一、急性心肌梗死的细胞保护（论文文献综述）
翟淼浡,杜鑫,董彬昌,徐会圃[1]（2022）在《缺氧诱导因子-1ɑ在缺血性心脏病治疗中的研究进展》文中进行了进一步梳理缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1, HIF-1）是一种广泛表达于多种细胞内的异源二聚体转录因子, 由HIF-1ɑ和HIF-1β两个亚基组成, 其中HIF-1ɑ为其活性亚基, 在组织细胞对缺氧环境的适应过程中起重要调节作用。目前研究表明, HIF-1ɑ还在心肌代谢、缺氧条件下的心肌保护、血管生成、动脉粥样硬化等方面扮演重要角色, 将有助于未来设计更有效的心肌保护治疗方案。同时, HIF-1ɑ在急性心肌梗死早期表达升高, 是一种潜在的心肌损伤标志物, 可能作为急性心肌梗死诊断的辅助指标。
宋欣丽[2]（2021）在《龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价》文中指出研究目的1.通过建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,观察龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用;并且探讨其保护作用是否与线粒体功能障碍以及内质网应激有关。2.通过Meta分析方法对中成药治疗心肌缺血再灌注损伤疗效进行系统评价,为临床使用中成药治疗心肌缺血再灌注损伤治疗提供循证医学依据。研究方法1.实验研究:采用随机数字表法将Wistar大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组,通过结扎左前降支30min后复灌,构建大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,假手术组、模型组予生理盐水灌胃,龙牙楤木总皂苷剂量组分别按50、100、200mg/（kg·d）灌胃处理。2,3,5—氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色法测定大鼠心肌梗死面积,酶联免疫法检测各组大鼠肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白T（cTnT）的含量,TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）染色法观察心肌组织细胞凋亡指数;使用透射电镜观察心肌组织中线粒体结构和形态变化,提取各组大鼠心肌组织线粒体,活性氧荧光（DCFH-DA）探针法观察线粒体活性氧簇（Reactive Oxygen Species,ROS）的生成变化、JC-1荧光探针法观察线粒体膜电位变化、比色法观察腺嘌呤核苷三磷酸（Adenosine Triphosphate,ATP）的形成及琥珀酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase,SDH）活性变化情况。免疫组织化学检测法、蛋白质印迹法（Western blot）法检测内质网经典信号通路PERK-eIF2α通路中蛋白激酶R样内质网激酶（proteinkinase R-like ER kinase,PERK）、p-蛋白激酶R 样内质网激酶（p-protein kinase R-like ER kinase,p-PERK）、真核起始因子 2（eukaryotic initiation factor 2,eIF2α）、p-真核起始因子 2（p-eukaryotic initiation factor 2,p-eIF2α）相关蛋白的表达,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测PERK、eIF2α中mRNA的含量。2.临床研究:通过全面搜索并筛选数据库中自建库到2021年1月1日以来发表的关于中成药治疗心肌缺血再灌注损伤患者的随机临床对照试验,对相关结局指标利用RevMan5.3软件进行系统评价。评价指标包括心肌损伤标志物:肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTNI）、肌钙蛋白T（cTNT）、再灌注心律失常发生率、不良事件发生率、左室射血分数（LVEF）、高敏C-反应蛋白（hs-CRP）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）等。研究结果实验研究:实验一:TTC染色结果显示,sham组、I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组心肌梗死面积占总心肌面积百分比分别为:0%、72%、56%、52%、31%。其中,与sham组相比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高组心肌梗死面积所占比例明显增加,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组提示差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;龙牙楤木总皂苷各剂量组和I/R组相比较,从各组心肌梗死面积所占百分比可见,龙牙楤木总皂苷各组梗死面积比值均低于I/R组,并且随着龙牙楤木总皂苷剂量的增加,心肌梗死面积所占比值逐渐降低,统计学分析显示,龙牙楤木总皂苷低剂量组统计结果显示无统计学差异（P>0.05）;龙牙楤木总皂苷中剂量组结果显示具有统计学意义（P<0.05）,而龙牙楤木总皂苷高剂量组结果提示具有显着统计学意义（P<0.01）。TUNEL染色结果显示,从颜色上看,sham组:大部分心肌细胞的细胞核呈现为蓝色;I/R组:大部分心肌细胞的细胞核呈现为黄褐色;龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量黄褐色细胞核所占比例介于sham组和I/R组之间,但呈逐渐减少的趋势。sham组细胞凋亡很不明显,可见存在少量散在凋亡细胞;具体的凋亡细胞百分比见下表。与sham组比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组大鼠心肌细胞凋亡百分比则明显增加,阳性凋亡细胞数明显升高,统计学分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组提示差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异具有统计学意义（P<0.05）,中、高剂量组差异具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01）。酶联免疫法结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高CK-MB、cTnT含量,均有所显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01、P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异无明显统计学意义（P>0.05;P>0.05）,龙牙楤木总皂苷中剂量组差异具有统计学意义（P<0.05;P<0.05）,龙牙楤木总皂苷高剂量组差异具有显着统计学意义（P<0.01;P<0.01）。实验二:透射电镜结果显示:sham组心肌细胞大小及形态基本规则,肌原纤维排列规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊排列密集、结构清晰。I/R组心肌细胞大小及形态有较大差异,可见萎缩及坏死肌细胞,肌原纤维排列紊乱;肌细胞内线粒体分布不均,部分聚集,线粒体大小及形态有较大差异,内脊大多模糊。龙牙楤木总皂苷低剂量组心肌细胞形态有一定差异,肌原纤维排列不规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体肿胀,内脊扩张、大多结构模糊;中剂量组心肌细胞大小及形态稍不规则,细胞核呈长梭形,肌原纤维排列稍不规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊部分结构清晰、部分模糊;高剂量组心肌细胞大小及形态基本规则,肌原纤维排列规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊排列密集、结构清晰。DCFH-DA探针法检测ROS水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高ROS水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,ROS水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。比色法观察ATP水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高ATP水平均有所降低,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,ATP水平呈现出逐步增高的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;JC-1荧光探针法观察线粒体膜电位水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高线粒体膜电位水平水平均有所降低,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,线粒体膜电位水平水平呈现出逐步增高的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;比色法观察SDH活性水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高SDH活性水平均有所升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,SDH活性水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。实验三:Western blot方法检测心肌组织中PERK、eIF2α的表达。结果显示:与sham组相比,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达没有明显变化,统计学分析结果显示,差异均不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。而与I/R组相比较,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK的表达也没有明显改变,统计学分析显示,差异也不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。Western blot方法检测心肌组织中p-PERK、p-eIF2α的表达结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-PERK、p-eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01、P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-PERK、p-eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01,P<0.01）。qRT-PCR 方法检测心肌组织中PERK、eIF2αmRNA的表达,结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高PERK、eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01;P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,PERK、eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01,P<0.01）。免疫组化结果显示:与 sham组相比,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达没有明显改变,统计学分析结果显示,差异均不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。而与I/R组相比较,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达也没有太大差异,统计学分析显示,差异也不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）。免疫组化方法检测心肌组织中p-PERK的表达。结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-PERK表达水平均显着升高,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-PERK表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。