织中Notch ICD蛋白的表达水平显着升高（P<0.05）;与模型组大鼠相比,中药组大鼠心肌组织中Notch ICD蛋白表达含量明显下降（P<0.01）,西药组大鼠心肌组织中的含量降低（P<0.05）。8.Real-Time RT-PCR 结果:8.1 Collagen Ⅰ、CollagenⅢmRNA表达:与对照组相比较,模型组大鼠左心室Collagen Ⅰ、CollagenⅢmRNA水平明显上调（P<0.05）;与模型组相比,中药组及西药组左心室Collagen Ⅰ mRNA水平下调（P<0.05）,各干预组Collagen Ⅲ mRNA表达水平均无明显差异。8.2左心室MMP-9、TIMP-1 mRNA表达:与对照组相比,模型组大鼠左心组织中MMP-9 mRNA表达增高（P<0.05）;与模型组相比,中药高浓度组、西药组MMP-9mRNA表达均降低（P<0.05）。各组间TIMP-1 mRNA水平均无明显差异（P>0.05）。8.3大鼠左心室中内皮细胞标志CD31、VE-Cadherin mRNA表达及间质细胞标志α-SMA、FSP1的mRNA表达:与对照组大鼠相比,模型组大鼠FSP1、α-SMA mRNA表达增加（P<0.05）,VE-Cadherin mRNA表达降低（P<0.01）,差异具有统计学意义;与SHR大鼠相比,西药组FSP1、α-SMA mRNA降低（P<0.05）,VE-Cadherin mRNA表达显着增高（P<0.01）。高浓度芪参六味方组α-SMA mRNA显着降低（P<0.01）,VE-Cadherin mRNA表达显着增高（P<0.01）,高浓度芪参六味方FSPlmRNA无统计学差异。各组间CD31mRNA表达无明显差异（P>0.05）。8.4大鼠左心室TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达:与对照组比较,模型组SHR大鼠左心室TGF-β1、Smad2mRNA表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组大鼠相比,中药组SHR大鼠左心室TGF-β1、Smad2 mRNA表达水平均下降（P<0.05）,西药组SHR大鼠左心室Smad2 mRNA降低（P<0.05）;各组大鼠间Smad3 mRNA表达无明显差异（P>0.05）。8.5大鼠左心室中内β-catenin蛋白、Snail蛋白的mRNA表达:与对照组大鼠相比,模型组大鼠左心组织中β-catenin、Snail mRNA的表达水平均显着升高（P<0.05）;与模型组大鼠相比,中药组及西药组大鼠心肌组织中的β-catenin、Snail mRNA均下降（P<0.05）。8.6大鼠左心室组织中Notch mRNA表达:与对照组相比,模型组SHR大鼠左心室Notch mRNA的表达水平明显增高（P<0.05）;与模型组SHR大鼠相比,中药组及西药组SHR大鼠左心室Notch mRNA的表达明显降低（P<0.01）。结论:芪参六味方能够降低SHR大鼠血压,改善心肌纤维化,从而改善SHR大鼠舒张功能。其作用机制可能与调控Notch信号通路,抑制TGF-β 1/Smads与Wnt/β-catenin信号通路,影响EndMT过程,进而改善MMPs/TIMPs比例,抑制胶原纤维的沉积有关。
梁荃[2]（2021）在《甲状旁腺激素与盐交互作用在左室肥厚中的作用及机制》文中认为研究背景 高盐摄入可促进肾脏尿钙排泄增多,进而刺激PTH合成和释放。左室肥厚是一种心室壁增厚、心肌重量增加和心肌重塑的变化。左室肥厚是心力衰竭发病的独立危险因素。既往研究发现高盐摄入、甲状旁腺功能亢进均可导致左室肥厚的发生,但两者之间是否存在交互作用共同影响左室肥厚的发生尚不明确。深入研究盐摄入水平、PTH干预及两者的交互作用对左室肥厚的影响,可为心力衰竭的防治提供新的靶点。目的 阐明PTH与盐交互作用在左室肥厚发生中的作用及可能机制,明确卡托普利干预能否阻断PTH持续刺激及过多盐摄入对左室肥厚的影响。方法 （1）8周龄雄性Sprague Dawley大鼠40只随机分成8组,分别为:假手术组、PTH组、低盐组（0.6%Na Cl）、高盐组（8%Na Cl）、PTH+低盐组（0.6%Na Cl）、PTH+高盐组（8%Na Cl）、PTH+低盐（0.6%Na Cl）+卡托普利组、PTH+高盐（8%Na Cl）+卡托普利组,每组5只大鼠。饲养环境一致,自由进食和饮水,所有操作均符合“3R”原则。（2）手术植入胶囊渗透压泵:所有需PTH干预的分组均持续泵入鼠重组甲状旁腺激素（1-34）（2pmol/kg.h）,干预2周;假手术组、低盐组、高盐组均持续泵入灭菌注射用水,干预2周。灌胃:假手术组、PTH组予灭菌注射用水灌胃,其余组根据分组情况予不同浓度生理盐水（10-20ml/kg/d）和卡托普利（10mg/kg/d）,灌胃2周。（3）采用无创血压测量系统测量大鼠尾动脉血压;采用电子天平秤测量心脏重量及体重,并计算心脏重量指数,游标卡尺测量左心室后壁厚度;苏木精-伊红染色法检查心肌组织学形态改变;免疫组化评估III型胶原蛋白的相对表达。结果（1）PTH及不同浓度盐摄入对大鼠血压的影响:所有PTH与高盐共同干预的大鼠血压较干预前显着升高,也显着高于未干预的大鼠血压（P<0.05）;单独PTH或高盐干预的大鼠血压干预后较干预前无明显变化;卡托普利干预可使PTH与高盐共同干预的大鼠血压明显下降（P<0.05）。（2）PTH及不同浓度盐摄入对大鼠HW、HMI、LVPWT的影响:PTH+高盐组的大鼠心脏重量明显重于假手术组、PTH组、低盐组和高盐组（P<0.05）;PTH+高盐组大鼠的心脏重量指数也明显高于PTH组和低盐组（P<0.05）;和假手术组、低盐组大鼠相比,PTH+高盐组大鼠的左心室后壁明显增厚（P<0.05）;而卡托普利干预未能完全逆转PTH与不同浓度盐作用导致的心脏重量、心脏重量指数及左心室后壁厚度的增加。（3）PTH及不同浓度盐摄入对大鼠心肌组织学形态的影响:假手术组大鼠心肌细胞排列规整,细胞大小较均匀,核质结构清晰,心肌细胞无变性、坏死,间质无炎症细胞浸润;与其余各组相比,PTH+高盐组大鼠心肌细胞明显肥大,排列紊乱,可见部分心肌细胞溶解坏死,伴随大量炎症细胞浸润;PTH+低盐组仅表现为心肌细胞轻度肥大,排列稍紊乱,未见心肌细胞溶解坏死及炎症细胞浸润;卡托普利干预可以不同程度地改善PTH及不同浓度盐摄入导致的心肌组织病理改变。（4）PTH及不同浓度盐摄入对大鼠心肌纤维化标记物III型胶原蛋白表达的影响:与假手术组相比,除了低盐组外,其余各组III型胶原蛋白表达均明显增高（P<0.05）;PTH与高盐共同作用的大鼠心肌III型胶原蛋白表达明显高于其他组（P<0.05）;卡托普利干预后,PTH与不同浓度盐摄入导致的大鼠心肌III型胶原蛋白表达明显减少（P<0.05）。结论PTH与高盐共同干预可引起Sprague Dawley大鼠血压升高,心脏重量增加,心肌细胞肥大,左室肥厚,心肌纤维化水平增加。卡托普利干预可降低血压、减少心肌组织病理改变及心肌纤维化,但未能完全逆转左心室肥厚。
马征[3]（2021）在《基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制》文中研究表明房颤是临床上常见的心律失常,可引起包括脑卒中在内的多种栓塞性疾病,并诱发、加重心力衰竭,严重威胁了人类健康。目前,房颤的西医治疗以内科药物和射频消融术为主,虽然疗效有了明显提高,但仍存在一定局限。中医从整体观念出发,辨证用药,或可作为临床防治房颤的一个策略。在临床实践中发现以益气活血法为基础,通过加入清热化痰、养心安神等方法治疗房颤有一定疗效,然而由于当前临床研究的样本量、方法、质量水平参差不齐,其有效性尚缺乏准确的判断。Meta分析作为循证医学寻求最佳证据的有力手段,或可为解决这一问题提供思路,因此,本研究拟采用Meta分析的方法,对益气活血法为主治疗房颤的临床疗效及安全性进行探讨。流行病学显示房颤与高血压之间关系密切,高血压心房重构被认为是其发生房颤的重要原因,其中,以心房纤维化为主要特征的心房结构重构是关键环节。目前,仍缺乏针对高血压心房重构的有效药物,中医药研究有可能是解决这一问题的突破口。高血压的中医辨证分型主要有肝阳上亢、痰浊阻滞、气虚血瘀等,发病过程容易出现痰热,而快速性心律失常在气虚血瘀的基础上,痰热证表现较为突出,特别是在如房颤等快速性心律失常的发作期,痰热尤为明显。参连复脉颗粒作为我院心内科治疗心律失常的协定处方,其在益气活血的基础上,注重清心化痰,临床治疗有一定疗效。前期研究发现参连复脉颗粒具有抑制炎症、缩短动作电位时长、降低快速性室性心律失常、减少房颤复发率的作用。相关文献研究亦发现参连复脉颗粒主要组成药物及有效成分可通过抑制TGF-β1通路等作用抑制心房纤维化,减少房颤的发生。本研究通过复制原发性高血压大鼠动物模型,运用小动物超声心动图、心电图、在体心房burst刺激、电生理检查、免疫组化及Western Blot等方法,从整体、组织细胞、分子层面进行研究,以验证“参连复脉颗粒可能通过调节ERK1/2和TGF-β 1/Smad3通路,抑制高血压心房重构和房颤易感性”的假说。目的1.探讨以益气活血法为主治疗房颤的临床疗效和安全性,为房颤的中医药治疗提供循证医学证据。2.探究参连复脉颗粒对高血压心房重构和房颤易感性的干预作用及可能机制。第一部分 益气活血法治疗房颤的Meta分析方法通过计算机检索中国期刊全文数据库（CNKI）,中国生物医学文献数据库（CBM）,维普中文期刊全文数据库（VIP）,万方数据库,以及国外数据库包括PubMed、Web of Science及Cochrane Library。收集公开发表的关于益气活血法为主联合西医常规治疗房颤的随机对照临床实验。用RevMan5.3软件对纳入的文献进行Meta分析,结果通过森林图呈现,敏感性分析评估结果是否稳定,漏斗图分析文献是否存在发表偏倚。结果1.文献检索筛选结果经过文献检索和补充,共检索出712篇文献,排除重复文献215篇,进而浏览标题、,剔除289篇与纳入标准不符的文献,最后进行文献通读,纳入文献17篇。2.纳入文献特征2.1一般资料17篇文献共纳入1639人,其中治疗组828人,对照组811人;17篇文献中有2篇未详细说明治疗组和对照组具体年龄和性别分布情况,其余均详细描述了治疗组和对照组患者的例数、性别、年龄、干预措施和疗程,17篇文献中有3篇文献未明确说明病程情况,其余详细描述了病程;17篇文献均描述治疗组和对照组的一般资料无统计学差异。2.2中药使用情况本研究纳入的文献以益气活血法为基础治法,其中使用频次较高的药物为人参（10次）,黄芪（6次）,丹参（8次）,三七（7次）。2.3不良反应及随访情况纳入的17篇文献中,有4篇明确报道无不良反应;有6篇明确报道出现不良反应,包括有头晕、恶心呕吐、心动过缓等;有7篇未描述是否发生不良反应。3.文献质量评价纳入文献总体质量一般,经改良jadad评分量表评分,有4篇文献2分,6篇文献3分,6篇文献4分,1篇文献6分。纳入的17篇文献均提及“随机”字样,其中13篇采用了正确的随机方法,17篇文献均未描述分配方案隐藏,有1篇文献采用了正确的盲法,2篇文献报告偏倚风险低,17篇文献结果数据均完整、没有其他偏倚来源。4.Meta分析结果Meta分析结果显示,益气活血中药联合常规西药组在临床疗效（RR=1.16,95%CI=[1.08,1.23],Z=4.33,P<0.00001）、中医证候疗效（RR=1.29,95%CI=[1.18,1.41],Z=4.33,P<0.00001）、房颤转复率（RR=1.23,95%CI=[1.04,1.46],Z=2.46,P=0.01）、窦性心律维持（RR=1.31,95%CI=[1.14,1.50],Z=3.80,P=0.0001）、房颤发作次数（SMD=-1.00,95%CI=[-1.73,-0.27],Z=2.67,P=0.008）和安全性评价（RR=0.43,95%CI=[0.28,0.66],Z=3.83,P=0.0001）方面优于常规西药组。结论以益气活血法为主的口服中药联合西药,在改善房颤临床疗效、中医证候疗效、房颤转复率、窦性心律维持及房颤发作次数方面有一定疗效,且安全性较好。但由于纳入的文献质量有限,本次Meta分析结果尚有待大样本、高质量的临床研究证实。第二部分基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制方法1.分组与给药将自发性高血压大鼠随机分为SHR空白组（SHR组）、SHR+氯沙坦钾组（LOS组）、SHR+参连复脉颗粒组（SLFM组）,同时以正常血压京都威斯特大鼠作为正常对照组（WKY组）,共4组。给予相应药物或生理盐水灌胃,共4周。2.检测方法各组大鼠干预4周后记录体重、血压、心率、死亡情况;利用小动物超声心动图检测左心房及左心室的结构和功能;利用心电图检测P波时限、PR间期;利用多导生理记录仪检测心房有效不应期,利用在体心房burst刺激检测房颤易感性;利用H&E染色、Masson染色及免疫组化检测心房心肌细胞肥大、心房间质纤维化情况;利用ELISA、Rt-qPCR及Western Blot技术检测ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路相关基因及蛋白表达水平。结果1.