免疫组化方法检测心肌组织中p-eIF2α的表达。结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有统计学意义（P<0.05）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷中、高剂量组差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.05）,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05）。临床研究:最终纳入研究96项,中文文献92篇,英文文献4篇。Meta分析结果显示:CK-MB（SMD:-1.86,95%CI:[-2.33,-1.38],I2=95%,P<0.00001）;CK（SMD:-102.21,95%CI:[-129.34,-75.09],I2=100%,P<0.00001）;cTnI（SMD:-0.80,95%CI:[-0.97,-0.62],I2=99%,P<0.00001）,cTnT（SMD:-1.55,95%CI:[-1.8,-1.3],I2=100%,P<0.00001）;再灌注心律失常发生率（MD:-0.42,95%CI:[-0.34,-0.51],I2=45%,P<0.00001）;不良事件发生率（MD:-0.28,95%CI:[-0.22,-0.36],I2=12%,P<0.00001）;LVEF（SMD:-4.89,95%CI:[-3.9,-5.87],I2=86%,P<0.00001）;HsCRP（SMD:-5.04,95%CI:[-6.92,-3.16],I2=99%,P<0.00001）;MDA（SMD:-4.25,95%CI:[-5.22,-3.28],I2=99%,P<0.00001）;SOD（SMD:-15.26,95%CI:[-10.74,-19.78],I2=99%,P<0.00001）;NO（SMD:-15.26,95%CI:[-5.29,-7.51],I2=97%,P<0.00001）;LDH（MD:-13.83,95%CI:[-20.31,-7.35],I2=0%,P<0.00001）。研究结论1.龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,可减少心肌酶漏出,抑制心肌细胞凋亡,改善损伤心肌组织和线粒体结构,抑制SDH活性,同时降低ROS生成,减缓蛋白磷酸化,其机制可能与降低线粒体功能障碍、抑制内质网应激的过度激活有关。龙牙楤木总皂苷的保护作用与剂量呈正相关,发挥大鼠抗心肌缺血再灌注损伤作用的最适有效剂量在200mg/（kg·d）左右。2.中成药联合西医常规治疗心肌缺血再灌注损伤疗效肯定,尤其在降低再灌注性心律失常和不良事件发生率方面效果显着,但鉴于纳入研究数量偏少、样本量较小、方法学质量偏低,未来需要更多高质量的随机对照试验来证实。
王芳娟,龙雪蛟,胡巨龙[3]（2021）在《原花青素B2改善大鼠急性心肌梗死心室结构和功能的分子机制》文中进行了进一步梳理目的观察不同质量浓度的原花青素B2（PCB2）对大鼠急性心肌梗死后的心室结构和功能的影响及其分子机制。方法采用结扎左冠状动脉前降支方法建立大鼠急性心肌梗死模型作为Model组,以每天2、4、8 mg·Kg-1的原花青素B2诱导干预急性心肌梗死模型大鼠（PCB2-L组、PCB2-M组、PCB2-H组）,同时设立假手术组（Sham组）和阳性对照卡托普利（captopril,CAP）组。在连续处理28 d后检测各组大鼠的心功能指标;HE染色检测各组大鼠心肌组织变化和心肌横截面积（cross section area,CAS）变化;Real-time PCR检测大鼠心肌组织肥厚及纤维化标志物基因表达水平;Tunel法检测各组大鼠心肌梗死组织中心肌细胞凋亡;酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠外周血中心肌相关炎性因子水平变化。结果与Sham组相比,各PCB2干预组大鼠的LVSP均逐渐下降（P<0.05）,而LVEDP、+dp/dtmax和-dp/dtmax均逐渐上升（P<0.05）;各PCB2干预组心肌组织细胞均有不同程度的病理改善,其心肌细胞CAS值逐渐降低（P<0.05）;各PCB2干预组大鼠心肌细胞中ANP、BNP、β-MHC和胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、CTGF基因表达水平均逐渐降低（P<0.05）;而各PCB2干预组大鼠心肌细胞凋亡率均逐渐降低（P<0.05）;各PCB2干预组大鼠外周血中心肌相关炎性因子（VCAM-1、MCP-1、ICAM-1、TNF-α、IL-6）水平均逐渐降低（P<0.05）,接近于CAP作用组。结论 PCB2能够明显改善急性心肌梗死后心室重构和心肌功能,可通过抑制心肌细胞肥大、纤维化、凋亡发挥作用,并与其抑制心肌相关炎性因子有关。
许静[4]（2021）在《心梗致心衰潜在预警标志物发现及生脉注射液作用解析研究》文中研究说明研究背景心力衰竭（Heart Failure,HF）是多种心血管疾病的终末阶段,心梗是引起心衰常见因素之一,虽然心梗的治疗已经取得了一定的进展,但其患者仍是发生心衰的危险人群。心梗到心衰演变过程是一个动态、复杂、连锁的反应包括心肌细胞丢失、神经体液系统的激活及心脏重塑等,静态的观察心梗与心衰制约了对其疾病演变过程的解析。本研究关注于心梗致心衰演变过程的动态变化,通过对心梗致心衰的疾病表型与分子变化进行分析,有助于对心梗到心衰演变过程进行解析,揭示不同时间、不同环节之间的相互作用规律,为阐释心梗致心衰的分子机制奠定基础。心衰一旦发生很难挽回,因此“早发现、早治疗”在心力衰竭的治疗中至关重要。生物标志物有助于心衰患者的临床诊断与预后等,虽然目前对于心衰标志物的研究取得了一定进展,但是由于检测受限、对药物的不明反应、易受到非心源性因素的影响,限制了新型标志物的临床应用;除此之外,目前标志物主要关注于心衰诊断与预后,缺少提供早期预警信息的标志物,因此寻找在心梗致心衰演变过程中发挥早期预警作用的生物标志物具有重大意义。中药复方因疗效好、毒副作用小等特点广泛应用于临床治疗中,但是其成分复杂、又作用于复杂生命体,增加了中药复方作用机制与主要干预环节解析的难度。生脉注射液（SMI）来源于“生脉散”,其组方简单、疗效好,是急性、慢性以及难治性心力衰竭的推荐用药。但是目前对于生脉注射液的研究多集中于临床观察,对于心力衰竭尤其是心梗致心衰的主要作用环节还鲜有报道,因此开展生脉注射液作用机制及主要作用环节的研究是至关重要的。综上所述,针对心梗到心衰动态演变过程病机不明、缺乏早期预警标志物、生脉注射液在心梗致心衰演变过程干预环节不清的问题,本课题首先对心梗致心衰演变过程进行研究,其次对心梗致心衰潜在早期预警标志物进行筛选与验证,最后根据心梗致心衰动态分子特征谱对生脉注射液的主要干预环节进行研究并加以验证,期以服务临床寻找潜在早期预警标志物,阐明生脉注射液主要干预环节,为生脉注射液的临床精准应用提供研究策略。研究内容1.第一部分对心梗致心衰演变过程进行研究,利用大鼠左冠状动脉前降支结扎模型,对心梗后早期（心梗后1周）、中期（心梗后2、3周）及后期（心梗后4周）的血生化指标、心功能与病理改变进行分析;其次利用蛋白质组学技术对心梗后早期、中期及后期的大鼠左心室蛋白进行分析,并利用生物信息学进行富集分析,结合疾病表型与分子特征揭示心梗致心衰演变过程。2.第二部分对心梗致心衰潜在早期预警标志物进行分析及验证。首先对心梗后早期、中期及后期的差异表达蛋白进行分析,筛选出具有早期预警作用的候选标志物;其次利用ELISA法对心梗致心衰不同时间大鼠血清中候选标志物表达水平进行检测;最后在细胞水平对筛选出的标志物进行验证,基于Ang Ⅱ诱导H9c2细胞模型,采用免疫荧光法对候选标志物表达进行分析,并利用免疫荧光法对生脉注射液干预后潜在标志物的变化进行分析。3.第三部分对生脉注射液的主要干预环节进行研究。利用网络药理学对生脉注射液主要干预环节进行预测分析,并从动物水平与细胞水平确证生脉注射液的主要干预作用。动物层面采用大鼠左冠状动脉前降支结扎模型,从心功能与病理染色对生脉注射液进行药效学评价。利用ELISA法对生脉注射液干预后VCAN、COL1A1与P Ⅰ CP表达水平进行检测。细胞层面基于Ang Ⅱ诱导H9c2细胞模型,评估生脉注射液干预后对LDH、ROS及胞内Ca2+浓度的影响;利用免疫荧光法对ANP与CTGF表达水平进行分析。研究结果第一部分心梗致心衰演变过程研究1.疾病表型变化心梗致心衰演变过程中,心功能最先发生异常。超声心动分析结果表明,与假手术组相比,模型组大鼠在心梗后第1周射血分数及短轴缩短率显着下降,并且在第2周、第3及第4周持续下降,表明心肌收缩能力受损;与假手术组相比,模型组大鼠左心重比与心重比在第2周出现显着升高的现象,并且在第3周、第4周持续升高,表明在第2周发生心肌肥大现象并逐步加重;病理染色结果表明,模型组大鼠心肌组织在第3周与第4周出现心肌组织结构异常、并发生心肌纤维化损伤;血生化指标分析结果表明,模型组大鼠血清中的BNP与NT-proBNP在第4周显着性升高,表明心室负荷超载。2.蛋白质组学结果（1）通过蛋白质组学分析共鉴定到6127个蛋白。与假手术组相比,模型组在第1周有838个差异表达蛋白,第2周有716个差异表达蛋白,第3周有416个差异表达蛋白,第4周有781个差异表达蛋白,在心梗后第2周、第3周及第4周上调蛋白逐渐增多,表明心梗到心衰演变过程中大量蛋白表达上调。（2）第1周到第4周差异表达蛋白参与钙离子转运、氧化应激以及心脏收缩、心率调节等生物学过程;在第2周差异表达蛋白还与炎症反应、凋亡等生物学过程有关,第3周差异表达蛋白还与与肌原纤维产生相关功能,在第4周差异表达蛋白还与细胞外基质生成有关。第二部分心梗致心衰早期预警标志物的发现与验证1.潜在早期预警标志物的筛选结果基于非监督模式分析共筛选出33个在心梗致心衰演变过程中与疾病分型相关,并且具有早期预警意义的蛋白;利用COX单因素与多因素回归分析最后筛选出候选标志物。2.动物水平验证结果利用ELISA法对大鼠血清中候选标志物的表达水平进行检测,结果表明COL1A1与VCAN表达水平分别在第2周、第3周显着升高（p<0.05）,在第4周仍显着性的升高（p<0.05）。3.细胞水平验证结果（1）利用免疫荧光法检测10-3 μM至10-6 μM AngⅡ处理H9c2细胞24 h后目标蛋白的表达水平,结果表明VCAN的表达水平在10-3 μM至10-4 μM Ang Ⅱ处理后显着升高（p<0.05）,COL1A1在10-4 μM与10-5μM Ang Ⅱ处理后显着升高（p<0.05）。（2）利用生脉注射液进行干预,结果表明1 μL/4 mL到1μL/2 mL SMI干预后COL1A1的表达水平显着降低（p<0.05）。第三部分生脉注射液主要干预环节研究1.SMI主要干预环节预测分析结果共收集到生脉注射液化学成分190个、靶标1612个,构建“成分-靶标”网络,发现生脉注射液主要与钙离子通道调节、炎症反应、心肌收缩、氧化应激、心肌纤维化等生物学过程有关。通过与差异表达蛋白进行分析,结果表明生脉注射液与心梗后第1周、第2周及第3周显着相关,其中与心梗后第二周差异表达蛋白建立相互关系的靶标数量最多,对这些靶标进行富集分析,结果表明缓心肌纤维化损伤可能为生脉注射液在心梗致心衰演变过程中的主要干预环节之一。2.SMI主要干预环节验证结果在动物水平,SMI能够改善心梗后导致的心功能降低的情况、降低心肌纤维化损伤及COL1A1、VCAN与P Ⅰ CP的表达水平;在细胞水平,生脉注射液能够减缓Ang Ⅱ处理后的细胞损伤程度,降低ROS过量积累的损伤及胞内钙离子的浓度,并能够降低AngⅡ处理H9c2细胞引起的ANP与CTGF的表达水平的升高。结论1、通过对心梗致心衰演变过程进行研究,结果表明心梗到心衰演变过程中,心功能逐渐下降,心肌肥大、心肌纤维化及心室机械应力逐步加重;蛋白质组学分析表明心梗致心衰差异表达蛋白主要与细胞外基质生成、炎症等生物学过程有关。2、实验证实VCAN与COL1A1的变化与心梗致心衰有关,可能为心力衰竭的发展、预后提供可供参考的信息。3、利用网络药理学技术对生脉注射液的靶标与心梗致心衰演变过程中动态分子特征谱进行分析,结果表明生脉注射液在心梗致心衰演变过程中的主要干预环节可能与减轻心肌纤维化损伤有关;动物实验证实生脉注射液能够减缓心梗导致的心肌纤维化损伤,细胞实验证实生脉注射液具有降低Ang Ⅱ引起的心肌细胞损伤的作用。本研究表明基于心梗致心衰的动态分子特征谱解析已上市中成药在心梗到心衰演变过程中主要干预环节分析策略具有可行性。创新点1、心梗致心衰的演变过程包括心肌细胞丢失、神经体液系统的激活等多个生物学过程,静态的观察心梗与心衰制约了对其疾病演变过程的解析。本研究关注于心梗致心衰演变过程的动态变化,通过对心梗致心衰的疾病表型与分子变化进行分析,揭示心梗致心衰的动态演变过程,并在此基础上更准确地筛选心梗致心衰早期预警标志物;2、对心梗致心衰演变过程进行研究,提出COL1A1与VCAN可能为心梗致心衰潜在早期预警标志物;3、本研究以生脉注射液为范例,采用“动态分子特征谱-主要干预环节-实验验证”的分析策略,对生脉注射液的主要干预环节进行预测分析并加以验证。本研究将为其他已上市中成药在心梗致心衰演变过程中的精准应用提供研究策略。
王擎擎[5]（2021）在《活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究》文中提出背景:当代以干细胞技术为核心的再生医学的迅速发展,为心肌梗死的治疗带来新的希望,其中干细胞移植治疗心梗,有望修复坏死的心肌组织,改善受损的心功能,但是梗死区缺血、缺氧局部微环境使MSCs移植后存活率降低,极大地限制了 MSCs用于治疗MI的疗效。中药促进MSCs移植后存活的研究目前也显示出了很好的疗效,可以调控MSCs的归巢、定植,提高MSCs移植后存活率。导师姚魁武教授基于中医胸痹心痛“阳微阴弦”的基本病机,常用活血温通法治疗冠心病,临床疗效显着,并根据多年临床经验拟定了具有活血温通效果的经验方—活血温通方。我们前期研究也发现活血温通方可以显着改善心肌缺血模型组大鼠心功能,明显缩小心肌梗死面积,而且能够降低炎症反应、抑制心肌细胞凋亡、减少胶原纤维面积以及促进血管新生,同时发现活血温通方减轻心肌缺血损伤可能与Sirt1信号通路激活有关。而活血温通方联合MSCs移植治疗心梗,还没有相关的报道。目的:1.总结导师姚魁武教授活血温通法治疗冠心病阳虚证的用药规律、治疗思路,并进行系统的经验总结。2探索活血温通方对BMSCs移植治疗心梗疗效的影响以及可能的作用机制。方法:1.收集2016年1月—2020年12月就诊于中国中医科学院广安门医院姚魁武主任医师门诊,应用中药汤剂治疗且符合纳排标准的全部初诊原始病案。通过“中医传承计算平台（V3.0）”软件系统进行数据分析,根据分析得到到药物频次、常用药物组合、潜在处方等,分析探讨姚魁武教授活血温通法治疗冠心病的用药规律、诊疗思路,并做系统总结。2.提取大鼠BMSCs,培养至第三代时,用流氏细胞仪进行细胞鉴定。用活细胞染色剂CM-Dil进行荧光标记,以检测移植后细胞的存活情况。3.通过结扎左冠状动脉前降支制备心机梗死模型。SD大鼠随机分为5组：假手术组（Sham组）：冠状动脉只穿线不结扎，术后灌胃纯水，持续28天；心梗组（MI组）:按AMI造模方法进行造模,造模成功后于梗死区边缘心肌组织的2个位点直接注入共100μL的PBS。术后灌胃纯水,持续28天;BMSCs移植组（BMSCs组）:按AMI造模方法进行造模,造模成功后于梗死区边缘心肌组织的2个位点直接注入共100μL的MSCs单细胞悬液（细胞浓度3x106个/100μL）。术后灌胃纯水,连续28天;活血温通方组（HXWTF组）:造模方法同心梗组。术后灌胃活血温通方,连续28天;活血温通方+BMSCs移植组（BMSCs+HXWTF组）:造模方法同BMSCs移植组。术后灌胃活血温通方,连续28天。4.超声心动图检测大鼠心功能、TTC染色用于观察心肌梗死面积大小、HE染色观察心梗大鼠心肌组织形态的改变、荧光显微镜观察BMSCs移植后的存活情况。5.用WST-1法测定大鼠血清SOD活力和TBA法测定大鼠血清MDA水平,以评价各组氧化损伤程度;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡;采用ELISA试剂盒检测大鼠血清中炎性因子TNF-a、IL-6、IL-10与生长因子VEGF、bFGF水平,评价炎症反应程度;天狼猩红染色检测各组大鼠心肌纤维化程度;免疫组织化学染色检测梗死边缘区α-SMA和CD31的表达情况,以评价血管新生情况;Western blotting检测心肌组织Sirt1、NF-κB、FoxO1和p53的蛋白的表达水平。结果:1.从用药频次分析,196张处方中,共137味中药,用药频次≥20的中药有39味,用药频次≥50的有22味,用药频次≥50按频次由高到低依次为丹参（193）,桂枝（164）,砂仁（123）,川芎（117）,瓜蒌（109）,白芍（105）,炙甘草（95）,鸡血藤（93）,茯苓（88）,柴胡（87）,炒枳壳（80）,当归（78）,干姜（77）,炒白术（76）,杜仲（64）,党参（61）,麦冬（59）,肉苁蓉（58）,炒酸枣仁（56）,薤白（54）,葛根（54）,五味子（50）。2.196张处方中的137味中药按功效共分为16类,根据药物功效使用频次由高到低排列前10位的依次为补虚类（769）,活血化瘀类（436）,温里类（339）,清热类（210）,化湿类（198）,解表类（184）,理气类（177）,化痰类（155）,利水渗湿类（119）,安神类（114）。3.从药物组合频次分析,药物组合频次≥90的由高到低依次是丹参-桂枝（162）,丹参-砂仁（123）,丹参-川芎（115）,丹参-瓜蒌（108）,丹参-白芍（104）,丹参-桂枝-砂仁（99）;桂枝-砂仁（99）。基于关联规则深入分析用药组合,导师活血温通法治疗冠心病常用的2味药的组合是丹参-瓜蒌,丹参-砂仁,丹参-桂枝,丹参-鸡血藤等;3味药的组合是丹参-砂仁-瓜蒌,丹参-桂枝-瓜蒌,丹参-桂枝-鸡血藤等。从用药关联规则网络拓扑图可以看出,关联性比较大的药物组合是丹参、桂枝、鸡血藤、瓜蒌、川芎、砂仁。4.基于复杂算法的聚类分析在深入挖掘可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的核心组合。3种药物聚类核心组合为丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,鸡血藤;丹参,桂枝,川芎,白芍,砂仁;丹参,桂枝,川芎,砂仁,茯苓。4种药物聚类核心组合为;丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,川芎,鸡血藤;丹参,桂枝,麦冬,炙甘草,川芎,生地黄;丹参,桂枝,砂仁,鸡血藤,川芎,降香;丹参,桂枝,砂仁,干姜,茯苓,瓜蒌。5种药物聚类核心组合为;丹参,桂枝,鸡血藤,瓜蒌,川芎,党参;桂枝,丹参,麦冬,川芎,炙甘草,炒白术;丹参,桂枝,干姜,砂仁,茯苓,黄连;丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,川芎,白芍;丹参,砂仁,桂枝,川芎,鸡血藤,降香。5.基于方剂频数分析,可以得出196例病案中共涉及方剂54个,方剂频数为2以上的药物有32个,方剂频数为5以上的方剂有24个,方剂频数为10以上的方剂有13个,方剂频数为20以上的药物有6个。可以看出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂有丹参饮（118）,四逆散（73）,桂枝甘草龙骨牡蛎汤（25）苓桂术甘汤（23）、瓜蒌薤白白酒汤（21）等。6.根据方剂配伍的使用频次,可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂配伍是丹参饮-四逆散（47）,丹参饮-黄芪赤风汤（11）,丹参饮-交泰丸（11）,丹参饮-瓜蒌薤白白酒汤（11）,丹参饮-半夏泻心汤（11）,丹参饮-瓜蒌薤白半夏汤（11）等。基于关联规则深入分析用方组合,可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂配伍是丹参饮-四逆散-瓜蒌薤白半夏汤,丹参饮-四逆散-黄芪赤风汤,丹参饮-四逆散-桂枝甘草龙骨牡蛎汤等。根据方剂组合规律关联规则网络拓扑图可以看出关联比较大的方剂是丹参饮、四逆散、生脉散、桂枝甘草龙骨牡蛎汤、瓜蒌薤白半夏汤、瓜蒌薤白白酒汤、交泰丸等。基于复杂算法的聚类分析在深入挖掘可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的核心方剂组合是生脉散,丹参饮,枳实薤白桂枝汤,补中益气汤,四君子汤;丹参饮,交泰丸,半夏泻心汤,苓桂术甘汤,越鞠丸;丹参饮,四逆散,黄芪赤风汤,瓜蒌薤白半夏汤,桂枝甘草龙骨牡蛎汤。7.BMSCs的鉴定:用流氏细胞仪检测第3代BMSCs表面标记物CD44、CD90、CD45的表达情况,结果显示CD44表达率为99.2%,CD90表达率为97.4%,CD45的表达率为6.7%。8.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心功能的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组EF均有明显改善（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,活血温通方联合 BMSCs 移植组 EF比BMSCs移植组和活血温通方组改善明显（***P<0.001,**P<0.01）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组FS均有明显改善（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,活血温通方联合BMSCs移植组FS 比 BMSCs移植组和活血温通方组改善明显（***P<0.001,***P<0.001）。9.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心肌梗死面积的影响:假手术组无梗死,完整心脏表面和心脏切片均呈现红色,无苍白色区域。心梗组完整心脏表面和心脏切片苍白色区域均最大,故心梗面积最大,且心梗处明显凹陷,心梗处心肌明显变薄。BMSCs移植组和活血温通方组较心梗组,完整心脏表面和心脏切片的苍白色区域均明显减少,说明BMSCs移植和活血温通方药物干预均能减少心梗面积。活血温通方联合BMSCs移植组心脏苍白色区域最小,心梗处轻微凹陷,说明活血温通方能提高BMSCs移植改善心梗大鼠心肌梗死面积的疗效。10.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心肌组织形态的影响:HE染色显示与假手术组相比,其余各组梗死区均有不同程度的炎性细胞浸润。心梗组细胞排列紊乱,细胞间隙增大,炎性细胞浸润最严重。BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组这些病变均有明显改善,炎性细胞浸润有不同程度的降低。与BMSCs移植组、活血温通方组相比较,活血温通方联合BMSCs移植组细胞排列更有序,炎性细胞浸润更少。11.活血温通方对BMSCs移植四周后存活的影响:在全景数字扫描显微镜下观察,可以看到活血温通方联合BMSCs移植组红色荧光分布更广。红色荧光与蓝色荧光重叠的数量明显更多。12.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清SOD、MDA的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组SOD活力均有显着升高（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组SOD活力均有显着升高（***P<0.001,**P<0.01）;与心梗组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组MDA水平均有显着降低（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs 移植组 MDA 均有显着降低（***P<0.001,**P<0.01）。13.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠心肌细胞凋亡的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组细胞凋亡水平显着降低（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs 移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组细胞凋亡水平均有显着降低（***P<0.001,***P<0.001）。14.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-10的影响:与假手术组相比,MI组TNF-α、IL-6和IL-10水平水平显着升高（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合 BMSCs 移植组 TNF-α 显着降低（**P<0.01,**P<0.01,***P<0.001）,IL-6 显着降低（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）,IL-10 显着升高（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs 移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组TNF-α显着降低（**P<0.01,**P<0.01）,IL-6显着降低（***P<0.001,**P<0.01）,IL-10显着升高（***P<0.001,***P<0.001）。15.