模型评价:（1）与WKY组相比,SHR组体重较轻,收缩压和舒张压均明显升高（P<0.05）;（2）与WKY组相比,SHR组左室壁增厚、左室内径缩小、左心房扩大、左心房总射血分数降低、标化左心房重量及标化全心重量增加（P<0.05）;（3）与WKY组相比,SHR组P波时限、PR间期、房颤诱发持续时间增加（P<0.05）;（4）与WKY组相比,SHR组心房心肌细胞肥大、胶原蛋白I和胶原蛋白Ⅲ表达增高,胶原纤维容积分数升高（P<0.05）;（5）与WKY组相比,SHR组心肌纤维化相关因子表达异常,表现为 ERK1/2 通路相关因子 AngⅡ、AT1R、p-ERK1/2 显着升高（P<0.05）,而 TGF-β1/Smad3通路相关因子 Galectin-3、TGF-β1、p-Smad3、MMP-3 升高（P<0.05）,TIMP-3 降低（P<0.05）。2.参连复脉颗粒对心脏结构和功能的作用:SLFM组与SHR组相比,左心房内径、左心房最大容积显着缩小（P<0.05）,其余指标均无明显差异;LOS组与SHR组相比,舒张期左室前壁厚度、左房内径显着缩小（P<0.05）,左心房最大容积有缩小的趋势,但差异没有统计学意义,其余指标均无明显差异。3.参连复脉颗粒对心房电生理及房颤诱发率的作用:SLFM组与SHR组相比,P波时限、房颤诱发持续时间显着降低（P<0.05）,房颤诱发率有降低的趋势,但差异没有统计学意义,其余指标均无明显差异;LOS组与SHR组相比,P波时间、PR间期、房颤诱发持续时间显着降低（P<0.05）,房颤诱发率有降低的趋势,但差异没有统计学意义,其余指标均无明显差异。4.参连复脉颗粒对心房心肌细胞肥大及心房间质纤维化的作用:与SHR组相比,SLFM组与LOS组心房心肌细胞肥大有所抑制,胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ表达有所减少,纤维容积分数明显减少（P<0.05）。5.参连复脉颗粒对心房ERK1/2及TGF-β1/Smad3通路相关因子表达的作用:与SHR组相比,SLFM 组与 LOS 组心房 AT1R、p-ERK1/2/t-ERK1/2 显着降低（P<0.05）;SLFM组与 LOS 组心房 Galectin-3、TGF-β1、p-Smad3、t-Smad3、MMP-3、MMP-3/TIMP-3 显着降低（P<0.05）,TIMP-3 明显升高（P<0.05）。结论1.参连复脉颗粒能改善自发性高血压大鼠心房结构重构,对心房电重构及房颤易感性有一定抑制作用。2.参连复脉颗粒改善自发性高血压大鼠心房结构重构的机制可能和调控ERK1/2及TGF-β1/Smad3信号通路有关。
胡欢[4]（2021）在《Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究》文中认为研究背景:高血压心肌重构主要的特征表现为左心室肥厚和间质纤维化,是心力衰竭发生的主要原因之一。在高血压心肌重构进程中,压力负荷、神经体液及细胞因子等各种刺激因素引起心肌组织中氧化应激增强和炎症反应的激活,进一步导致心肌细胞肥大、心肌成纤维细胞的活化和细胞外基质成分的合成。因此,抑制氧化应激及炎症是减轻高血压心肌重构的重要途径之一。Adropin是由能量稳态相关基因（Enho）编码的一种肽类激素,早期研究发现其在维持能量代谢平衡和改善胰岛素抵抗过程中发挥重要作用。近期越来越多的研究表明Adropin同样可以通过抗氧化应激和抗炎作用参与多种疾病的发生与发展过程,然而其在高血压心肌重构中的作用及调节机制并不明确。本研究团队前期研究发现Adropin可能在肥胖青少年患者的血管内皮功能中发挥保护作用。基于Adropin在抗氧化应激、抗炎、维持能量代谢平衡、改善胰岛素抵抗及保护血管内皮功能等诸多病理生理过程中发挥重要作用,本研究团队推测Adropin可能参与了高血压心肌重构进程。本研究从临床、动物及细胞水平探究了Adropin在高血压心肌重构中的作用及其相关机制。第一部分高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义目的:探讨高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义。方法:本研究纳入于南昌大学第二附属医院心血管内科就诊的高血压患者86例以及于南昌大学第二附属医院体检科就诊的健康对照者12例,收集入组人群一般资料、临床指标结果、心脏彩超数据等。采用ELISA法检测入组人群血清Adropin水平,分析其在高血压患者和健康对照人群中的变化,进一步探究Adropin在高血压伴左室肥厚患者和高血压不伴左室肥厚对照人群血清中的变化,采用多元线性回归分析Adropin与左室肥厚标志物左室质量指数的关系,采用ROC曲线分析检测Adropin在高血压LVH中可能的诊断价值。结果:1.与健康对照人群相比,高血压患者血清Adropin表达水平显着降低,健康对照组Adropin水平:9.06±2.80 pg/mL;高血压组Adropin水平:4.64±0.64 pg/mL。2.与高血压不伴左室肥厚对照人群相比,高血压伴左室肥厚人群年龄更高,Adropin表达水平显着降低,其中高血压不伴左室肥厚对照组Adropin水平:4.79±0.65 pg/mL;高血压伴左室肥厚组:4.15±0.21 pg/mL。3.运用多元线性回归分析发现Adropin与左心室质量指数（LVMI）呈负相关性。当调整年龄、性别和身体质量指数（Body Mass Index,BMI）混杂因素后,血清Adropin水平每增加一个单位,LVMI下降7.31个单位:β（95%CI）=-7.31（-13.95,-0.67）,P=0.034。进一步将Adropin水平按三分位处理,与T1组（<4.36pg/mL）人群相比,T2（4.36 to<4.61 pg/mL）组和T3（≥4.61 pg/mL）组人群中的LVMI水平均显着降低[T2:β（95%CI）=-18.82（-28.21,-9.42）,P<0.001;T3:β（95%CI）=-20.76（-30.36,-11.15）,P<0.001]。进一步调整年龄、性别、BMI、收缩压、舒张压、总胆固醇、血糖、谷草转氨酶及谷丙转氨酶混杂因素后,血清Adropin水平每增加一个单位,LVMI下降7.52个单位:β（95%CI）=-7.52（-14.32,-0.71）,P=0.034。进一步将Adropin水平按三分位处理,与T1组（<4.36 pg/mL）人群相比,T2（4.36 to<4.61 pg/mL）组和T3（≥4.61 pg/mL）组人群中的LVMI水平均显着降低[T2:β（95%CI）=-17.59（-27.53,-7.65）,P=0.001;T3:β（95%CI）=-20.72（-30.41,-11.04）,P<0.001]。4.ROC曲线分析Adropin水平在高血压左室肥厚中的诊断价值:血清Adropin的曲线下面积为0.936,在4.265 pg/mL临界点处,特异性为89.5%,敏感性为91%,且具有统计学意义。结论:高血压患者血清Adropin水平低于健康对照者,高血压伴左室肥厚患者血清Adropin低于高血压不伴左室肥厚对照者,Adropin与LVMI呈负相关,且其具有作为诊断高血压左室肥厚标志物的可能性。第二部分重组Adropin对自发性高血压大鼠心肌重构的影响目的:探究自发性高血压大鼠血清Adropin水平的变化并观察重组Adropin治疗12周后对自发性高血压大鼠心肌重构的作用及其相关机制。方法:1.纳入6只16周龄的雄性自发性高血压大鼠（Spontaneously Hypertensive Rat,Rat）为实验组即高血压组（SHR）,6只同周龄的雄性Wistar-Kyoto大鼠为对照组即正常血压组（WKY）。使用无创血压仪测量大鼠血压,超声心动仪检测心脏功能指标,HE染色观察心肌组织病理变化,WGA染色观察心肌细胞大小变化,Masson染色观察心肌组织纤维化水平,RT-PCR法检测心肌组织中肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC及纤维化标志物Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平,验证自发性高血压大鼠心肌重构模型。通过ELISA法,免疫组织化学法,RT-PCR法及Western Blot法检测自发性高血压大鼠心脏组织中Adropin的表达变化。2.我们构建并合成具有Adropin蛋白生物学活性的重组Adropin34-76多肽,纳入12只4周龄的雄性SHR及6只雄性WKY作为对照组。进一步将SHR分为2组:SHR组（n=6）和SHR接受Adropin处理组（n=6）。Adropin处理组腹腔注射Adropin（2.1μg/kg/d）,SHR组注射同等剂量的赋形剂。处理过程中每两周检测一次血压,处理12周后完成各项反映心肌重构的指标检测。通过ELISA法及Western Blot法检测大鼠血清及心肌组织中炎症因子IL-6及TNF-α的表达水平。通过DHE染色、组织MDA和SOD含量检测法进一步探究大鼠心肌组织中的氧化应激水平。结果:1.相比16周WKY组,16周SHR组大鼠SBP,DBP,心率及心脏重量及心指数（HW/BW）显着增高。彩超分析发现,相比WKY组,SHR组大鼠舒张末期室间隔厚度（IVS;d）,舒张末期左室后壁厚度（LVPW;d）显着增加,舒张末期左室内径（LVID;d）显着降低,而二者左心室射血分数（EF）和缩短分数（FS）无明显差异。组织病理染色发现,相比WKY组,HE染色提示SHR组大鼠心肌组织出现排列紊乱甚至断裂现象,WGA染色提示SHR组大鼠心肌细胞相对面积更大,Masson染色提示SHR组大鼠心肌组织纤维化水平显着增加,RT-PCR法提示SHR组大鼠心肌组织ANP、BNP、β-MHC、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平更高。ELISA,免疫组织化学染色及RT-PCR检测提示SHR大鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平显着降低。2.4周龄的大鼠分为三组:WKY组;SHR组;SHR+Adropin组。Adropin处理过程中,相比WKY组,SHR组大鼠的SBP和DBP水平随着年龄的增加显着升高,而Adropin持续处理12周能显着延缓SHR的SBP和DBP的水平增加进展。彩超分析发现,三组在4周龄基线水平时的IVS;d、LVPW;d、LVID;d、EF及FS水平无明显统计学差异。而在Adropin处理12周后的16周龄时,相比WKY组,SHR组的IVS;d,LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平显着下降,而SHR+Adropin组的IVS;d,LVPW;d水平较SHR组显着降低,LVID;d水平显着增高。三组的EF和FS水平无明显统计学差异。HE、WGA及Masson染色发现,相比WKY组,SHR组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin干预能显着降低SHR组大鼠心肌肥大和纤维化水平。RT-PCR法提示,相比WKY组,SHR组心肌组织ANP、BNP、β-MHC、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平更高,而Adropin干预能显着降低其水平。进一步通过ELISA和Western Blot分析发现,相比WKY组,SHR组血清及心肌组织炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平显着增高,而Adropin干预能显着降低二者的表达水平。心肌组织DHE染色、MDA和SOD含量检测提示,相比WKY组,SHR组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD水平显着下降,而Adropin处理能显着降低心肌组织活性氧水平,降低MDA含量,提高SOD的表达水平。结论:16周龄的自发性高血压大鼠伴有心肌重构,Adropin表达水平的下降。重组Adropin治疗12周后显着减轻自发性高血压大鼠的心肌重构水平,降低心脏组织炎症水平及改善氧化应激。第三部分Adropin在小鼠病理性心肌重构中的作用及机制目的:探究高血压心肌重构常见刺激因素压力负荷增加和血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构过程中Adropin水平的变化,观察重组Adropin腹腔注射对病理性心肌重构的作用,观察Adropin敲除对病理性心肌重构的作用及其相关机制。方法:1.纳入28只8周龄的C57BL/6小鼠行主动脉弓缩窄（Transverse Aortic Constriction）手术及皮下埋植入式胶囊渗透压泵持续灌注血管紧张素Ⅱ构建小鼠病理性心肌重构模型。小鼠分为4组:假手术Sham组（n=8）,TAC组（n=8）;胶囊渗透压泵持续灌注生理盐水（Normal Saline,NS）组（n=6）,胶囊渗透压泵持续灌注血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）组（n=6）。超声心动仪检测心脏功能指标,HE染色观察心肌组织病理变化,WGA染色观察心肌细胞大小变化,Masson染色观察心肌组织纤维化水平,验证小鼠病理性心肌重构模型。