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠心肌纤维化的影响:与假手术组相比,MI组心肌纤维化明显（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组心肌纤维化面积明显减少（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组心肌纤维化面积明显减少（*P<0.05,**P<0.01）。16.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠梗死边缘区α-SMA、CD31表达的影响:与假手术组相比,MI组α-SMA、CD31的表达明显增多（***P<0.001,**P<0.01）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs 移植组 α-SMA、CD31 的表达均显着增多（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组 α-SMA、CD31 的表达显着增多（**P<0.01,*P<0.05;*P<0.05,***P<0.001）。17.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清生长因子VEGF、bFGF的影响:与假手术组相比,MI组VEGF、bFGF水平显着升高（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组VEGF、bFGF 显着升高（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组VEGF、bFGF显着升高（***P<0.001,***P<0.001）。18.活血温通方联合BMSCs移植对心肌组织SIRT1、NF-kB、FoxO1和p53蛋白表达的影响:与假手术组相比,MI组Sirt1的表达明显降低（***P<0.001）,NF-kB、Foxo1、p53 的表达明显升高（**P<0.01,**P<0.01,**P<0.01）。与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组Sirt1的表达显着升高（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,NF-κB的表达显着降低（*P<0.05,**P<0.01,**P<0.01）,FoxO1 的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05,*P<0.05）,p53 的表达显着降低（*P<0.05,**P<0.01,**P<0.01）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组Sirt1的表达均显着升高（**P<0.01,*P<0.05）,NF-kB的表达显着降低（**P<0.01,*P<0.05）,FoxO1的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05）,p53的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05）。结论:1.导师活血温通法治疗冠心病常活血药与温阳药并重,且用药平和,配伍主次分明,以经方为主。在活血温通法治疗冠心病的组方用药中常含有活血温通方,治疗效果短期的显着,可能是因为改善了心肌缺血缺氧微环境,也初步说明了活血温通方的临床疗效比较显着。2.活血温通方可能是通过改善心梗后缺血缺氧微环境而提高了 BMSCs移植后的存活率,而进一步提高BMSCs移植治疗心梗在抗细胞氧化损伤、抗细胞凋亡、降低炎症反应、抗心肌纤维化和促进血管新生方面的疗效,以及促进移植后的BMSCs的旁分泌功能而进一步修复受损的心肌,缩小心肌梗死面积,改善心功能。3.活血温通方能促进BMSCs移植后Sirt1信号通路的激活,以协同恢复心功能。
赵薇[6]（2021）在《基于miR-126-5p/Bcl-2通路的稳心汤抑制大鼠心梗后心肌细胞凋亡的机制研究》文中研究指明一、研究背景目前,我国约有2.9亿人患有心血管疾病（Cardiovascular disease,CVD）,并且由于急性冠脉综合征（Acute coronary syndrome,ACS）的高发病率,CVD的死亡率也越来越高,是人类主要的死亡原因之一。急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）是由冠状动脉血流急性减少或完全中断,心肌出现持续性的缺血、缺氧,继而导致局部心肌细胞坏死,是ACS的典型表现。现阶段,心血管疾病的初级预防和治疗手段已取得重大进展,AMI后30天死亡率在过去20年中虽有所下降,然而其作为各种急性和亚急性疾病的常见并发症,仍然是全球疾病中的第一杀手。AMI属中医学“心痛”、“胸痹”、“真心痛”等范畴,张仲景在《金匮要略》中首次对“胸痹”进行专门论述:“夫脉当取太过不及,阳微阴弦,即胸痹而痛,所以然者,责其极虚也。今阳虚知在上焦,所以胸痹心痛者,以其阴弦故也。”认为“阳微阴弦”是本病的病机。大量流行病学研究围绕AMI的中医证候特点及演变规律展开,根据现有研究和中医学认识,AMI病性以本虚标实为主,气虚、血瘀的病理状态贯穿冠心病病机始终。因此,在辨证论治原则的指导下,治法与治则结合,AMI往往以气虚血瘀为基本病机,益气活血是其主要治法。导师以多年临床经验为研究基础,以益气活血为主要遣方原则的稳心汤是治疗AMI的有效方剂,其组成如下:黄芪15 g,党参15 g,姜黄9g,莪术9g,赤芍15g,肉桂3g,川芎10g,大黄6g,瓜蒌12g,细辛3 g,甘草6 g,其作用机制待进一步研究。miRNA是一类长度约为22个核苷酸、内源性的非编码RNA,通过与信使RNA（mRNA）上的互补序列相结合,阻断信息翻译成蛋白质,在心脏的发育、生理和病理等过程发挥重要作用。由于miRNA的极高稳定性及在血液样本中的易检性,目前已作为生物标志物广泛应用于急性心梗、先天性心脏病、扩心病等多种心血管疾病的研究中。同时,通过调控miRNA表达水平,可以从细胞凋亡、心肌纤维化、炎症反应等方面发挥防治心血管疾病的作用,是近年来研究的热点。miR-126-5p是miR-126家族成员之一,在冠心病心绞痛、多支病变、SYNTAX高评分患者中表达水平显着降低,在缺血/再灌注损伤的心肌细胞中也呈现过低表达,其高水平表达能够抑制动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）及左室肥厚。Bcl-2基因是一种原癌基因,它具有抑制凋亡的作用,Bcl-2家族蛋白是调节细胞凋亡与自噬平衡的关键分子,是细胞凋亡线粒体途径的关键调节因素。在正常情况下,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase）以无活性酶原形式存在于活细胞中,一旦收到凋亡诱导信号刺激时,Caspase就被激活,引发Caspase级联反应介导细胞凋亡。当心肌细胞胞浆内的Bcl-2受到各种调控的刺激后,抑制线粒体通透性转化孔的过度开放,从而降低Caspase的活性,抑制心肌细胞凋亡。miR-126-5p作为调控心肌细胞凋亡的潜在靶点,可能与靶向调控Bcl-2表达有关。课题组前期利用稳心汤干预不稳定性心绞痛患者,发现稳心汤能上调不稳定性心绞痛患者miR-126-5p和Bcl-212（Bcl-2家族成员）表达水平,与Caspase-9、Caspase-3表达呈负相关。因此,本研究拟制备大鼠急性心肌梗死模型,观察稳心汤对miR-126-5p/Bcl-2/Caspase-9/Caspase-3调控网络的影响,探讨其抑制心肌细胞凋亡的可能分子机制。二、研究目的观察稳心汤对急性心肌梗死大鼠的心功能、心肌组织病理形态学、基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinase,MMP）和 miR-126-5p/Bcl-2 通路的影响,探讨稳心汤抑制心梗后心肌细胞凋亡的作用机制,进一步阐明益气活血理论的科学内涵。三、研究方法120只成年雄性Wistar大鼠行冠状动脉左前降支（Left anterior descending coronary artery,LAD）结扎术制备大鼠急性心肌梗死模型,随机分为模型组、盐酸曲美他嗪组、稳心汤低剂量组、中剂量组和高剂量组,另设假手术组,LAD仅穿线不结扎,各组连续灌胃给药28天。采用超声心动图检测左室射血分数（Left ventricular ejection fraction,LVEF）、左室短轴缩短率（Left ventricular fraction shortening,LVFS）、左室舒张末期内径（Left ventricular internal dimension diastole,LVIDd）和左室收缩末期内径（Left ventricular internal dimension systole,LVIDs）,观察心功能水平和心脏结构变化。称取大鼠体重（Body mass,BM）和左心室质量（Left ventricular mass,LVM）,计算左心室质量指数（Left ventricular mass index,LVMI）。HE染色观察心肌组织病理改变,Masson染色和胶原容积分数（Collagen volume fraction,CVF）检测大鼠心肌组织胶原的表达。酶联免疫吸附测定（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）的表达情况,实时荧光定量PCR法检测miR-126-5p、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3 表达水平,Western blot 法检测 MMP-2、MMP-9、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3等蛋白表达水平。四、研究结果（1）与假手术组相比,模型组大鼠LVEF、LVFS明显降低（P<0.05）,LVIDd、LVIDs显着增大（P<0.05）;与模型组相比,盐酸曲美他嗪组和稳心汤组LVEF、LVFS显着增高（P<0.05）,LVIDd、LVIDs显着降低（P<0.05）;稳心汤三组间比较,稳心汤中剂量组、高剂量组LVEF显着升高,稳心汤高剂量组LVFS显着增高,稳心汤高剂量组LVIDd显着降低,稳心汤中剂量组、高剂量组LVIDs显着减小（P<0.05）。（2）与假手术组相比,模型组LVMI明显升高（P<0.05）;与模型组相比,盐酸曲美他嗪组和稳心汤组LVMI显着减小（P<0.05）;稳心汤低剂量组、中剂量组LVMI均减小,但差异无统计学意义（P>0.05）。（3）与假手术组相比,HE染色观察到模型组心肌纤维明显断裂,散乱排列,着色深浅不一,细胞间隙增宽,盐酸曲美他嗪组和稳心汤组细胞排列较整齐,着色较均匀;Masson染色可见模型组心梗后心肌组织大量胶原沉积,与假手术组相比,CVF显着升高（P<0.05）,盐酸曲美他嗪组和稳心汤组胶原沉积明显减少,CVF均降低（P<0.05）;与稳心汤低剂量组相比,稳心汤中剂量组、高剂量组CVF显着降低（P<0.05）。（4）与假手术组相比,模型组大鼠血清中TNF-α表达水平升高（P<0.05）;与模型组相比,盐酸曲美他嗪组和稳心汤组大鼠血清中TNF-α表达水平均显着降低（P<0.05）;稳心汤低剂量组、中剂量组、高剂量组三组间无显着差异（P>0.05）。（5）与假手术组相比,模型组大鼠心梗后心肌组织中miR-126-5p表达显着减少（P<0.05）,Bcl-2 基因表达也呈下降趋势（P<0.05）,Caspase-9、Caspase-3基因表达增加（P<0.05）,同时,Bcl-2蛋白表达减少（P<0.05）,Caspase-9、Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达增加（P<0.05）;与模型组相比,盐酸曲美他嗪组和稳心汤组心梗后心肌组织中miR-126-5p表达均显着增加（P<0.05）,Bcl-2基因表达呈上升趋势（P<0.05）,Caspase-9、Caspase-3基因表达减少（P<0.05）,同时,Bcl-2 蛋白表达增加（P<0.05）,Caspase-9、Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达减少（P<0.05）;其中,稳心汤低剂量组、中剂量组、高剂量组三组间比较,稳心汤高剂量组miR-126-5p和Bcl-2基因表达显着上调（P<0.05）,稳心汤组三组间Caspase-9、Caspase-3基因表达无显着差异（P>0.05）,稳心汤高剂量组Bcl-2蛋白表达显着增加（P<0.05）,Caspase-9、Caspase-3蛋白表达无显着差异（P>0.05）,稳心汤高剂量组MMP-2、MMP-9蛋白表达显着减少（P<0.05）。五、研究结论心肌梗死后心肌组织中miR-126-5p表达呈现显着降低的特征,具有益气活血作用的稳心汤能改善急性心梗大鼠的心功能、抑制心肌纤维化、心室重构、改善MMPs代谢,其机制可能与上调miR-126-5p表达,并调控其下游凋亡通路Bcl-2/Caspase-9/Caspase-3的基因和蛋白表达有关。
谭宇[7]（2021）在《灵宝护心丹对心肌梗死大鼠梗死边缘区心肌的保护作用研究》文中研究指明急性心肌梗死发生时,围绕在梗死核心区周围的部分心肌组织尚存部分侧支血管的血流供应,这片区域称为梗死边缘区。虽然梗死边缘区内的心肌细胞不会因最初的缺血损伤而迅速发生死亡,但缺血引起的氧化应激能够激活凋亡信号转导通路,诱导心肌细胞凋亡;同时由于梗死核心区心肌组织坏死并释放多种炎症介质引发急性炎症反应,进而对梗死边缘区心肌细胞产生不可逆损伤。梗死边缘区心肌细胞仍然保留着部分功能性,可以对抗急性缺血缺氧造成的损伤。因此,挽救梗死边缘区心肌细胞对减少心肌梗死面积,改善预后具有重要意义。灵宝护心丹治疗冠心病具有确切的临床疗效。前期药理研究证明,灵宝护心丹具有增加冠脉流量、降低张力-时间指数和心肌耗氧量等作用,并且在临床中能显着减轻冠心病患者心绞痛症状、改善心功能等。基于前期研究基础,我们提出了“灵宝护心丹能够保护梗死边缘区心肌组织”的假说,并围绕假说进行了两方面的研究:（1）基于网络药理学探究灵宝护心丹治疗急性心肌梗死的潜在机制研究;（2）灵宝护心丹通过Sirt1介导的FoxO1/NF-κ B信号通路对急性心肌梗死大鼠梗死边缘区心肌的保护作用研究。研究一基于网络药理学探究灵宝护心丹治疗急性心肌梗死的潜在机制目的:利用网络药理学和分子模拟对接的方法探究灵宝护心丹治疗急性心肌梗死（AMI）的分子机制。方法:通过中药系统药理学数据库（TCMSP）、中医综合数据库（TCMID）获得灵宝护心丹所含9味中药相关活性化合物和作用靶点;通过人类基因数据库GeneCards获得AMI相关基因,利用String 11.0数据库获得目标基因;利用Cytoscape 3.7.2软件构建化合物-靶标网络,根据拓扑学参数筛选灵宝护心丹治疗AMI的核心靶点;利用Cytoscape 3.7.2插件ClueGO+Cluepedia对疾病和药物交集靶点进行基因本体（GO）生物学过程富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路注释分析。结果:灵宝护心丹化合物-AMI靶点网络包含57个疾病靶点和104个活性化合物,核心靶点包括 FOXO1、SIRT1、CASP3、IL-6、AKT1、SOD2、BCL2等。GO功能富集得到73个条目;KEGG富集到111个通路,并且被分类为16个具有统计学意义的亚组,主要涉及FoxO信号通路、HIF-1信号通路、凋亡信号通路、NF-κB信号通路等。使用GeneMANIA数据库构建核心靶标PPI网络,并对其进行生物学功能分析。利用分子对接模拟软件Autodock Vina 1.1.2,对关键药效分子与核心靶标进行配体-受体对接模拟计算。结论:本研究预测了灵宝护心丹治疗AMI的潜在分子机制,结果表明灵宝护心丹可能通过FoxO1信号通路抑制氧化应激作用诱导的内源性细胞凋亡,通过NF-κB信号通路减少心肌梗死后急性炎症反应,为进一步研究其药效和作用机制奠定基础。研究二灵宝护心丹通过Sirt1介导的FoxO1/NF-κB信号通路对急性心肌梗死大鼠梗死边缘区心肌的保护作用研究目的:观察灵宝护心丹通过Sirt1介导的FoxO1/NF-κB信号通路对急性心肌梗死大鼠梗死边缘区心肌的保护作用和分子机制。方法:91只健康雄性Wistar大鼠,随机分为7组:假手术组（Sham）,模型组（Model）,倍他乐克组（Betaloc）,灵宝护心丹低剂量组（LBHX-L）,灵宝护心丹中剂量组（LBHX-M）,灵宝护心丹高剂量组（LBHX-H）,灵宝护心丹中剂量组+EX527组（LBHX+EX527）,每组13只。Sham组和Model组大鼠每天给予等量生理盐水灌胃,Betaloc组大鼠每天给予0.9mg/kg倍他乐克灌胃,LBHX-L、LBHX-M、LBHX-H组大鼠每天分别给予灵宝护心丹0.45mg/kg、0.9mg/kg、1.8mg/kg灌胃,LBHX+EX527组大鼠每天给予灵宝护心丹0.9mg/kg灌胃,连续干预3周后采用结扎左冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型。在灵宝护心丹灌胃的基础上,LBHX+EX527组大鼠在造模前7天、5天、3天和1小时腹腔注射EX527 5 mg/kg。造模24小时后,通过心肌TTC染色观察心肌梗死面积;TUNEL染色法观察梗死边缘区心肌细胞凋亡情况;HE染色观察心肌组织结构和炎性浸润;ELISA法检测血清白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）;RT-qPCR检测梗死边缘区心肌组织内Sirt1及FoxO1 mRNA的表达;Western blotting法检测梗死边缘区心肌组织中Sirt1、FoxO1、SOD2、Bax及NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与Sham组相比,Model组大鼠心肌梗死面积显着增加（P<0.01）;细胞凋亡数目明显增加（P<0.01）;IL-1 β、IL-6、TNF-α和ICAM-1水平均显着上升（P<0.01）;此外Model组大鼠心肌组织中的Sirt1 mRNA和FoxO1 mRNA表达均明显降低（P<0.01）;心肌组织中的Sirt1、FoxO1和SOD2蛋白水平明显下降（P<0.01）,而Bax、NF-κB p65蛋白水平显着上升（P<0.01）。与Model组相比,LBHX-H组心梗面积明显减少（P<0.01）,细胞凋亡数目明显减少（P<0.01）,其他各项炎症因子水平均有所降低（P<0.01或P<0.05）,心肌组织Sirt1 mRNA和FoxO1 mRNA表达有所上升（P<0.05,P<0.01）,此外心肌组织中的Sirt1、FoxO1和SOD2蛋白水平有不同程度上升（P<0.01或P<0.05）,同时Bax蛋白水平有所下降（P<0.01）;与Model组相比,LBHX-M组心梗面积明显减少（P<0.01）,细胞凋亡数目有所减少（P<0.05）,血清IL-6、TNF-α水平有所下降（P<0.05,P<0.05）,心肌组织Sirt1 mRNA和FoxO1 mRNA表达有所上升（P<0.05,P<0.05）,而心肌组织中Sirt1、FoxO1和SOD2蛋白水平亦有不同程度增加（P<0.05,P<0.05,P<0.01）,NF-κB p65蛋白水平有所降低（P<0.05）;与Model组相比,LBHX-L组心梗面积无明显差异（P>0.05）,细胞凋亡比例未见下降（P>0.05）,相关炎症因子水平均无明显（P>0.05）,同时心肌Sirt1 mRNA和FoxO1 mRNA无统计学差异（P>0.05,P>0.05）。在使用灵宝护心丹基础上应用EX527抑制大鼠体内Sirt1活性,可在一定程度上拮抗灵宝护心丹对大鼠梗死边缘区心肌组织的凋亡、炎症的干预效应,与LBHX-M组相比,LBHX+EX527组,心肌细胞的凋亡比例有所回升（P<0.05）,血清TNF-α和ICAM-1水平有所回升（P<0.05）,FoxO1蛋白表达水平下降（P<0.05）,Bax的表达有所下降（P<0.01）,NF-κB p65蛋白水平回升（P<0.05）。结论:灵宝护心丹能够抑制大鼠梗死边缘区心肌组织细胞凋亡和炎症反应,降低梗死面积,改善心功能,其保护机制与Sirtl介导的FoxO1/NF-κB信号通路有关。
冀楠[8]（2021）在《益气活血方联合骨髓间充质干细胞干预心肌梗死后心室重构的实验研究》文中认为背景:急性心肌梗死（Acute Myocardial infarction,AMI）发生后,左心室大小、结构、功能改变,造成心室重构。心室重构（Ventricμlar remodeling,VR）是AMI向心力衰竭发展的主要病程。骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）可通过旁分泌、归巢、转化等方式缓解AMI后心肌损伤,改善心室重构。但由于AMI后内环境改变,造成BMSCs迁移效率低下。团队前期研究发现,益气活血方可改善AMI后炎性环境,改善AMI大鼠心肌损伤。但益气活血方是否可以促进BMSCs向AMI大鼠梗死部位迁移,发挥更好的心肌保护作用,值得深入研究。目的:探讨益气活血方联合骨髓间充质干细胞对心肌梗死后心室重构的干预作用,以mi RNA-210/BNIP3为切入点,从自噬-凋亡途径研究益气活血方联合干细胞对心室重构的可能的作用机制。方法:1、从SD大鼠骨髓中提取BMSCs,显微镜下观察细胞形态,流式检测细胞表面标志物。采用LAD结扎的方法建立大鼠心肌梗死模型,分为假手术组、模型组、益气活血方组、骨髓间充质干细胞组、益气活血方联合骨髓间充质干细胞组。造模2小时,心电图检测心肌缺血情况。药物干预4周后,心脏超声评价大鼠心脏结构和功能,TTC染色评价大鼠心肌梗死面积,HE染色观察大鼠心肌炎性细胞浸润情况、Masson染色观察心肌纤维组织病理改变。2、使用CM-DIL染料对BMSCs细胞膜标记染色。造模后隔天尾静脉移植入大鼠体内。干预4周后取材,运用免疫荧光检测BMSCs向梗死部位富集情况,免疫组化检测心肌组织中SDF-1/CXCR4蛋白的表达水平。3、TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡情况。Western Blot检测造模后各组大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、p62表达情况,凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达情况,目的蛋白BNIP3表达情况。RT-q PCR检测mi R-210、BNIP3 mRNA表达情况。结果:1、与假手术组相比,模型组大鼠的LVESD、LVEDD增加（P<0.01）,LVEF、LVFS降低（P<0.01）,提示模型组大鼠左室扩大,心功能下降,心脏结构改变;与模型组相比,益气活血方组、益气活血方联合骨髓间充质干细胞组的LVEDD、LVESD减小（P<0.05or P<0.01）,LVEF、LVFS升高（P<0.05 or P<0.01）,提示此两组可减轻心肌梗死所致的大鼠心脏损伤,减轻大鼠心脏结构改变;与模型组比较,骨髓间充质干细胞组的LVESD减小（P<0.01）,LVFS、LVEF升高,LVEDD减小,但差异无统计学意义（P>0.05）。与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组与骨髓间充质干细胞组LVESD、LVEDD增加（P<0.05 or P<0.01）,LVEF、LVFS降低（P<0.05 or P<0.01）。提示益气活血方联合骨髓间充质干细胞组对梗死心肌的保护作用最为显着。TTC染色结果显示:与假手术组相比,模型组梗死面积显着增加（P<0.01）。与模型组相比,各给药组梗死面积减少（P<0.05 or P<0.01）。与益气活血联合骨髓间充质干细胞组相比,其余两给药组梗死面积增大（P<0.05 or P<0.01）。HE染色结果显示:假手术组大鼠心肌细胞形态正常,细胞核结构清晰,居于中央,肌丝着色均匀,排列整齐规则,呈正常心肌细胞形态;与假手术组比较,模型组大鼠病变程度严重,心肌细胞形态不规则,排列紊乱,细胞核深染,炎性细胞浸润增多;与模型组比较,各给药组大鼠梗死范围缩小,心肌结构改变减轻,肌丝排列较规则,炎性细胞浸润和水肿减少。Masson染色结果显示:假手术组心肌细胞排列整齐,极少纤维组织沉积;模型组病变最为严重,染色显示在心肌梗死边缘区心肌细胞肥大,纤维组织沉积严重,排列紊乱,可见大面积蓝色纤维化;与模型组比较,各给药组显示胶原纤维沉积减少,心肌排列整齐。2、AMI大鼠造模后隔天经尾静脉移植BMSCs,荧光显微镜下观察其迁移情况,可见心肌组织中橙红色荧光,BMSCs向心肌梗死部位富集。免疫组化结果显示:与骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方联合骨髓间充质干细胞组SDF-1蛋白表达增加（P<0.05）,CXCR4表达无统计学差异。3、TUNEL染色显示假手术组未见明显阳性细胞核染色,阳性细胞核染色多见于模型组。与模型组相比,给药组阳性细胞核染色数量明显减少。凋亡相关蛋白WB检测显示:与假手术组比较,模型组大鼠心肌Bax蛋白表达上调（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达下调（P<0.01）,Caspase-3表达上调（P<0.01）,提示凋亡激活;与模型组比较,各给药组可下调Bax蛋白表达（P<0.01）,益气活血方组和益气活血方联合骨髓间充质干细胞组可下调Caspase-3蛋白表达（P<0.01）,上调Bcl-2蛋白表达（P<0.05）,骨髓间充质干细胞组Bcl-2蛋白表达有上调趋势,Caspase-3蛋白表达有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组和骨髓间充质干细胞组Bax、Caspase-3蛋白表达上调,（P<0.01 or P<0.05）,Bcl-2表达下调（P>0.05）,提示益气活血方联合骨髓间充质干细胞组抑制凋亡效应最显着。