通过ELISA法,RT-PCR法及Western Blot法检测小鼠病理性心肌重构中Adropin的表达变化。2.构建并合成具有Adropin蛋白生物学活性的重组Adropin34-76多肽,纳入48只8周龄的C57BL/6小鼠。进一步将小鼠分为8组:假手术Sham给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+Sham,n=6）,假手术Sham给予Adropin处理组（Vehicle+Adropin,n=6）,TAC给予赋形剂处理组（Vehicle+TAC,n=6）,TAC给予Adropin处理组（Adropin+TAC,n=6）;含生理盐水（NS）泵植入术给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+NS,n=6）,含生理盐水（NS）泵植入术给予Adropin处理组（Adropin+NS,n=6）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入术给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+Ang Ⅱ,n=6）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入术给予Adropin处理组（Adropin+Ang Ⅱ,n=6）。Adropin处理组腹腔注射Adropin（450 nmol/kg/d）2周,Vechile组注射同等剂量的赋形剂。Ang Ⅱ组皮下灌注Ang Ⅱ（1500 ng/kg/d）2周,NS组皮下灌注等剂量的正常生理盐水。处理2周后完成各项反映心肌重构的指标检测,通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究Adropin治疗对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2/HO-1信号通路的影响。3.构建Adropin基因敲除小鼠,在血管紧张素Ⅱ模型中进一步进行功能缺失性研究。纳入10只8-10周龄Adropin基因敲除小鼠和10只8-10周龄同窝出生的野生型小鼠。小鼠分为4组:含生理盐水（NS）泵植入野生型小鼠组（WT+NS,n=5）,含生理盐水（NS）泵植入Adropin基因敲除小鼠组(Adropin-/-+NS,n=5),含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入野生型小鼠组（WT+Ang Ⅱ,n=5）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入Adropin基因敲除小鼠组(Adropin-/-+Ang Ⅱ,n=5)。处理2周后完成各项反映心肌重构的指标检测,通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究各组小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究Adropin敲除对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2表达水平的影响。4.构建腺相关病毒AAV9-Nrf2-GFP及空载对照病毒（Vector）,经尾静脉注射特异性上调小鼠心肌组织Nrf2的表达,在Adropin基因缺失加重血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构实验中进一步进行功能回复性研究。纳入10只8-10周龄Adropin基因敲除小鼠,小鼠分为2组:尾静脉注射Vector的4周后皮下植入含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）微量泵组（Vector+Ang Ⅱ,n=5）;尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP的4周后皮下植入含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）微量泵组（AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ,n=5）。Ang Ⅱ处理2周后完成完成各项反映心肌重构的指标检测。通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达情况。结果:1.彩超结果发现,相比Sham组,TAC组的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而EF及FS二者无明显差异;相比NS组,Ang Ⅱ组的IVS;d、LVPW;d、EF及FS水平显着增高,LVID;d水平下降。组织病理染色发现,相比Sham组,HE染色提示TAC组小鼠心肌组织出现排列明星紊乱以及断裂现象,WGA染色提示TAC组小鼠心肌细胞相对面积更大,Masson染色提示TAC组小鼠心肌组织纤维化水平显着增加。相比NS组,Ang Ⅱ组小鼠心脏出现相似的组织病理学改变。ELISA,RT-PCR及West检测提示TAC小鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平较Sham组显着降低,而Ang Ⅱ小鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平较NS组显着降低。2.在TAC模型实验中,彩超结果结果,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而Adropin+TAC组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平较Vehicle+TAC显着下降,LVID;d水平明显上升。HE、WGA及Masson染色发现,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin干预能显着降低TAC组小鼠心肌肥大和纤维化水平。Western Blot法进一步分析发现,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组小鼠心肌组织肥厚标志物ANP及纤维化标志物Collagen Ⅰ蛋白表达水平明显升高,而Adropin治疗能显着降低二者水平。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD蛋白表达水平显着下降,而Adropin干预能显着降低心肌组织活性氧水平,降低MDA含量,提高SOD的表达水平。在Ang Ⅱ模型实验中,可以发现类似的Adropin治疗逆转病理性心肌重构,改善氧化应激的现象。进一步通过Western Blot研究Adropin治疗对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2/HO-1信号通路的影响发现,相比Vehicle+NS组,Vehicle+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织中的胞核Nrf2和HO-1的表达水平显着升高,总NQO-1表达水平显着下降,而Adropin治疗组即Adropin+Ang Ⅱ小鼠心肌组织中的胞核Nrf2和HO-1的表达水平相比Vehicle+Ang Ⅱ组进一步升高,胞浆NQO-1的表达水平上升。Adropin干预同样能减轻Ang Ⅱ刺激引起的心肌组织凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。3.构建Adropin基因敲除小鼠,验证Adropin缺失对血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构模型的影响。Western Blot研究发现,相比野生型小鼠,Adropin基因（Enho）敲除小鼠心肌组织中无Adropin蛋白的表达,证明Adropin基因敲除小鼠模型的成功构建。彩超分析发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而Adropin-/-+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平相比WT+Ang Ⅱ组进一步升高,LVID;d水平进一步下降,二者具有统计学意义。HE、WGA及Masson染色发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin敲除能进一步增加Ang Ⅱ组小鼠心肌肥大和纤维化水平。Western Blot法进一步分析发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织肥厚标志物ANP及纤维化标志物Collagen I蛋白表达水平明显升高,而Adropin敲除能进一步升高二者水平,且二者具有统计学意义。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD蛋白表达水平显着下降,而Adropin敲除能进一步增加心肌组织活性氧水平,增加MDA含量,降低SOD的蛋白表达水平。RT-PCR和Western Blot法分析发现,相比WT+Ang Ⅱ,Adropin-/-+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织中Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显着下降,进一步提示Adropin可能通过Nrf2信号通路参与Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构。4.构建腺相关病毒AAV9-Nrf2-GFP,验证心肌组织Nrf2过表达在Adropin基因缺失加重血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构中的回复性作用。冰冻切片荧光显像、RT-PCR和Western Blot分析发现,相比尾静脉注射NS组,尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP及Vectord的Adropin敲除小鼠心脏组织出现荧光蛋白表达。相比尾静脉注射Vectro组,尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP组小鼠心肌组织Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显着增高,证明了AAV9-Nrf2-GFP具有上调Adropin-/-小鼠心肌组织中Nrf2表达水平的能力。心脏彩超分析发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着下降,LVID;d水平升高,二者具有统计学意义。HE、WGA及Masson染色发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌细胞相对面积显着下降,心肌组织纤维化水平显着降低。RT-PCR分析发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌组织肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC及纤维化标志物Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA水平显着降低。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌组织ROS水平和MDA含量明显降低,而SOD水平明显升高。Nrf2过表达干预同样能减轻Ang Ⅱ刺激Adropin基因敲除小鼠引起的心肌组织凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。结论:Adropin处理可以延缓压力负荷及血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌病理性重构,Adropin敲除可以加重血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌病理性重构,Nrf2/HO-1信号通路可能在其中发挥作用。第四部分Adropin在Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用及其机制目的:细胞水平探究Adropin是否参与了Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成及相关机制。方法:1.探究血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）处理心肌成纤维细胞对Adropin表达水平的影响,分为四组:Control组,Ang Ⅱ 0.1μM组,Ang Ⅱ 1μM组和Ang Ⅱ 2μM组,处理时间为24小时。采用RT-PCR和Western Blot法检测Adropin的mRNA及蛋白表达水平变化。采用外源添加重组Adropin及WB的方法观察其对Ang Ⅱ刺激CFs细胞Adropin蛋白表达变化的影响。2.采用外源添加重组Adropin的方法,在Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成中进行功能型实验,分为四组:Vehicle组,Adropin组,Vehicle+Ang Ⅱ组及Adropin+Ang Ⅱ组。其中,采用噻唑蓝（MTT）法检测心肌成纤维细胞的增殖;采用Western Blot检测心肌纤维化标志分子Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及CTGF指标的表达。3.探究Adropin对Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成进程中的氧化应激指标ROS、MDA及SOD水平的影响,Western Blot法研究外源添加重组Adropin对Nrf2/HO-1信号通路的影响。Nrf2的DNA结合活性实验分析Adropin处理对血管紧张素Ⅱ刺激心肌成纤维细胞过程中细胞内Nrf2的DNA结合活性的影响。结果:1.RT-PCR和Western Blot实验提示,Adropin的mRNA及蛋白的表达水平随着Ang Ⅱ浓度增高下降,外源添加重组Adropin处理能提高处于Ang Ⅱ刺激下的纤维细胞中的Adropin水平。2.MTT检测发现,相比对照Vehicle组,血管紧张素Ⅱ刺激可引起心肌成纤维细胞增殖水平的增加,而Adropin处理能显着降低血管紧张素Ⅱ刺激引起的增殖水平增加。Western Blot分析提示,相比Vehicle组,血管紧张素Ⅱ刺激引起心肌成纤维细胞中的Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ和CTGF蛋白表达水平增高,而Adropin处理能显着降低三者的水平。3.细胞氧化应激水平检测发现,相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞内活性水平和MDA水显着增高,而Ang Ⅱ+Adropin组活性氧及MDA水平较Ang Ⅱ组显着下降。相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞中SOD水平显着降低,而Ang Ⅱ+Adropin组SOD水平较Ang Ⅱ组显着上升。进一步分析Adropin干预对心肌成纤维细胞在Ang Ⅱ刺激下的Nrf2/HO-1信号通路的影响发现,相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞胞核Nrf2和HO-1蛋白表达水平显着增高,Adropin处理进一步增加了胞核Nrf2和HO-1的蛋白表达。相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞胞总的Nrf2蛋白表达水平增高,NQO-1表达水平下降,而Adropin处理后进一步提高总的Nrf2和NQO-1蛋白的表达。此外,Nrf2的DNA结合活性实验分析发现,相比vehicle组,Ang Ⅱ刺激引起Nrf2的转录活性增加,Adropin处理能进一步显着增加Nrf2的转录活性。结论:Adropin处理可能通过增强Nrf2/HO-1信号通路提高细胞抗氧化能力,减轻细胞活性氧水平从而抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成。
宋晶[5]（2020）在《基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用》文中研究说明目的:以盐酸异丙肾上腺素腹腔注射法复制大鼠心肌纤维化（Myocardial fibrosis,MF）模型,用细胞分子生物学技术和方法,观察TGF-β1/LIMK1信号通路在心肌纤维化过程中的表达情况,观察解毒通络方对TGF-β1/LIMK1信号通路的调控方式及干预MF的作用机制。方法:实验一:50只SD雄性大鼠随机分为5组,正常对照组、3d组、7d组、14d组、28d组,正常对照组给予生理盐水注射,其他组给予异丙肾上腺素腹腔注射5mg.kg-1,分别于3天、3天、7天、14天、28天时,记录大鼠体重并乙醚麻醉状态下迅速取SD大鼠心脏,测量心脏重量后,取出心室部,放入4%多聚甲醛固定液,供组织学HE染色,免疫组化法测α-肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vim）阳性表达面积,取出心尖部迅速置于液氮中保存,分光光度法测羟脯胺酸含量。实验二:根据实验一结果,将60只SD雄性大鼠分为正常对照组、模型组、卡托普利组、中药低、中、高剂量组,正常对照组给予生理盐水注射,其他组给予异丙肾上腺素腹腔注射5mg.kg-1,中药组每日按10g、20g、30g.kg-1灌胃解毒通络方冲剂悬液;卡托普利组每日按5mg.kg-1灌胃卡托普利片悬液;正常对照组每日给予以等体积自来水灌胃。记录大鼠体重后乙醚麻醉状态下迅速取SD大鼠心脏,测量心脏重量计算心重指数;心尖部迅速置于液氮中保存,分光光度法测定羟脯胺酸含量。将心室部,放入4%多聚甲醛固定液,供组织学HE及MAasson染色,免疫组化法测I型胶原蛋白（Col I）、III型胶原蛋（Col III）、α-SMA、Vim、单丝氨酸蛋白激酶（LIMK1）阳性表达面积;眼球采血,收集血清并置于-20℃冰箱,收集的血清进行细胞分组培养。实验三:用提前制备的动物血清分正常对照组、模型组、卡托普利组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组培养成纤维细胞,Western-blot法检测各组成纤维细胞中α-SMA、Vim、ROCK1、LIMK1蛋白相对表达量;实时荧光定量PCR法检测成纤维细胞中TGF-β1、RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量;MTT法检测TGF诱导成纤维细胞增殖时相;用TGF刺激成纤维细胞后,实时荧光定量PCR法检测成纤维细胞中RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量。结果:实验一:大鼠心肌纤维化模型构建:1.HE染色结果:正常对照组心肌细胞横纹清晰,细胞和大小、间隙一致,胞浆染色清晰,注射异丙肾上腺素后3天、7天、14天、28天大鼠心肌组织细胞均出现细胞排列紊乱,坏死区细胞核固缩,胞浆减少或缺失,结缔组织增生。在3d组这种改变最明显,7d组、14d组相对减轻,28d组有所改善。2.心重指数:与正常对照组比较,3d组心重指数无明显差异,P>0.05。7d组、14d组、28d组心重指数下降,P<0.05。3.羟脯氨酸含量测定:与正常对照组比较,3d组、7d组、14d组、28d组羟脯胺酸含量明显增加,P<0.05,且随时间变化呈递增趋势。4.免疫组化结果:与正常对照组比较,3d组、7d组的大鼠心肌组织中,可见明显α-SMA、Vim蛋白阳性表达,且P<0.05。14d、28d组与正常对照组比较无显着差异P>0.05。实验二:解毒通络方动物体内药效学观察:1.心重指数:应用异丙肾上腺素制备大鼠心肌纤维化模型,采用注射后3天的造模方法。与正常对照组比较,模型组大鼠心重指数无明显增加,且P>0.05,与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组心脏指数无明显改变,且P>0.05。2.羟脯胺酸含量测定结果:与正常对照组比较,模型组羟脯氨酸含量明显增加,P<0.05;与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组羟脯氨酸含量明显下降,且P<0.05。3.HE染色:正常对照组细胞排列整齐,细胞间隙大小均一,胞浆染色均匀,模型组、卡托普利组以及各剂量中药组则出现不同程度的心肌纤维化表现,主要以细胞核固缩、心肌纤维溶解、断裂为主,细胞排列不规则,细胞结构破坏,细胞浆染色不均匀为主,卡托普利组与不同剂量中药组心肌纤维化程度较轻。4.Masson染色:与正常对照组比较,模型组、卡托普利组以及不同剂量中药组均出现不同程度的心肌组织损伤,具体表现为细胞核固缩,细胞排列紊乱,细胞间隙不规则,并出现大量蓝染的纤维胶原,并破坏心肌细胞,坏死部分有少量炎症浸润。与模型组比较,卡托普利组以及各剂量中药组心肌纤维化程度较轻。大鼠心肌组织中胶原纤维容积比（CVF）,与正常对照组比较,模型组明显增加,且P<0.05,与模型组比较,卡托普利组以及中药低、中、高剂量组明显减少,且P<0.05。5.免疫组化法测定ColI、ColIII、α-SMA、Vim、LIMK1蛋白阳性表达面积:（1）I型胶原蛋白及III型胶原蛋白在免疫组化染色中显示为棕色,与正常对照组比较,模型组I型胶原蛋白及III型胶原蛋白阳性表达面积明显高于正常对照组,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组及中药低、中、高剂量组阳性表达面积明显低于模型组。P<0.05。（2）α-SMA、Vim蛋白阳性表达表现为棕色,与正常对照组比较,模型组中α-SMA、Vim蛋白表达面积明显高于正常对照组,且P<0.05;与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组α-SMA、Vim蛋白表达面积明显下降,P<0.05;（3）与正常对照组比较,模型组LIMK1蛋白表达量明显高于正常对照组,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组明显低于模型组,P<0.05。实验三:解毒通络方对心肌成纤维细胞TGF-β1/LIMK1信号通路的作用1.Western-blot法检测各组成纤维细胞中α-SMA、Vim、ROCK1、LIMK1蛋白含量:（1）与正常对照组比较,模型组α-SMA、Vim蛋白表达量有所升高,有统计学差异P<0.05,卡托普利组与模型组比较表达量下降,具有显着差异,P<0.05。中药低、中、高剂量组与模型组比较有所下降,具有显着差异,P<0.05;（2）与正常对照组比较,模型组成纤维细胞中ROCK1蛋白表达含量明显增加,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组、中药低、中剂量组与中药高剂量组成纤维细胞中ROCK1蛋白表达含量明显下降,有统计学差异,P<0.05。（3）与正常对照组比较,模型组LIMK1蛋白表达量有所升高,有统计学差异,P<0.05,卡托普利组与模型组比较表达量下降,具有显着差异,P<0.05。中药低、中、高剂量组与模型组比较有所下降,且具有统计学差异,P<0.05;2.荧光定量PCR法检测成纤维细胞中TGF-β1、RhoA、ROCK1、LIMK1mRNA含量:（1）荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中TGF-β1的mRNA表达量,与正常对照组比较,模型组中TGF-β1mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中TGF-β1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。（2）荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中RhoA、ROCK1的mRNA的表达量:与正常正常对照组比较,模型组中RhoA、ROCK1的mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中RhoA、ROCK1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。（3）应用荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中LIMK1mRNA的表达量,结果显示,与正常对照组比较,模型组中LIMK1mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中LIMK1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。3.MTT法检测TGF-β1诱导成纤维细胞增殖时相:用不同浓度的TGF-β1刺激成纤维细胞后,根据吸光值计算细胞增殖率,结果显示不同浓度的TGF-β1刺激成纤维细胞时,细胞表现出增殖现象,低浓度组、中浓度及高浓度组TGF-β1对细胞增殖均表现为24小时后出现增殖,48小时达到高峰,72小时后出现下降。而低浓度组在不同时间点均表现为最强的增殖率。中浓度组在各个时间点增殖率最低。所以在成纤维细胞增殖的研究中,选择低浓度(0.025 ng.ml-1)的TGF-β1为药物剂量,以48小时为时间点干预成纤维细胞。4.用TGF-β1刺激成纤维细胞后,荧光定量PCR法检测成纤维细胞中RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量:结果显示,（1）与正常对照组比较,模型组中RhoAmRNA含量明显增高。P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中RhoAmRNA含量明显减少。P<0.05。（2）与正常对照组比较,模型组中ROCK1、LIMK1的mRNA含量明显增加,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组以及中药低、中、高剂量组ROCK1、LIMK1的mRNA含量明显减少,P<0.05。结论:1.应用盐酸异丙肾上腺素注射液5mg.kg-1腹腔注射大鼠,3天后大鼠心肌组织病理形态改变,心肌组织中羟脯胺酸含量增加,心肌组织中α-SMA、Vim蛋白表达量增多,说明注射异丙肾上腺素3天后大鼠心肌纤维化模型制备成功。2.在应用解毒通络方干预大鼠心肌纤维化模型时,心肌纤维化有明显的改善。并通过抑制心肌胶原蛋白的分泌及沉积而实现抑制心肌纤维化。3.在体外应用解毒通络方干预大鼠成纤维细胞时,可通过下调TGF-β1/LIMK1信号通路中RhoA、ROCK1、LIMK1因子,抑制成纤维细胞中α-SMA、Vim蛋白表达,从而抑制心肌纤维化。4.在TGF-β1诱导大鼠成纤维细胞增殖时,解毒通络方可以抑制成纤维细胞增殖,并通过下调TGF-β1/LIMK1信号通路中RhoA、ROCK1、LIMK1因子而实现的。