自噬相关蛋白WB检测显示:与假手术组比较,模型组大鼠心肌P62蛋白表达上调（P<0.05）,LC3B、Beclin-1蛋白表达下调,（P<0.01 or P<0.05）提示自噬激活;与模型组比较,各给药组可下调P62蛋白表达（P<0.01）,上调Beclin-1蛋白表达（P<0.01）,益气活血方组和益气活血方联合骨髓间充质干细胞组可上调LC3B蛋白表达（P<0.01 or P<0.05）,骨髓间充质干细胞组LC3B蛋白表达有上调趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组和骨髓间充质干细胞组P62蛋白表达上调（P<0.01 or P<0.05）,LC3B、Beclin-1表达下调（P<0.01 or P<0.05）,提示益气活血方联合骨髓间充质干细胞组诱导自噬效应最显着。BNIP3蛋白WB检测显示:与假手术组比较,模型组大鼠心肌BNIP3蛋白表达上调（P<0.01）;与模型组比较,各给药组可下调BNIP3蛋白表达（P<0.01 or P<0.05）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组和骨髓间充质干细胞组BNIP3蛋白表达上调（P<0.01）。mi R-210与BNIP3 Mrna PCR检测结果显示,与假手术组比较:模型组大鼠心肌mi R-210表达下调（P<0.01）,BNIP3 mRNA表达水平上调（P<0.01）;与模型组比较:益气活血方组和益气活血方联合骨髓间充质干细胞组可上调mi R-210表达（P<0.01 or P<0.05）,骨髓间充质干细胞组mi R-210表达有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）,各给药组可下调BNIP3 mRNA表达情况（P<0.01）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比:益气活血方组和骨髓间充质干细胞组mi R-210表达下降,（P<0.01）,骨髓间充质干细胞组BNIP3 mRNA表达水平上升（P>0.01）,益气活血方组BNIP3 mRNA有上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。提示益气活血方可能通过mi R-210/BNIP3通路发挥作用,且益气活血方联合骨髓间充质干细胞效用最为显着。结论:1、益气活血方联合骨髓间充质干细胞能够提高心梗后射血分数,改善大鼠的心脏结构,减轻心脏损伤。2、益气活血方通过干预SDF-1/CXCR4轴增加BMSCs向梗死区富集效率。3、益气活血方联合骨髓间充质干细胞可能通过调控mi RNA-210/BNIP3轴,影响心肌细胞自噬-凋亡,发挥抑制VR机制。
杨青[9]（2021）在《从血管新生方向探讨miR-221-3p对心肌梗死保护作用的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:通过建立心肌梗死大鼠模型,观察miR-221-3p在心肌梗死大鼠心肌组织的表达情况和miR-221-3p在心肌梗死急性期心肌组织表达的细胞类型;诱导HCMEC缺氧,观察不同缺氧时间对HCMEC miR-221-3p表达水平的影响;探讨miR-221-3p在心肌缺血时对HCMEC血管新生的调控及机制。方法:1、建立心肌梗死大鼠模型,将大鼠分为心肌梗死急性期组（心肌梗死后12h处死大鼠）和心肌梗死慢性期组（心肌梗死后4周处死大鼠）。qPCR检测大鼠心肌组织miR-221-3p的表达水平,免疫荧光共染色观察miR-221-3p在心肌梗死急性期心肌组织中表达的细胞类型。2、诱导HCMEC缺氧1h、2h、4h、8h、12h、24h,qPCR检测各时间点miR-221-3p的表达水平。转染miR-221-3p模拟物和抑制剂,分为5组:（1）空白对照组;（2）mimic组;（3）mimic NC组（4）inhibitor组;（5）inhibitor NC组,各组均在转染后缺氧4小时。采用Ang-2质粒过表达Ang-2蛋白。qPCR、W estern-blot检测Ang-2、CD34、IGF1R、IGF2、VEGFR2 m RNA及蛋白的表达,CCK-8检测细胞增殖,成管实验检测HCMEC在体外的成管能力。结果:1、qPCR结果显示:与对照组比较,大鼠心肌梗死后12h心肌组织中miR-221-3p的表达水平明显升高（P（27）0.01）;与非梗死区比较,梗死周边区心肌组织中miR-221-3p上调（P（27）0.01）;与对照组比较,心肌梗死4周时梗死组心肌组织中miR-221-3p的表达水平降低（P（27）0.05）。2、免疫荧光共染色结果显示:在大鼠心肌梗死急性期miR-221-3p在心肌细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞中都有表达。3、qPCR结果显示,HCMEC缺氧4小时miR-221-3p表达水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义（P（27）0.05）。4、CCK-8实验结果显示:在缺氧条件下miR-221-3p mimic组OD值在12～72h均较对照组低,差异有统计学意义（其中72h P（27）0.05,其余时间点P<0.01）。在缺氧条件下miR-221-3p inhibitor组OD值在12～72h均较对照组高,差异有统计学意义（P<0.01）。5、细胞成管实验结果显示:在缺氧条件下过表达miR-221-3p导致HCMEC管腔形成数减少,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。在缺氧条件下转染miR-221-3p抑制剂后导致HCMEC管腔形成数增多,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。6、Western-blot结果显示:缺氧条件下过表达miR-221-3p可致HCMEC CD34、IGF1R、IGF2、VEGFR2、Ang-2蛋白表达水平减少,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。缺氧条件下转染miR-221-3p抑制剂后HCMEC CD34、IGF1R、IGF2、VEGFR2、Ang-2蛋白表达水平升高,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。7、qPCR及Western-blot结果显示,缺氧条件下过表达Ang-2导致HCMEC CD34、IGF1R、IGF-2、VEGFR2 m RNA和蛋白的表达水平升高,与对照组及mimic NC组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论:1、大鼠心肌梗死急性期心肌组织miR-221-3p表达水平升高,心肌梗死慢性期心肌组织miR-221-3p表达水平降低。在大鼠心肌梗死急性期miR-221-3p在心肌细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞中都有表达。2、缺氧条件下miR-221-3p可能靶向Ang-2抑制心脏微血管内皮细胞向尖端细胞转化。3、心肌梗死急性期miR-221-3p的上调对心肌梗死是有保护作用的,其机制可能是miR-221-3p靶向Ang-2抑制心肌梗死后的异常血管新生,从而减轻血管渗漏和微血管灌注不足。
刘俊丽[10]（2021）在《新型Pyxinol衍生物的合成、生物活性及药代动力学研究》文中研究指明为改善先导化合物pyxinol的药代动力学性质,进一步增强其药理活性,本论文在综述pyxinol和其衍生物、以及抗心肌缺血药物研究进展基础上,综合运用药物合成、生物活性筛选以及药代动力学等多项技术,高效制备了系列新pyxinol脂肪酸酯衍生物、系统筛选了抗心肌缺血和抗心衰生物活性、早期评价了药代动力学参数,成功筛选出一个具有良好心脏保护作用的创新候选化合物。论文所取得的主要创新性成果如下:（一）新型pyxinol脂肪酸酯衍生物的合成为避免所合成的衍生物脂溶性过强,论文采用28个碳的饱和脂肪酸,与pyxinol的C3/C12/C25-OH进行酯化,设计并合成了系列衍生物。通过理化性质分析、核磁共振及高分辨率质谱鉴定了32个衍生物的结构,包括:C-3位单酯化产物7个、C-12位单酯化产物7个、C-3,12位双酯化产物5个、C-12,25位双酯化产物6个、C-3,12,25位三酯化产物7个。除化合物1,7外,其余30个衍生物均为首次合成的新化合物。（二）Pyxinol脂肪酸酯衍生物心脏保护作用及机制研究基于文献报道的先导化合物pyxinol具有良好的心脏保护作用,论文对所合成的pyxinol脂肪酸酯衍生物继续开展了心脏保护作用的评价及作用机制的探讨,主要包括抗心肌缺血和抗心衰两个方面的研究。1、对H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响以H2O2刺激H9c2心肌细胞,建立体外心肌细胞损伤模型,采用CCK-8法测定32个脂肪酸酯衍生物对损伤细胞活力的影响。结果表明,pyxinol及其衍生物对H9c2细胞损伤呈现不同程度的保护作用,活性强弱依次为C-3位单酯化产物>C-3,12,25位三酯化产物>C-3,12位双酯化产物>pyxinol>C-12位单酯化产物>C-12,25位双酯化产物,推断C-3位酯键对活性贡献最大,为主要活性基团。所有衍生物中,化合物5（3-己酰-pyxinol）对H9c2细胞损伤的保护作用最强,且呈剂量依赖性,可能是通过提高细胞内SOD活性、减少MDA生成、抑制脂质过氧化反应进而减轻细胞损伤程度来发挥心肌细胞保护作用。2、化合物5对心肌缺血模型大鼠的干预作用采用左前降支冠状动脉结扎法建立大鼠急性心肌缺血模型,灌胃给予化合物5（5、10、20 mg/kg）。以心脏收缩力、心肌梗死面积、LDH、AST、CK、c Tn T、MDA及SOD为评价指标,考察治疗性给予化合物5的作用。结果表明,与模型组比较,化合物5可呈剂量依赖性地减少左心室容积（LVVs）和心肌梗死面积、增加射血分数（EF）、提高心脏收缩力;同时也明显降低LDH、CK、AST、c Tn T和MDA水平,提高SOD活性。与阳性对照药美托洛尔呈类似作用,说明化合物5对心肌缺血大鼠的心脏具有良好的保护作用。3、Pyxinol脂肪酸酯衍生物对ACE酶的抑制作用ACE在心衰中起重要作用,是充血性心力衰竭的病因。论文采用比色法,以赖诺普利为阳性对照药,测定了32个脂肪酸酯衍生物对ACE酶的体外抑制作用。其中化合物5和化合物9（3,12,25-三丙酰-pyxinol）显示出与赖诺普利（抑制率89.17%）相似的活性,抑制率分别为90.31%和87.02%,优于先导化合物pyxinol（57.23%）。化合物5、9和赖诺普利的IC50值分别为105 n M、114 n M和81 n M。研究证明化合物5、9在体外显示出良好的ACE酶抑制活性。分子对接结果表明,化合物5和9可选择性抑制ACE酶的C结构域。4、化合物5和9对心衰斑马鱼模型的干预作用斑马鱼是研究心力衰竭的理想模式动物之一。论文选择受精后48 h的野生型AB系斑马鱼,分别给予化合物5和9（0.5,1,10μg/m L）预处理4 h,加入维拉帕米建立心力衰竭模型,以心率、心脏输出、射血分数、缩短分数、心脏扩大以及静脉充血为指标,评估斑马鱼的心脏功能。结果表明,浓度为1μg/m L的化合物5和9均可减少心脏扩张和静脉充血、增加心输出量、心率、射血分数和缩短分数。其中化合物5生物活性强于化合物9,并显示出与依那普利相似强度的活性。5、化合物5抗心衰的代谢组学研究采用基于UPLC-Q/TOF-MS代谢组学技术,对化合物5干预心衰斑马鱼进行分析。结果表明,与正常斑马鱼比较,心衰斑马鱼中多种内源性代谢物含量发生明显改变,经化合物5干预,胆碱、丙酮酸、花生四烯酸等25种内源性代谢物的水平可显着回调,推断化合物5通过干预花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢、亚油酸代谢、鞘脂代谢、叶酸生物合成代谢、丙酮酸代谢、苯丙氨酸代谢和嘌呤代谢等8条代谢途径发挥抗心衰作用。首次发现叶酸生物合成代谢途径与心衰有关。（三）灌胃给予化合物5的大鼠药代动力学研究1、灌胃给予化合物5的“血药浓度-时间曲线”研究首次建立了HPLC-ELSD分析大鼠血浆中化合物5的定量方法,并测定了灌胃给予化合物5（20.0、40.0、80.0 mg/kg）的大鼠血药浓度-时间曲线,获得药动学参数。结果表明,化合物5体内动力学属线性过程,且在大鼠体内的药代动力学行为不存在性别差异。与文献报道的先导化合物pyxinol比较,化合物5在体内消除缓慢、消除时间明显延长、循环时间较长。首次对主要代谢产物pyxinol血药浓度进行了定量分析。结果表明,在化合物5达峰前,血浆中主要含有原型药物;在达峰至20 h的消除相期间,血浆中同时含有原型药物和其代谢产物;给药20 h至40 h期间,血浆中则主要含有代谢产物pyxinol。2、灌胃给予化合物5的生物利用度研究首次研究了静脉注射化合物5（10.0 mg/kg）的大鼠血药浓度-时间曲线,获得了T1/2、AUC、CL、Vd等基本参数。并以静脉给药AUC（0-t）为参比,计算出灌胃给予化合物5的绝对生物利用度为41.36%,与文献报道的先导化合物pyxinol的绝对生物利用度（43%）相似。3、化合物5的脂水分配系数测定化合物的亲脂性对整个药代动力学过程都有影响,尤其影响口服药物在机体的吸收。论文模拟胃肠道不同部位,采用摇瓶法使化合物5在p H 2.0、p H 5.8和p H 7.4等条件下于水-正辛醇缓冲溶液中达分配平衡,继而采用HPLC-ELSD技术测定两相中化合物5的浓度,获得了化合物5的脂水分配系数Log P为4.18,小于先导化合物pyxinol的Log P值（3.76）,说明结构中引入脂肪酰基团,可增加脂溶性。4、灌胃给予化合物5的生物转化研究应用UPLC-Q/TOF-MS技术结合UNIFI代谢物分析平台,首次对灌胃给予化合物5（80.0 mg/kg）的大鼠血浆、尿、粪及胆汁中主要代谢产物进行快速分析和鉴定。共鉴定了21个代谢物,包括I相代谢物6个和II相代谢物15个。I相代谢反应包括脱水、脱氢、加水、氧化、去己酰基、去己酰氧基等,II相代谢反应包括甲基化、乙酰化、磷酸化、硫酸化、半胱氨酸结合、甘氨酸结合、谷胱甘肽结合和葡萄糖醛酸化等。综上所述,本论文丰富了pyxinol的结构修饰,也筛选出一个活性良好、生物利用度较高的创新候选药物——化合物5（3-己酰-pyxinol）。该化合物具有良好的抗心肌缺血和抗心衰活性,体内消除缓慢、生物利用度较高。论文为其进一步研究与开发提供了理论基础和科学数据。