赖鑫[6]（2020）在《电针对SHR大鼠心肌保护及对心肌差异蛋白表达影响研究》文中认为目的:高血压病是危害人类健康的心血管疾病之一,而心肌肥厚是其最常见的并发症。高血压心肌肥厚一旦形成,最终将可导致心律失常、心肌梗死、心力衰竭和心源性猝死等恶性心血管事件的发生。因此,探讨高血压心肌肥厚的发生机制对防治具有重要意义。目前大量临床研究已证实,针灸可以通过多靶点、多途径改善心肌重构,减少心血管事件的发生。而太冲、太溪穴为肝经、肾经之原穴,前者可以疏肝理气,清肝降压,镇惊熄风;后者可以滋肾阴,涵肝木,亦可强腰膝,二穴相配,共可滋阴固肾、平肝降压。故本实验利用自发性高血压大鼠（Spontan eous Hypertension Rat,SHR）建立高血压心肌肥厚模型,采用电针太冲、太溪穴进行干预,通过平行反应监测（Parallel Reaction Monitoring,PRM）、Western-blot 技术从蛋白层面探讨高血压心肌肥厚的致病机理以及电针太冲、太溪穴的作用机制,为针灸治疗高血压心肌肥厚提供新的理论依据。方法:1.实验分组及干预将30只SHR大鼠根据体重随机分为三组,分别为:模型组（SHR组）、电针组（EA组）、非穴组（Sham组）,每组各10只。并将10只同周龄的Wistar大鼠作为正常对照组（WKY组）。WKY组、SHR组:采取与Sham组和EA组相同的抓取和固定方法,但不以予针刺及电针治疗。Sham组:针刺大鼠相应穴位:太冲穴对应于后肢足背第3、4趾骨结合部之前凹陷处,太溪穴对应于大鼠脚跟部前3-5mm处。EA组:选取单侧太冲和太溪穴进行针刺。针刺后,将两针柄连接于电针治疗仪,给予电针刺激（疏密波,2Hz/15Hz,强度为1mA,每次20min,每日一次,共连续治疗8周）。2.观察指标（1）血压、心率于实验开始前、实验中第1、2、3、4、5、6、7周、第8周实验完成后,检测上诉各组大鼠收缩压、舒张压以及心率的变化;（2）心脏指数、左右肾指数于第8周实验完成后,测量上诉各组大鼠的全心重量、左心室重量、左、右肾脏重量以及体质量,并计算全心指数、左心室指数、左、右肾指数;（3）心肌胶原纤维容积分数、Ⅰ/Ⅲ胶原纤维比值于实验第8周实验完成后,利用Masson染色计算上诉各组大鼠心肌胶原纤维容积分数,利用天狼星红染色计算上诉各组大鼠心肌Ⅰ/Ⅲ胶原纤维比值;（4）心、肾组织的形态学观察于实验第8周实验完成后,利用HE染色法观察上诉各组大鼠心、肾组织变化情况,并计算心肌细胞横截直径及面积。（5）心肌差异蛋白表达于实验第8周实验完成后,利用PRM技术检测上诉各组大鼠心肌差异蛋白的表达情况。（6）检测蛋白的验证于实验第8周实验完成后,利用Western-blot技术检测上诉各组大鼠心肌SOD1、SOD2、HSP60、HSP70、肌球蛋白轻链、脂肪酸结合蛋白的表达情况。结果:1.血压、心率结果显示大鼠收缩压、舒张压以及心率治疗时间主效应显着（P<0.01）;分组因素主效应显着（P<0.01）,时间和分组因素交互作用显着（P<0.01）。进一步固定时间因素于同一水平,从第0周到第8周,与WKY组比较,SHR组和Sham组大鼠收缩压、舒张压、心率均增加（P<0.01）,有统计学意义;从第1周到第8周,与SHR组比较,EA组大鼠的即时收缩压、舒张压、心率均降低（P<0.01）,有统计学意义;与Sham组比较,EA组大鼠的即时收缩压、舒张压、心率均降低（P<0.01）,有统计学意义;2.心脏指数结果显示与WKY组比较,SHR组大鼠全心重量、全心指数、左心室重量、左心室指数增加（P<0.01）,有统计学意义;Sham组大鼠全心指数、左心室指数增加（P<0.01,P<0.05）,有统计学意义;全心重量、左心室重量增加（P>0.05）,无统计学意义;与SHR组比较,EA组大鼠全心重量、全心指数、左心室重量、左心室指数降低（P<0.01）,有统计学意义;与Sham组比较,EA组大鼠全心重量、全心指数、左心室重量及左心室指数降低（P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.05）,有统计学意义。3.肾脏指数结果显示与WKY组比较,SHR组大鼠左、右肾指数增加（P<0.05）,有统计学意义;Sham组大鼠左、右肾指数增加（P<0.01,P<0.05）,有统计学意义;与SHR比较,EA组大鼠左、右肾指数降低（P<0.05）,有统计学意义;与Sham组比较,EA组大鼠左、右肾指数降低（P<0.01,P<0.05）,有统计学意义。4.心肌胶原纤维容积分数、Ⅰ/Ⅲ胶原纤维比值结果显示与WKY组比较,SHR组大鼠心肌胶原纤维容积分数、Ⅰ/Ⅲ胶原纤维比值增加（P<0.01）,有统计学意义;Sham组大鼠心肌胶原纤维容积分数、Ⅰ/Ⅲ胶原纤维比值增加（P<0.01）,有统计学意义;与SHR组比较,EA组大鼠心肌胶原纤维容积分数、Ⅰ/Ⅲ胶原纤维比值降低（P<0.01）,有统计学意义;与Sham组比较,EA组大鼠心肌胶原纤维容积分数、Ⅰ/Ⅲ胶原纤维比值降低（P<0.01）,有统计学意义。5.心肌细胞横截直径及面积结果显示与WKY 比较,SHR组大鼠心肌细胞横截直径及面积增加（P<0.01）,有统计学意义;Sham组大鼠心肌细胞横截直径增加（P<0.01）,有统计学意义;心肌细胞面积增加（P>0.05）,无统计学意义;与SHR组比较,EA组大鼠心肌细胞横截直径及面积降低（P<0.01）,有统计学意义;与Sham组比较,EA组大鼠心肌细胞横截直径及面积降低（P<0.01,P<0.05）,有统计学意义。6.心、肾组织的形态学观察结果显示心肌HE染色:SHR组:与WKY组比较,心肌纤维排列紊乱、断裂;心肌细胞肥大,细胞间隙水肿明显;心肌间质可见炎细胞浸润及纤维细胞增生;EA组:与SHR组和Sham组比较,心肌细胞肿胀、肥大程度下降,间质水肿减轻,心肌纤维排列整齐;心肌间质炎细胞浸润及纤维细胞减少。肾组织HE染色:SHR组:与WKY组比较,蛋白颗粒析出;炎症细胞浸润。EA组:与SHR组和Sham组比较,蛋白颗粒析出、炎症细胞浸润减少。7.差异蛋白表达结果显示与WKY组比较,SHR组大鼠心肌肌酸激酶B型、肌酸激酶M型、SOD2、HSP27蛋白表达减少（P<0.01）,有统计学意义;ATP合成酶、HSP70、肌球蛋白轻链3、脂肪酸结合蛋白、肌球蛋白轻链2、SOD1、分拣连接蛋白、MAPK激酶蛋白表达减少（P<0.05）,有统计学意义;Ⅰ型胶原蛋白、α烯醇化酶、钙蛋白酶蛋白、丙酰辅酶A羧化酶蛋白表达增加（P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.05）,有统计学意义;HSP60、动力相关蛋白1表达减少（P>0.05）,无统计学意义;Sham组大鼠心肌肌酸激酶B型、肌酸激酶M型、肌球蛋白轻链3、脂肪酸结合蛋白表达减少（P<0.01）,有统计学意义;ATP合成酶、动力相关蛋白1、SOD1、SOD2、HSP27蛋白表达减少（P<0.05）,有统计学意义;Ⅰ型胶原蛋白、α烯醇化酶、丙酰辅酶A羧化酶、钙蛋白酶表达增加（P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05）,有统计学意义;HSP60、HSP70、肌球蛋白轻链2、分拣连接蛋白、MAPK激酶蛋白表达减少（P>0.05）,无统计学意义;与SHR组比较,EA组大鼠心肌肌酸激酶B型、肌酸激酶M型蛋白表达增加（P<0.01）,有统计学意义;ATP合成酶、HSP70、肌球蛋白轻链3、脂肪酸结合蛋白、肌球蛋白轻链2、分拣连接蛋白、MAPK激酶蛋白表达增加（P<0.05）,有统计学意义;Ⅰ型胶原蛋白、钙蛋白酶、α烯醇化酶、丙酰辅酶A羧化酶蛋白表达减少（P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05）,有统计学意义;HSP60、动力相关蛋白1、SOD1、SOD2、HSP27增加（P>0.05）,无统计学意义。与Sham组比较,EA组大鼠心肌肌酸激酶M型、肌酸激酶B型、脂肪酸结合蛋白、动力相关蛋白1表达增加（P<0.01）,有统计学意义;ATP合成酶、HSP70、肌球蛋白轻链3、肌球蛋白轻链2蛋白表达增加（P<0.05）,有统计学意义;Ⅰ型胶原蛋白、丙酰辅酶A羧化酶、α烯醇化酶、钙蛋白酶蛋白表达减少（P<0.01）,有统计学意义;SOD1、SOD2、HSP27、分拣连接蛋白、HSP60、MAPK激酶蛋白增加（P>0.05）,无统计学意义。8.蛋白验证的结果显示与WKY组比较,SHR组大鼠心肌SOD1、SOD2、肌球蛋白轻链、脂肪酸结合蛋白、HSP70 表达减少（P<0.05,P<0.01,P<0.05,P<0.05,P<0.05）,有统计学意义;HSP60蛋白表达减少（P>0.05）,无统计学意义。Sham组大鼠心肌SOD1、SOD2、HSP60、HSP70、肌球蛋白轻链、脂肪酸结合蛋白表达增加或减少（P>0.05）,无统计学意义。与SHR组比较,EA组大鼠心肌SOD1、SOD2、HSP60、HSP70、肌球蛋白轻链、脂肪酸结合蛋白表达增加（P<0.01,P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01）,有统计学意义。与Sham组比较,EA组大鼠心肌SOD1、肌球蛋白轻链、HSP70、脂肪酸结合蛋白表达增加（P<0.05）,有统计学意义;SOD2、HSP60表达增加（P>0.05）,无统计学意义结论:1.SHR大鼠收缩压、舒张压、心率、全心重量、左心室重量、全心指数、左心室指数、左、右肾指数、心肌细胞横截直径及面积、心肌胶原纤维容积、Ⅰ/Ⅲ胶原纤维比值均增加;而电针可以逆转上诉指标。2.从HE染色图片的变化看,SHR大鼠心肌细胞、细胞间隙水肿明显;心肌间质炎细胞浸润及纤维细胞增生,肾组织中蛋白颗粒析出;炎症细胞浸润,而电针可以逆转上诉心肌病理性表现。3.SHR大鼠心肌肌酸激酶B型、肌酸激酶M型、ATP合成酶、肌球蛋白轻链3、脂肪酸结合蛋白、肌球蛋白轻链2、SOD1、SOD2、HSP27、HSP70、分拣连接蛋白、MAPK激酶蛋白表达降低,而Ⅰ型胶原蛋白、α烯醇化酶、钙蛋白酶、丙酰辅酶A羧化酶蛋白表达的增加;4.电针可以增加SHR大鼠心肌肌酸激酶B型、肌酸激酶M型、ATP合成酶、肌球蛋白轻链3、脂肪酸结合蛋白、肌球蛋白轻链2、分拣连接蛋白、HSP70、MAPK激酶蛋白表达,而减少钙蛋白酶、Ⅰ型胶原蛋白、α烯醇化酶、丙酰辅酶A羧化酶蛋白的表达。
田海萍[7]（2020）在《SSBP1通过P53抑制AngⅡ诱导的心肌纤维化》文中进行了进一步梳理背景:心肌纤维化（MF）是慢性心功不全难以逆转的原因之一,且MF的程度决定着患者的预后。因此预防和逆转MF成为心力衰竭治疗的重点之一。心肌成纤维细胞是MF主要效应细胞,其过度增殖和胶原蛋白合成降解失衡是MF初始因素。RAS系统在促进MF发生发展过程中有着重要作用。AngⅡ可以激活TGF-β1信号,增加胶原蛋白合成,在MF和心肌重塑中起着关键作用。AngⅡ主要与ATI受体结合。缬沙坦是高选择的ATI受体拮抗剂,能够阻断AT1受体促进细胞增长、促进醛固酮释放和收缩血管的作用。线粒体单链DNA结合蛋白1（SSBP1）,属于单链DNA结合蛋白家族。通过与线粒体单链mtDNA结合,在线粒体DNA复制、重组和修复中发挥重要作用。研究发现SSBP1可能是TGFβ-1的负调控因子,并在心肌成纤维细胞活化中起到抑制作用。P53是一种转录因子,主要作用在于在维持线粒体功能,调控细胞增殖和分化。有研究发现SSBP1可以通过乙酰化增强P53稳定性。因此我们推测可以通过SSBP1/P53抑制心肌纤维化。第一部分 小鼠心肌纤维化模型制备目的:采用外源性给与AngⅡ的方法制备小鼠心肌纤维化模型。方法:C57BL/6J小鼠,23只,皮下置入ALzet 2002 200ul渗透泵。对照组（n=12）,泵入稀释后乙酸。实验组（n=11）泵入乙酸稀释的Ang Ⅱ,1.44μg/g/d,2周后检测小鼠血压,心脏超声相关指标。处死小鼠,制备心脏组织切片行天狼星红染色并测定胶原染色面积。结果:AngⅡ能够使小鼠收缩压升高,心脏重量增加,室壁增厚。实验组心肌组织切片胶原纤维染色面积为19.4%,对照组为42.1%。（P<0.05）第二部分 缬沙坦通过SSBP1抑制AngⅡ诱导的心肌纤维化目的:①探究SSBP1是否参与MF。②缬沙坦是否通过SSBP1干预MF。方法:C57BL/6J小鼠,植入ALzet2002 200ul渗透泵,对照组（n=12）,泵注稀释后乙酸;实验组（n=11）泵注AngⅡ;缬沙坦组（n=11）泵注AngⅡ+灌注缬沙坦（40 mg/kg/d）。泵注量1.44μg/g/d,2W。①心肌组织切片行天狼星红苦味酸染色,用图像J软件定量染色面积。②检测心肌COL1A1、COL3A1、SSBP1蛋白（WB法）和mRNA（qRT-PCR法）。③检测心肌组织线粒体功能。包括比色法测柠檬酸合成酶、ComplexⅠ和ComplexⅢ、GSH-Px活性。和NBT法测SOD活性。qRT-PCR法测Nox1和Nox4 mRNA。④分离并培养MCFs分4组:空白对照;AngⅡ0.5umol/l 组;AngⅡ 1.0umol/l组;AngⅡ 1.0umol/l+缬沙坦1.0umol/l 组;WB 法检测组 COL1A1、COL3A1、NOX1、NOX4 以及 SSBP1 蛋白。结果:①与对照组相比较,Ang II使得胶原蛋白染色面积、COL1A1和COL3A1 mRNA以及蛋白表达增加。柠檬酸合成酶、复合物I和复合物III、SOD和GSH酶活性降低;Nox1和Nox4 mRNA表达增加。SSBP1表达减少。②相比于实验组,缬沙坦组胶原蛋白染色面积、COL1A1和COL3A1 mRNA以及蛋白表达明显减少。柠檬酸合成酶、复合物Ⅰ和复合物Ⅲ、SOD和GSH酶活性增加;Nox1和Nox4 mRNA合成降低;但是SSBP1表达则有所增加。第三部分 P53和SSBP1对Ang Ⅱ刺激的MCFs增殖能力和胶原蛋白合成的影响目的:明确SSBP1是否能够通过P53抑制AngⅡ诱导的MCFs增殖和胶原蛋白表达。方法:(①沉默（感染SSBP1shRNA）和上调SSBP1（转染PCDNA3.1SSBP1）,分别在有和没有AngⅡ刺激的情况下,MCFs增殖能力（MTT法）、Ⅰ型Ⅲ型胶原蛋白表达、NADPH氧化酶NOX1和NOX4合成、以及P53蛋白表达的变化（蛋白检测使用WB法）。②感染Ad-P53-GFP上调P53,分别在有和没有AngⅡ刺激时,MCFs增殖能力、COL1A1和COL3A1、NOX1和NOX4表达的变化。结果:①沉默SSBP1,P53蛋白合成减少,并使得AngⅡ诱导的MCFs增殖和胶原蛋白表达更加明显;上调SSBP1,P53蛋白合成增多,并使得AngⅡ诱导的MCFs增殖和胶原蛋白表达受到抑制。②调控SSBP1不影响Nox1和Nox4表达。③上调P53可抑制MCFs增殖和胶原蛋白表达。全文结论:1.AngⅡ诱导的MF中SSBP1表达受抑制。2.缬沙坦能够抑制胶原蛋白表达和ROS激活,通过增加SSBP1表达拮抗AngⅡ诱导的MF。3.SSBP1是通过P53抑制AngⅡ诱导的MCFs增殖和胶原蛋白表达。4.SSBP1抑制MF与ROS途径无关。
朱静华[8]（2020）在《芪苈强心胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠心室重构的作用及机制研究》文中研究表明目的:利用血管紧张素Ⅱ灌注方式建立小鼠高血压心室重构模型,探讨芪苈强心胶囊对小鼠高血压心肌肥厚及心肌纤维化的作用及机制。材料与方法:应用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）皮下埋泵方式建立高血压心室重构小鼠模型。将8-10周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,每组10只,分别是空白对照组（蒸馏水灌胃）、模型组（蒸馏水灌胃）、中药组（芪苈强心1g/kg·d灌胃）、西药组（卡托普利10mg/kg·d灌胃）,给予AngⅡ刺激同时给予药物干预。每周检测小鼠血压;于埋泵前、埋泵2周、埋泵4周检测小鼠心功能;HE染色法观察各组小鼠心脏组织形态;Masson和天狼猩红染色观察各组小鼠心肌纤维化情况;免疫组化法检测各组小鼠心脏中CD68、IL-6、collage III表达情况;RT-PCR方法检测各组小鼠心脏中ANP、BNP的m RNA表达;Western blot检测各组小鼠心肌组织中AT1R、ERK1/2、p-ERK1/2、TGF-β1、P-Smad3蛋白水平的表达。结果:1.血压及心功能情况AngⅡ干预1周后,模型组小鼠血压较空白对照组显着升高,中药组与西药组小鼠血压较模型组显着降低。AngⅡ干预2周后,模型组小鼠左室射血分数（EF值）较空白对照组显着降低,中药组与西药组小鼠EF值较模型组显着升高,左室短轴缩短指数（FS）值与EF值的趋势一致。2.心脏肥大情况HE染色可见模型组较空白对照组小鼠心脏明显增大,心重、心重与体重比值亦支持上述结果,中药组与西药组小鼠与模型组小鼠比较心脏肥大不明显,心重、心重与体重比值亦支持上述结果。模型组中小鼠心肌中ANP、BNP的m RNA水平较空白对照组显着增加,中药组与西药组小鼠心肌中ANP、BNP的m RNA水平较模型组显着降低。3.心肌纤维化情况Masson及天狼猩红染色可见模型组小鼠心肌纤维化较空白对照组明显增加,中药组与西药组小鼠与模型组小鼠相比心肌纤维化减轻。免疫组化染色可见,与空白对照组相比模型组collage III的表达增加,中药组与西药组与模型组相比较仅见少量collage III的表达。4.心肌组织中的炎症情况免疫组化染色观察各组小鼠心肌中CD68、IL-6表达,与空白对照组相比模型组小鼠心肌中散在较多棕黄色颗粒状物,分布广泛,中药组与西药组仅见少量棕黄色颗粒。5.心肌组织中AT1R、ERK1/2、p-ERK1/2、TGF-β1、P-Smad 3蛋白表达情况Western blot显示,与空白对照组相比,模型组小鼠心肌组织AT1R、p-ERK1/2、TGF-β1、P-Smad 3蛋白表达升高;与模型组相比,中药组与西药组AT1R、p-ERK1/2、TGF-β1、P-Smad 3蛋白表达下降。结论:1.芪苈强心胶囊能改善小鼠心肌肥厚和心肌纤维化,其作用与卡托普利相当。2.芪苈强心胶囊可能通过下调AT1R,进而降低P-ERK1/2活化改善AngⅡ诱导的小鼠心肌肥大,亦通过下调AT1R,抑制TGF-β1/Smad3通路的激活改善AngⅡ诱导的小鼠心肌纤维化。
毛昕菁[9]（2020）在《基于“心肾相关”理论探讨潜阳育阴方对高血压肾损伤大鼠的心脏保护作用》文中进行了进一步梳理目的:基于中医心肾相关的理论,从动物实验角度,结合高血压肾损伤和高血压心脏损害的机制,探讨潜阳育阴方对于心脏的保护作用。方法:将40只雄性自发性高血压（SHR）大鼠随机分为模型对照组、缬沙坦组、潜阳育阴高剂量组、潜阳育阴低剂量组4组,每组10只,切除左肾,并通过osmotic微型泵（ALZA,USA）予以AngⅡ 1.46mg/kg/d皮下输注2周建立高血压肾损伤大鼠模型。10只WKY大鼠作为正常对照组,不作处理。造模成功后,潜阳育阴低剂量组、潜阳育阴高剂量组分别予以潜阳育阴方悬液2.1、8.4g/（kg·d）灌胃处理,缬沙坦组予以缬沙坦悬液27mg/（kg-d）灌胃处理,模型组和正常对照组予以与治疗组等体积的生理盐水灌胃处理,共8周。心超观察大鼠心脏结构,指标包括射血分数（EF）,短轴缩短率（FS）,舒张期室间隔厚度（IVSd）,左室舒张末期内径（LVIDd）,舒张期左室后壁厚度（LVPWd）,收缩末期左室后壁厚度（LVPWs）,相对室壁厚度（RWT）,左室质量（LVs Mass）。2D-STI观察大鼠心脏结构,指标包括心尖两腔总应变（GLS-A2C）,心尖四腔总应变（GLS-A4C）,心尖长轴总应变（GLS-LAX）,左心室整体纵向应变（GLS-Avg）,左心室整体周向应变（GCS）。Masson染色观察大鼠心脏组织损害程度。结果:1.潜阳育阴方可以降低高血压肾损伤大鼠的血压（收缩压和舒张压）（P<0.01或P<0.05）,且高剂量效果优于低剂量。2.潜阳育阴方可以改善高血压肾损伤大鼠的EF、FS（P<0.05）,改善左心室收缩功能,保持心脏功能正常,且高剂量效果优于低剂量。3.潜阳育阴方可以改善高血压肾损伤大鼠的IVSd、LVPWd、LVPWs、RWT、LVs Mass（P<0.01或P<0.05）,保持心脏结构完整,且高剂量效果优于低剂量。潜阳育阴方无法改善LVIDd（P>0.05）。4.潜阳育阴方可以改善高血压肾损伤大鼠的GLS-LAX、GLS-A4C、GLS-A2C、GLS-Avg、GCS（P<0.01或P<0.05）,改善左室纵向收缩功能,且高剂量效果优于低剂量。5.潜阳育阴方可以改善高血压肾损伤大鼠的心脏病理情况,减轻心肌纤维化程度,具有心脏保护作用,且高剂量效果优于低剂量。结论:潜阳育阴方可以降低高血压肾损伤大鼠的心脏损害的程度,改善左室收缩功能,保持心脏结构完整、心脏功能正常,同时能够降低血压（收缩压和舒张压）,且潜阳育阴高剂量组的疗效远胜于潜阳育阴低剂量组。
辛博[10]（2019）在《Nur77对心肌成纤维细胞功能影响及野黄芩苷调控Nur77抑制心肌纤维化相关研究》文中研究指明心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）是以心肌间质或血管周围细胞外基质（extracellular matrix,ECM）过度沉积为主要特征的一种病理反应。研究表明,心肌纤维化是大多数心血管疾病（Cardiovascular disease,CVD）发展到终末期的必然生理过程。因此,阻断或逆转心肌纤维化是治疗心血管疾病的重要目标之一。心肌成纤维细胞（Cardiac fibroblasts,CFs）是产生细胞外基质的中心细胞,其激活是心肌纤维化发生的中心环节,在心肌纤维化过程中发挥关键的作用。众多细胞因子、信号通路参与调控心肌成纤维细胞的激活,但其激活的确切机制仍在探索过程中。近年来,国内外学者开始关注核转录因子在心肌纤维化发生发展过程中的作用。最新研究表明,孤儿核受体Nur77可负反馈调控多种实验性纤维化疾病,这也提示Nur77可能成为抗心肌纤维化的潜在靶点。野黄芩苷是一种黄酮类单体,具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎等药理活性。有报道显示野黄芩苷可以通过ERK信号通路抑制心肌梗死所致的大鼠心肌纤维化,但其抗心肌纤维化相关的细胞及分子机制尚未完全明确。本课题组前期研究发现,金丝桃苷可通过ERK/CREB通路诱导Nur77的表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,同时ERK信号通路也是调控Nur77表达的重要信号通路之一。我们的预实验结果显示:（1）小鼠心肌纤维化组织和体外激活的原代心肌成纤维细胞中Nur77表达增加。（2）野黄芩苷可诱导正常小鼠心肌组织和未激活的原代心肌成纤维细胞中Nur77表达增加。基于文献研究和预实验结果,我们提出假设:（1）孤儿核受体Nur77可能参与调控心肌成纤维细胞功能及心肌纤维化的发生发展。（2）野黄芩苷通过调控Nur77发挥抗心肌纤维化作用。并开展以下研究:目的:（1）探讨调控Nur77对心肌成纤维细胞功能的影响。（2）探究野黄芩苷调控Nur77对心肌成纤维细胞功能和心肌纤维化的作用及相关分子机制。为寻找抗心肌纤维化的新靶点和开发抗心肌纤维化药物提供新思路。方法:（1）ANG Ⅱ诱导小鼠心肌纤维化,同时ANG Ⅱ（1μM）刺激原代心肌成纤维细胞。Western bolt、RT-q PCR、免疫组化和免疫荧光法检测组织和细胞中α-smooth muscle actin（α-SMA）,Collagen Ⅰ（Col Ⅰ）和Collagen Ⅲ（Col Ⅲ）以及NR4A家族m RNA和蛋白表达。（2）构建Ad Nur77腺病毒和Nur77 siRNA,分别转染原代心肌成纤维细胞。CCK-8和细胞计数法、Transwell和划痕实验、Western blot、RT-qPCR以及流式细胞仪分别检测过表达或敲减Nur77对原代心肌成纤维细胞增殖、迁移、α-SMA表达和胶原合成以及细胞凋亡、细胞周期的影响。（3）ANG Ⅱ和不同浓度SCU分别刺激正常和敲减Nur77的原代心肌成纤维细胞。CCK-8法、Transwell小室实验、免疫荧光法、RT-qPCR法分别检测原代CFs增殖、迁移、表型转化及纤维化相关基因表达的变化。Western blot检测细胞中Nur77及p-Nur77蛋白水平。对细胞给予MAPK抑制剂刺激,Western blot检测细胞中Nur77及p-Nur77蛋白水平。ANG Ⅱ和不同浓度SCU分别刺激正常和敲减Nur77的原代心肌成纤维细胞,Western blot检测细胞中ERK1/2和p38 MAPK总蛋白和磷酸化蛋白水平。Western blot检测敲减Nur77后细胞中ERK1/2和p38 MAPK总蛋白和磷酸化蛋白水平。（4）（1）雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:空白对照组、ANG Ⅱ模型组、ANG Ⅱ+野黄芩苷组、野黄芩苷对照组。