二、急性心肌梗死的细胞保护（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、急性心肌梗死的细胞保护（论文提纲范文）
（2）龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 上篇 文献综述 |
| 综述一 心肌缺血再灌注损伤与内质网应激 |
| (一) 内质网应激的主要路径 |
| (二) 内质网应激在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 线粒体功能障碍与心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| (一) 线粒体形态动力学异常 |
| (二) 线粒体能量代谢障碍 |
| (三) 活性氧产生过量 |
| (四) 钙稳态异常 |
| (五) 线粒体膜通透性改变 |
| 参考文献 |
| 综述三 心肌缺血再灌注损伤的中西医结合研究进展 |
| 1.中药复方汤剂 |
| 2.中成药 |
| 3.中药单体及有效成分 |
| 4.结语与展望 |
| 参考文献 |
| 下篇 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 龙牙楤木总皂苷对心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 实验器材和材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 基于线粒体功能障碍探讨龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 主要仪器和材料 |
| 2 实验方法 |
| 3.结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 基于内质网应激探讨龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 主要实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 1 研究的临床意义 |
| 2 龙牙楤木总皂苷抗MIRI的研究基础 |
| 3 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的选择 |
| 4 研究结果分析 |
| 参考文献 |
| 临床研究 中成药治疗心肌缺血再灌注损伤的系统评价 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）原花青素B2改善大鼠急性心肌梗死心室结构和功能的分子机制（论文提纲范文）
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 急性心肌梗死大鼠模型的制备 |
| 1.4 大鼠分组及处理 |
| 1.5 血液动力学参数的测定 |
| 1.6 HE染色检测 |
| 1.7 Real-time PCR检测 |
| 1.8 Tunel法检测心肌细胞凋亡 |
| 1.9 ELISA检测心肌相关炎性因子水平 |
| 1.1 0 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 原花青素B2对各组大鼠血液动力学参数的影响 |
| 2.2 原花青素B2对各组大鼠心肌组织HE染色的影响 |
| 2.3 原花青素B2对各组大鼠心肌肥厚及纤维化标志物基因表达水平的影响 |
| 2.4 原花青素B2对各组大鼠心肌组织细胞凋亡的影响 |
| 2.5 原花青素B2有效降低急性心肌梗死大鼠外周血中心肌相关炎性因子水平 |
| 3 讨论 |
（4）心梗致心衰潜在预警标志物发现及生脉注射液作用解析研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 心衰标志物研究进展 |
| 1 心肌细胞损伤与应激 |
| 1.1 心肌损伤 |
| 1.1.1 心肌肌钙蛋白(Cardiac troponin, cTn) |
| 1.1.2 心型脂肪酸结合蛋白(Heart fatty-acid binding protein, H-FABP) |
| 1.1.3 肌球蛋白轻链激酶(Myosin light chain 1,MLCK-Ⅰ) |
| 1.2 心肌压力 |
| 1.2.1 脑钠肽(Brain Natriuretic Peptides, BNPs) |
| 1.2.2 肾上腺髓质素(Adrenomedullin, ADM) |
| 1.2.3 神经调节蛋白(Neuregulin 1,NRG-1) |
| 2 神经激素类 |
| 2.1 内皮素-1(Endothelin-1,ET-1) |
| 2.2 精氨酸加压素(Arginine vasopressin, AVP) |
| 3 炎症与心室重塑 |
| 3.1 半乳糖凝集素-3(Galectin 3,Gal-3) |
| 3.2 生长分化因子15(Growth-differentiation factor 15, GDF-15) |
| 3.3 ST2 (Interleukin-1 receptor-like 1, ST2) |
| 3.4 基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases 9,MMP-9) |
| 3.5 C反应蛋白(C reactive protein, CRP) |
| 4 小结 |
| 综述二 生脉注射液在心血管疾病中的研究进展 |
| 1 生脉注射液在心血管疾病中的临床应用 |
| 1.1 心肌梗死 |
| 1.2 心力衰竭 |
| 1.3 心肌病 |
| 1.4 冠心病及其他 |
| 2 生脉注射液作用机制研究进展 |
| 2.1 调节能量代谢 |
| 2.2 减缓氧化应激损伤 |
| 2.3 抗炎作用 |
| 2.4 保护心肌细胞 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 心梗致心衰演变过程研究 |
| 第一章 心梗致心衰演变过程疾病表型变化研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂与耗材 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及心肌梗死模型的建立 |
| 2.2 取材及样本的处理与保存 |
| 2.3 ELISA法检测cTnT、BNP与NT-proBNP的表达水平 |
| 2.4 LDH与CK-MB检测 |
| 2.5 超声心动法检测心功能 |
| 2.6 HE染色与Masson染色 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 心肌酶与cTnT表达水平的变化 |
| 3.2 BNP与NT-proBNP表达水平的变化 |
| 3.3 心功能变化 |
| 3.4 HE与Masson染色结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 心梗致心衰演变过程心脏蛋白质组学研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 大鼠心肌组织蛋白样本的收集与制备 |
| 2.2 蛋白质组学分析 |
| 2.3 生物信息学和统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 心梗致心衰演变过程分子变化 |
| 3.2 心梗致心衰演变过程GO及通路富集结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 心梗致心衰潜在早期预警标志物的发现与验证 |
| 第一章 心梗致心衰潜在预警标志物的发现 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 非监督模式分析 |
| 2.2 早期预警标志物筛选 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 非监督模式分析结果 |
| 3.2 早期预警标志物筛选结果 |
| 第二章 心梗致心衰潜在预警标志物验证 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 ELISA法检测候选标志物表达水平 |
| 2.2 H9c2细胞复苏、培养与冻存 |
| 2.3 实验分组与处理 |
| 2.4 免疫荧光法检测BNP、ANP、VCAN与COL1A1表达水平 |
| 2.5 生脉注射液对COL1A1表达水平的影响 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠血清候选标志物验证结果 |
| 3.2 细胞水平BNP与ANP表达水平变化 |
| 3.3 细胞水平VCAN与COL1A1表达水平变化 |
| 3.4 生脉注射液干预后对COL1A1表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 生脉注射液在心梗致心衰演变过程中主要干预环节研究 |
| 第一章 基于网络药理学对生脉注射液主要干预环节预测分析 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 “成分-靶标”网络构建 |
| 2.2 生脉注射液高关联性靶标谱分析 |
| 2.3 功能与通路富集分析 |
| 2.4 生脉注射液干预环节预测结果 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 “成分-靶标”网络的构建 |
| 3.2 生脉注射液调控机制初步探究 |
| 3.3 主要干预环节分析结果 |
| 第二章 生脉注射液主要干预环节体内验证 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物与分组 |
| 2.2 取材及样本的处理与保存 |
| 2.3 心功能评价 |
| 2.4 HE染色与Masson染色 |
| 2.5 ELISA法检测PⅠCP、COL1A1、VCAN表达水平 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 生脉注射液能够改善心梗致心衰演变过程中心功能下降 |
| 3.2 生脉注射液能够降低心梗导致的心肌纤维化损伤 |
| 3.3 生脉注射液能够降低PⅠCP、VCAN与COL1A1的表达 |
| 第三章 生脉注射液主要干预环节体外验证 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组及给药处理 |
| 2.2 化学荧光法检测ROS含量 |
| 2.3 微板法检测LDH浓度 |
| 2.4 微板法检测胞内Ca~(2+)浓度 |
| 2.5 免疫荧光法检测ANP与CTGF表达水平 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 生脉注射液能够减缓细胞损伤 |
| 3.2 生脉注射液能够降低ROS的积累 |
| 3.3 生脉注射液能够降低胞内Ca~(2+)浓度 |
| 3.4 生脉注射液能够降低ANP、CTGF的表达水平 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（5）活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 活血温阳类药物治疗冠心病的文献研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药联合MSCs移植治疗心肌梗死的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 姚魁武教授论治冠心病阳虚证的经验以及发掘 |
| 导师姚魁武活血温通法治疗冠心病的经验总结 |
| 基于中医传承计算平台分析姚魁武教授治疗冠心病阳虚证用药特点 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 活血温通方联合BMSCs移植治疗大鼠急性心梗的疗效评价 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 活血温通方联合BMSCs移植改善大鼠心梗区缺血缺氧微环境的机制研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 小结 |
| 创新点与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 查新报告 |
（6）基于miR-126-5p/Bcl-2通路的稳心汤抑制大鼠心梗后心肌细胞凋亡的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词简表 |
| 综述一: 益气活血法治疗急性心肌梗死的研究进展 |
| 1 中医学对急性心肌梗死的认识 |
| 2 急性心肌梗死中医证候特征 |
| 3 益气活血法治疗急性心梗的现代医学研究 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二: miRNAs调控急性心肌梗死的研究进展 |
| 1 miRNA概述及生物学功能 |
| 2 miRNA作为急性心梗的潜在生物标志物 |
| 3 miRNA参与急性心梗的病理进程 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要实验仪器设备 |
| 1.5 器械及耗材准备 |
| 1.6 主要溶液的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 模型制备 |
| 2.2 分组及给药 |
| 2.3 取材 |
| 2.4 观察指标 |
| 2.5 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠一般情况 |
| 3.2 造模结果 |
| 3.3 超声心动图 |
| 3.4 左心室质量指数、左心室质量 |
| 3.5 各组大鼠病理切片染色情况 |
| 3.6 各组大鼠血清中TNF-α的表达情况 |
| 3.7 各组大鼠梗死后心肌组织中miR-126-5p、Bcl-2、Caspase-9/3表达水平 |
| 3.8 各组大鼠梗死后心肌组织中MMP-2/9、Caspase-9/3、Bcl-2蛋白表达水平 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）灵宝护心丹对心肌梗死大鼠梗死边缘区心肌的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中药对缺血性心脏病中的不同心肌细胞死亡方式的干预作用 |
| 1 心肌细胞凋亡 |
| 2 心肌细胞坏死 |
| 3 心肌细胞调节性坏死 |
| 3.1 心肌细胞坏死性凋亡 |
| 3.2 心肌细胞焦亡 |
| 3.3 心肌细胞铁死亡 |
| 4 小结和展望 |
| 参考文献 |
| 综述二: 中药保护梗死边缘区心肌细胞的研究进展 |
| 1 抗氧化应激 |
| 2 抑制心肌细胞凋亡 |
| 3 减轻急性无菌性炎症 |
| 4 调控心肌细胞自噬 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基于网络药理学探究灵宝护心丹治疗急性心肌梗死的潜在机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 活性化合物的收集 |
| 1.2 药物靶标的识别 |
| 1.3 化合物-靶标(C-T)网络的构建与拓扑分析 |
| 1.4 基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析 |
| 1.5 蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络的构建 |
| 1.6 化合物-靶标蛋白的分子模拟对接 |
| 2 结果 |
| 2.1 灵宝护心丹化合物-靶点网络的构建及拓扑分析 |
| 2.2 靶点生物功能及靶点-通路分析 |
| 2.3 PPI网络的构建和分析 |
| 2.4 分子对接模拟 |
| 3 讨论 |
| 3.1 灵宝护心丹治疗AMI的关键蛋白靶点及其生物学功能分析 |
| 3.2 灵宝护心丹治疗AMI的关键信号转导通路 |
| 3.3 灵宝护心丹所含关键活性化合物及其药理学作用 |
| 参考文献 |
| 第三部分 灵宝护心丹通过Sirt1介导的FoxO1/NF-κB信号通路对急性心肌梗死大鼠梗死边缘区心肌的保护作用研究 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 大鼠急性心肌梗死模型的建立 |
| 2.3 心肌TTC染色 |
| 2.4 组织病理形态观察 |
| 2.5 TUNEL法细胞凋亡检测 |
| 2.6 ELISA检测 |
| 2.7 RT-qPCR检测 |
| 2.8 Western blotting检测 |
| 2.9 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 大鼠存活率 |
| 2 大鼠心电图 |
| 3 大鼠心肌梗死面积 |
| 4 大鼠心肌组织病理形态改变 |
| 5 大鼠心肌组织细胞凋亡情况 |
| 6 大鼠血清相关炎症因子 |
| 7 大鼠心肌Sirt1和FoxO1 mRNA表达 |
| 8 大鼠Sirt1和下游蛋白表达 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）益气活血方联合骨髓间充质干细胞干预心肌梗死后心室重构的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 益气活血方联合骨髓间充质干细胞对大鼠心肌梗死心功能的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 实验二 益气活血方对骨髓间充质干细胞缺血心肌归巢影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 实验三:益气活血方联合骨髓间充质干细胞通过miRNA-210/BNIP3 通路影响自噬-凋亡机制 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 microRNA在心肌梗死后心室重构中的研究现状 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药治疗心肌梗死后心室重构的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（9）从血管新生方向探讨miR-221-3p对心肌梗死保护作用的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 实验第一部分:miR-221-3p在心肌梗死大鼠心肌组织中的细胞定位及表达水平 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 心脏组织切片HE染色 |
| 2.2 心肌梗死大鼠心肌组织中miR-221-3p的表达水平 |
| 2.3 miR-221-3p在心肌梗死急性期心肌组织中表达的细胞类型 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第3章 实验第二部分:miR-221-3p对人心脏微血管内皮细胞血管生成能力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 缺氧对人心脏微血管内皮细胞miR-221-3p表达的影响 |
| 2.2 miR-221-3p模拟物和抑制剂转染效果鉴定 |
| 2.3 缺氧条件下过表达 miR-221-3p 抑制人心脏微血管内皮细胞 Ang-2 蛋白的表达 |
| 2.4 缺氧条件下过表达miR-221-3p抑制人心脏微血管内皮细胞增殖 |
| 2.5 缺氧条件下过表达miR-221-3p抑制人心脏微血管内皮细胞成管 |
| 2.6 缺氧条件下过表达miR-221-3p抑制人心脏微血管内皮细胞CD34、IGF1R、IGF-2、VEGFR2 蛋白的表达 |
| 2.7 Ang-2 质粒转染效果鉴定 |
| 2.8 缺氧条件下过表达Ang-2 促进人心脏微血管内皮细胞CD34、IGF1R、IGF-2、VEGFR2 m RNA的表达 |
| 2.9 缺氧条件下过表达Ang-2 促进人心脏微血管内皮细胞CD34、IGF1R、IGF-2、VEGFR2 蛋白的表达 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 miR-221和心血管疾病相关性研究 |
| 参考文献 |
（10）新型Pyxinol衍生物的合成、生物活性及药代动力学研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 天然产物pyxinol的研究进展 |
| 1.1.1 Pyxinol简介 |
| 1.1.2 Pyxinol生物活性研究进展 |
| 1.1.3 Pyxinol结构修饰及其生物活性研究进展 |
| 1.2 抗心肌缺血药物的结构类型及作用机制 |
| 1.2.1 人工合成小分子药物 |
| 1.2.2 天然产物及其结构修饰产物 |
| 1.2.3 抗心肌缺血药物的作用机制 |
| 1.3 立题依据 |
| 1.4 论文拟解决的科学问题及研究内容 |
| 第二章 新型pyxinol脂肪酸酯衍生物的合成 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 原料与试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 合成方法及路线 |
| 2.3.2 分离纯化 |
| 2.3.3 结构鉴定 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 合成产物概况 |
| 2.4.2 合成产物结构鉴定 |
| 2.5 小结 |
| 第三章Pyxinol脂肪酸酯衍生物心脏保护作用及机制研究 |
| 第一节Pyxinol脂肪酸酯衍生物抗心肌缺血活性研究 |
| 3.1.1 对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响 |
| 3.1.2 化合物5对心肌缺血模型大鼠的干预作用 |
| 3.1.3 小结 |
| 第二节Pyxinol脂肪酸酯衍生物抗心衰活性研究 |
| 3.2.1 Pyxinol脂肪酸酯衍生物对ACE酶的抑制作用 |
| 3.2.2 化合物5和9对心衰斑马鱼模型的干预作用 |
| 第三节 化合物5抗心衰的代谢组学研究 |
| 3.3.1 实验材料 |
| 3.3.2 实验方法 |
| 3.3.3 实验结果与讨论 |
| 3.3.4 小结 |
| 第四章 灌胃给予化合物5的大鼠药代动力学研究 |
| 第一节 灌胃给予化合物5的吸收研究 |
| 4.1.1 灌胃给予化合物5的“血药浓度-时间曲线”研究 |
| 4.1.2 灌胃给予化合物5的生物利用度研究 |
| 4.1.3 化合物5的脂水分配系数测定 |
| 4.1.4 小结 |
| 第二节 灌胃给予化合物5的生物转化研究 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 实验结果与讨论 |
| 4.2.4 小结 |
| 第五章 总结 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
四、急性心肌梗死的细胞保护（论文参考文献）
- [1]缺氧诱导因子-1ɑ在缺血性心脏病治疗中的研究进展[J]. 翟淼浡,杜鑫,董彬昌,徐会圃. 国际医药卫生导报, 2022(02)
- [2]龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价[D]. 宋欣丽. 北京中医药大学, 2021(02)
- [3]原花青素B2改善大鼠急性心肌梗死心室结构和功能的分子机制[J]. 王芳娟,龙雪蛟,胡巨龙. 免疫学杂志, 2021(08)
- [4]心梗致心衰潜在预警标志物发现及生脉注射液作用解析研究[D]. 许静. 中国中医科学院, 2021(02)
- [5]活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究[D]. 王擎擎. 中国中医科学院, 2021(02)
- [6]基于miR-126-5p/Bcl-2通路的稳心汤抑制大鼠心梗后心肌细胞凋亡的机制研究[D]. 赵薇. 中国中医科学院, 2021(02)
- [7]灵宝护心丹对心肌梗死大鼠梗死边缘区心肌的保护作用研究[D]. 谭宇. 中国中医科学院, 2021(02)
- [8]益气活血方联合骨髓间充质干细胞干预心肌梗死后心室重构的实验研究[D]. 冀楠. 天津中医药大学, 2021(01)
- [9]从血管新生方向探讨miR-221-3p对心肌梗死保护作用的机制研究[D]. 杨青. 南昌大学, 2021(01)
- [10]新型Pyxinol衍生物的合成、生物活性及药代动力学研究[D]. 刘俊丽. 吉林大学, 2021(01)