HE和Masson染色检测心肌组织病理变化和胶原沉积;Western blot、RT-q PCR和免疫组织化学法检测心肌组织中Col Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMA和Nur77以及p-Nur77的蛋白或m RNA水平。（2）对小鼠心肌原位注射Nur77干扰慢病毒或NC对照慢病毒,同时建立ANG Ⅱ诱导的实验性小鼠心肌纤维化模型。Masson染色检测心肌组织胶原沉积;Western blot、RT-q PCR和免疫组织化学法检测心肌组织中Col Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMA以及Nur77和p-Nur77的m RNA或蛋白水平。结果:（1）心肌纤维化组织和ANG Ⅱ激活的原代心肌成纤维细胞中Nur77表达增加。（2）原代心肌成纤维细胞过表达Nur77后,细胞增殖能力下降,同时迁移能力减弱;PCNA,Cyclin D1,Col Ⅰ,Col Ⅲ和α-SMA蛋白水平均降低;对细胞凋亡无显着影响。原代心肌成纤维细胞敲减Nur77后,增殖能力和迁移能力增强;纤维化相关基因Col Ⅰ、Col Ⅲ和α-SMA m RNA表达增加;细胞凋亡数减少,同时G0-G1期细胞数减少,S期和G2期细胞数增多。（3）（1）野黄芩苷抑制ANG Ⅱ诱导的原代心肌成纤维细胞增殖,迁移和表型转化,减少Col Ⅰ,Col Ⅲ和α-SMA m RNA表达。Nur77敲减后减弱了以上作用;（2）50μM的野黄芩苷刺激细胞12 hr时,Nur77水平最高;野黄芩苷对p-Nur77水平无影响;（3）野黄芩苷可抑制ANG Ⅱ诱导的Nur77磷酸化;（4）ERK1/2和p38 MAPK抑制剂能抑制ANG Ⅱ和野黄芩苷诱导的细胞中Nur77表达;（4）野黄芩苷可呈剂量依赖抑制ANG Ⅱ刺激的ERK1/2和p38 MAPK磷酸化;Nur77敲减后,野黄芩苷抑制ERK1/2和p38 MAPK磷酸化作用仍未减弱。（4）（1）野黄芩苷可缓解ANG Ⅱ诱导的小鼠心肌纤维化,并抑制Col Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMA蛋白和m RNA表达;Nur77敲减后,上述作用减弱;（2）野黄芩苷降低了纤维化心肌组织中p-Nur77的水平。SCU抑制ANG Ⅱ刺激的纤维化心肌组织中ERK1/2和p38 MAPK磷酸化。结论:（1）ANG Ⅱ诱导的小鼠心肌纤维化组织和ANG Ⅱ激活的原代心肌成纤维细胞中Nur77高表达。（2）Nur77可负反馈调控原代心肌成纤维细胞的功能。（3）野黄芩苷可抑制原代心肌成纤维细胞的增殖、迁移、表型转化,减少ECM合成。（4）野黄芩苷可抑制ANG Ⅱ诱导的小鼠心肌纤维化。（5）野黄芩苷调控心肌成纤维细胞功能、抑制心肌纤维化作用的分子机制是通过ERK1/2/p38 MAPK通路改变Nur77表达量,抑制Nur77磷酸化来实现的。综上,本研究初步阐明了Nur77对心肌成纤维细胞功能的调控作用,同时部分阐明了野黄芩苷调控Nur77抑制心肌成纤维细胞激活和抗小鼠心肌纤维化作用的相关分子机制。这些结果为全面了解心肌纤维化发病机制和开发抗心肌纤维化药物提供新思路。
二、高血压心肌纤维化的影响因素和药物逆转（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、高血压心肌纤维化的影响因素和药物逆转（论文提纲范文）
（1）芪参六味方对自发性高血压大鼠心肌纤维化作用机制的探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 高血压心肌纤维化机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中医药治疗高血压研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）甲状旁腺激素与盐交互作用在左室肥厚中的作用及机制（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与设备 |
| 1 实验方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 动物分组 |
| 1.3 胶囊渗透压泵预处理 |
| 1.4 手术植入胶囊渗透压泵及给药 |
| 1.5 无创血压测量 |
| 1.6 心脏指标测量 |
| 1.7 心肌HE染色 |
| 1.8 免疫组化 |
| 1.9 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 PTH及不同浓度盐摄入对大鼠血压的影响 |
| 2.2 PTH及不同浓度盐摄入对大鼠HW、HMI、LVPWT的影响 |
| 2.3 PTH及不同浓度盐摄入对大鼠心肌组织形态学的影响 |
| 2.4 PTH及不同浓度盐摄入对心肌纤维化标记物III型胶原蛋白表达影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 PTH与高血压 |
| 3.2 盐摄入与高血压 |
| 3.3 左室肥厚与心肌纤维化 |
| 3.4 卡托普利干预对血压及左室肥厚的影响 |
| 4 优势、不足与展望 |
| 5 结论 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 甲状旁腺激素在左室肥厚中的作用及机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（3）基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 心房颤动的中医研究进展 |
| 1. 病名沿革 |
| 2. 心房颤动的脉象 |
| 3. 房颤的中医病因 |
| 4. 房颤的中医病机 |
| 5. 房颤的辨证分型 |
| 6. 中医对房颤的治疗 |
| 7. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 高血压房颤的发生机制与药物防治靶点 |
| 1. 高血压与房颤的患病情况 |
| 2. 高血压对房颤的影响因素 |
| 3. 高血压房颤的病理生理学机制 |
| 4. 心房纤维化是导致心律失常的心房结构重构的重要特点 |
| 5. 高血压房颤心房纤维化的机制 |
| 6. 高血压房颤的药物干预靶点 |
| 7. 中药可能的防治靶点 |
| 8. 小结 |
| 参考文献 |
| 第一部分 临床文献研究 |
| 前言 |
| 益气活血法治疗房颤的Meta分析 |
| 目的 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Adropin在高血压患者血清中的表达水平变化 |
| 3.2 高血压患者一般临床资料 |
| 3.3 Adropin水平与左室质量指数的相关性研究 |
| 3.4 Adropin水平在高血压左室肥厚中的诊断价值分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 重组Adropin对自发性高血压大鼠心肌重构的影响 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SHR大鼠心肌重构的发生及Adropin表达水平的下降 |
| 3.2 Adropin处理延缓高血压大鼠心肌重构的进展 |
| 3.3 Adropin处理抑制SHR大鼠心肌组织炎症水平的影响 |
| 3.4 Adropin处理降低SHR大鼠心肌组织氧化应激水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 Adropin在小鼠病理性心肌重构中的作用及机制 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠病理性心肌重构的形成及Adropin表达水平的下降 |
| 3.2 Adropin处理延缓TAC诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.3 Adropin处理延缓Ang Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.4 Adropin敲除增加Ang Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.5 Nrf2 过表达减轻Adropin缺失加重Ang Ⅱ模型小鼠病理性心肌重构的程度 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四部分 Adropin在 Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用及其机制 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Ang Ⅱ对 CFs细胞Adropin表达的影响 |
| 3.2 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞Adropin蛋白表达变化的影响 |
| 3.3 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞增殖的影响 |
| 3.4 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞胶原合成的影响 |
| 3.5 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞氧化应激的影响 |
| 3.6 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞引起Nrf2/HO-1 信号通路变化的影响 |
| 3.7 Adropin增强Ang Ⅱ刺激CFs细胞中的Nrf2 转录活性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 Adropin:一种新的心脏疾病生物标记物 |
| 参考文献 |
（5）基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌纤维化的现代研究 |
| 1 心肌纤维化概念 |
| 2 心肌纤维化发病机制 |
| 3 心肌纤维化的现代治疗 |
| 4 小结 |
| 综述二 心肌纤维化的中医研究进展 |
| 1 从中医角度探讨心肌纤维化病因病机 |
| 2 毒伤血络学说 |
| 3 中医药治疗心肌纤维化 |
| 4 解毒通络方药的现代研究 |
| 5 小结 |
| 实验研究 |
| 第一章 心肌纤维化大鼠模型的构建 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 解毒通络方对大鼠心肌纤维化抑制作用的体内研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 解毒通络方对心肌成纤维细胞TGF-β1/LIMK1信号通路的研究 |
| 1 实验材料 |
| 第一部分 解毒通络方对大鼠体外细胞的作用及机制 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 第二部分 解毒通络方抑制大鼠成纤维细胞增殖机制 |
| 4 实验方法 |
| 5 实验结果 |
| 6 讨论 |
| 7 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（6）电针对SHR大鼠心肌保护及对心肌差异蛋白表达影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 理论研究 |
| 第一节 中医对高血压心肌肥厚的研究现状 |
| 一、中医对高血压心肌肥厚的认识 |
| 二、高血压心肌肥厚的病因病机 |
| 三、针灸治疗高血压心肌肥厚 |
| 第二节 现代医学治疗自发性高血压肥厚性心肌病的研究现状 |
| 一、高血压心肌肥厚的生理病理 |
| 二、高血压肥厚性心肌病的发病机制 |
| 三、高血压心肌肥厚的治疗 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 电针对自发性高血压大鼠心肌的保护作用研究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 电针对自发性高血压大鼠心肌差异蛋白表达的影响研究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间论文发表情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（7）SSBP1通过P53抑制AngⅡ诱导的心肌纤维化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1. 心肌纤维化与肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的关系 |
| 2. 心肌纤维化的调控性细胞因子 |
| 3. 氧化应激和炎性因子 |
| 4. 细胞内的钙离子 |
| 5. 细胞凋亡与心肌纤维化的关系 |
| 6. SSBP1与心肌纤维化的关系 |
| 7. P53与心肌纤维化的关系 |
| 第二章 制备Ang Ⅱ诱导的小鼠心肌纤维化模型 |
| 2.1 实验方法 |
| 2.2 统计方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 缬沙坦通过SSBP1抑制Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化主要试剂 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.2 统计方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 结论 |
| 第四章 SSBP1和P53对AngⅡ刺激的MCFs增殖能力和胶原蛋白合成的影响 |
| 4.1 实验方法 |
| 4.2 统计方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 缩略词 |
| 读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（8）芪苈强心胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠心室重构的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 芪苈强心胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌肥厚及心肌纤维化的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 芪苈强心胶囊对高血压小鼠ERK1/2及TGF-β1/Smad3 信号通路的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 芪苈强心胶囊成分药理学研究 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（9）基于“心肾相关”理论探讨潜阳育阴方对高血压肾损伤大鼠的心脏保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 中医“心肾相关”理论研究 |
| 1.1 概念 |
| 1.2 历史沿革及理论内涵 |
| 1.3 治则治法 |
| 2. 高血压心脏损害的中医研究 |
| 2.1 中医病名 |
| 2.2 中医病因病机的研究 |
| 2.3 中医辨证分型治疗 |
| 3. 高血压心脏损害的现代医学研究 |
| 3.1 定义及诊断标准 |
| 3.2 病理机制 |
| 3.3 临床治疗 |
| 4. 潜阳育阴方的前期研究 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 实验动物及药物 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 设计和分组 |
| 1.4 血压测量 |
| 1.5 肾功能指标测定 |
| 1.6 心脏超声观察大鼠心脏结构 |
| 1.7 2D-STI观察大鼠心脏结构 |
| 1.8 处死与取材 |
| 1.9 石蜡切片制备 |
| 1.10 Masson染色观察大鼠心脏组织纤维化程度 |
| 1.11 图像采集和分析 |
| 1.12 统计学方法 |
| 2. 结果 |
| 2.1 给药后各组大鼠血压及心脏重量比较 |
| 2.2 给药后各组大鼠心功能指标数据比较 |
| 2.3 给药后各组大鼠结构性指标数据比较 |
| 2.4 给药后各组大鼠GLS和GCS比较 |
| 2.5 各组大鼠病理结果比较 |
| 第三部分 讨论 |
| 1. 理论探讨及组方分析 |
| 2. 实验探讨 |
| 3. 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（10）Nur77对心肌成纤维细胞功能影响及野黄芩苷调控Nur77抑制心肌纤维化相关研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略语对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 Nur77在心肌纤维化组织及体外激活的原代心肌成纤维细胞中的表达情况 |
| 1.1 材料与仪器 |
| 1.1.1 实验材料 |
| 1.1.2 实验仪器 |
| 1.1.3 实验动物 |
| 1.1.4 细胞来源 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 ANGⅡ诱导的小鼠心肌纤维化模型建立 |
| 1.2.2 原代心肌成纤维细胞分离培养及鉴定 |
| 1.2.3 组织石蜡包埋切片 |
| 1.2.4 Masson’s trichrome染色检测心肌组织胶原沉积 |
| 1.2.5 免疫组织化学检测蛋白表达 |
| 1.2.6 免疫荧光检测组织蛋白表达 |
| 1.2.7 组织总RNA提取 |
| 1.2.8 细胞总RNA提取 |
| 1.2.9 逆转录 |
| 1.2.10 RT-q PCR |
| 1.2.11 Western blot实验 |
| 1.2.12 免疫荧光 |
| 1.2.13 统计学处理 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 Nur77在小鼠纤维化心肌组织中的表达 |
| 1.3.2 Nur77在体外原代心肌成纤维细胞中的表达情况 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 调控Nur77对心肌成纤维细胞功能的影响 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 细胞来源 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 原代心肌成纤维细胞分离培养 |
| 2.2.2 293T细胞培养 |
| 2.2.3 腺病毒Ad Nur77、Ad NC扩增 |
| 2.2.4 腺病毒感染原代心肌成纤维细胞 |
| 2.2.5 si Nur77 RNA转染原代心肌成纤维细胞 |
| 2.2.6 细胞总RNA提取、逆转录及RT-q PCR |
| 2.2.7 Western blot实验 |
| 2.2.8 细胞计数法检测过表达Nur77对原代心肌成纤维细胞增殖的影响 |
| 2.2.9 CCK-8 法检测过表达和敲减Nur77 对原代心肌成纤维细胞增殖的影响 |
| 2.2.10 划痕法检测过表达或敲减Nur77对原代心肌成纤维细胞迁移的影响 |
| 2.2.11 Transwell法检测过表达或敲减Nur77对原代心肌成纤维细胞迁移的影响 |
| 2.2.12 细胞周期测定 |
| 2.2.13 细胞凋亡测定 |
| 2.2.14 统计学处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 过表达Nur77抑制原代心肌成纤维细胞增殖 |
| 2.3.2 过表达Nur77抑制ANG Ⅱ诱导的细胞周期相关蛋白表达 |
| 2.3.3 过表达Nur77抑制ANG Ⅱ诱导的原代心肌成纤维细胞表型转化和胶原合成 |
| 2.3.4 过表达Nur77抑制ANG Ⅱ诱导的原代心肌成纤维细胞的迁移 |
| 2.3.5 过表达Nur77对原代心肌成纤维细胞凋亡数无影响 |
| 2.3.6 敲减Nur77促进原代心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达 |
| 2.3.7 敲减Nur77促进原代心肌成纤维细胞的增殖 |
| 2.3.8 敲减Nur77促进原代心肌成纤维细胞的迁移 |
| 2.3.9 敲减Nur77改变原代心肌成纤维细胞周期 |
| 2.3.10 敲减Nur77抑制原代心肌成纤维细胞凋亡 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 野黄芩苷调控Nur77对心肌成纤维细胞功能影响及相关机制研究 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 细胞来源 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 原代心肌成纤维细胞分离培养 |
| 3.2.2 siRNA转染原代心肌成纤维细胞 |
| 3.2.3 细胞总RNA提取、逆转录 |
| 3.2.4 RT-qPCR实验 |
| 3.2.5 Western blot实验 |
| 3.2.6 CCK-8细胞增殖实验 |
| 3.2.7 Transwell实验 |
| 3.2.8 细胞免疫荧光 |
| 3.2.9 统计学处理 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 野黄芩苷调控Nur77抑制原代心肌成纤维细胞的增殖 |
| 3.3.2 野黄芩苷调控Nur77抑制原代心肌成纤维细胞的迁移 |
| 3.3.3 野黄芩苷调控Nur77抑制原代心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达 |
| 3.3.4 野黄芩苷调控Nur77抑制原代心肌成纤维细胞表型转化 |
| 3.3.5 野黄芩苷对原代心肌成纤维细胞中Nur77及其磷酸化蛋白表达的调控 |
| 3.3.6 野黄芩苷通过ERK1/2/p38 MAPK信号通路调控Nur77 及其磷酸化蛋白表达 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 野黄芩苷调控Nur77抑制ANG Ⅱ诱导的小鼠心肌纤维化 |
| 4.1 .实验材料与仪器 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 实验动物 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 小鼠心肌纤维化动物模型的制备 |
| 4.2.2 Masson’s trichrome染色 |
| 4.2.3 HE染色 |
| 4.2.4 免疫组织化学检测蛋白表达 |
| 4.2.5 组织总RNA提取、逆转录和RT-q PCR |
| 4.2.6 胶原面积半定量分析 |
| 4.2.7 Western blot实验 |
| 4.2.8 统计学处理 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 野黄芩苷调控Nur77 抑制ANG Ⅱ诱导的小鼠心肌组织中胶原沉积 |
| 4.3.2 胶原染色面积测定 |
| 4.3.3 野黄芩苷调控Nur77 抑制ANG Ⅱ诱导的心肌纤维化相关基因表达 |
| 4.3.4 野黄芩苷调控Nur77 及其磷酸化蛋白抑制ANG Ⅱ诱导的心肌纤维化 |
| 4.3.5 野黄芩苷对ANGⅡ激活的纤维化心肌组织中相关信号通路的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 创新点 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 综述 心肌纤维化发病机制及中医药防治研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 在校期间发表文章 |
| 附件 |
四、高血压心肌纤维化的影响因素和药物逆转（论文参考文献）
- [1]芪参六味方对自发性高血压大鼠心肌纤维化作用机制的探讨[D]. 董菲. 北京中医药大学, 2021(08)
- [2]甲状旁腺激素与盐交互作用在左室肥厚中的作用及机制[D]. 梁荃. 大理大学, 2021
- [3]基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制[D]. 马征. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究[D]. 胡欢. 南昌大学, 2021(01)
- [5]基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用[D]. 宋晶. 长春中医药大学, 2020(08)
- [6]电针对SHR大鼠心肌保护及对心肌差异蛋白表达影响研究[D]. 赖鑫. 广州中医药大学, 2020(06)
- [7]SSBP1通过P53抑制AngⅡ诱导的心肌纤维化[D]. 田海萍. 南方医科大学, 2020(01)
- [8]芪苈强心胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠心室重构的作用及机制研究[D]. 朱静华. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [9]基于“心肾相关”理论探讨潜阳育阴方对高血压肾损伤大鼠的心脏保护作用[D]. 毛昕菁. 南京中医药大学, 2020(08)
- [10]Nur77对心肌成纤维细胞功能影响及野黄芩苷调控Nur77抑制心肌纤维化相关研究[D]. 辛博. 上海中医药大学, 2019(03)